Isolierung und Charakterisierung einer Rolipram-sensitiven-Phosphodiesterase aus Schweinecortex:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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1995
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1.
EINLEITUNG
9
1.1.
DEPRESSION
UND
ROLIPRAM
9
1.2.
ZELLULAERE
SIGNALTRANSDUKTION
12
1.3.
REGULATION
DES
INTRAZELLULAEREN
CAMP
DURCH
DIE
FAMILIEN
DER
PHOSPHODIESTERASE-ISOENZYME
13
1.3.1.
CA
2+
/CAM
STIMULIERTE
PDEASEN
16
1.3.2.
CGMP-STIMULIERTE
PDEASEN
16
1.33.
CGMP-INHIBIERTE
PDEASEN
16
1.3.4.
CGMP-SPEZIFISCHE
PDEASEN
17
1.35.
CAMP-SPEZIFISCHE
PDEASEN
18
1.4.
ISOLIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
DES
FAKTORS,
WOZU?
20
1.5.
ZIELSETZUNG
DIESER
ARBEIT
21
2.
MATERIAL
UND
METHODENTEII
I
UND
II
2.1.
CHEMIKALIEN
23
22.
METHODEN
ZUR
ISOLIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
EINER
RSPDE
23
2.2.1.
PUFFER
A
23
2.2.2.
PDE-NACHWEISMETHODEN
23
2.2.2.I.
3
H-ROLIPRAM-BINDUNGS-ASSAY
23
2.22.2.
PHOSPHODIESTERASE-ASSAY
I
27
2.2.23.
PHOSPHODIESTERASE-ASSAY
II
30
2.2.3.
GEWEBEPRAEPARATION
31
2.2.4.
CHROMATOGRAPHISCHE
VERFAHREN
31
2.2.4.I.
AFFINITAETS-CHROMATOGRAPHIE
31
2.2.4.2.
ANIONENAUSTAUSCH-CHROMATOGRAPHIE
AN
MONO
Q
HR
5/10
34
2.2.43.
GELFILTRATION
AN
SUPEROSE
6
HR
10/30
34
2.2.4.4.
HYDROPHOBE
INTERAKTIONS-CHROMATOGRAPHIE
AN
PHENYL-SUPEROSE
HR
5/5
35
2.2.5.
ELEKTROPHORETISCHE
METHODEN
35
2.25.1.
NATIVE
PAGE
(PHAST
SYSTEM)
35
2.25.2.
NATIVE
LINEARE
PAGE
UND
ENZYMELUTION
36
2.25.3.
NATIVE
LINEARE
GRADIENTEN
PAGE
UND
ENZYMELUTION
37
2.25.4.
SDS
PAGE
39
2.25.5.
SDS
PAGE
UND
ENZYMELUTION
40
2.2.6.
BESTIMMUNG
VON
K
D
UND
B
MAX
40
2.2.7.
BESTIMMUNG
DES
HILL-KOEFFIZIENTEN
42
2.2.8.
BESTIMMUNG
DER
IC
5
Q
FUER
(-)-ROLIPRAM
IN
VERSCHIEDENEN
REINIGUNGSFFAKTIONEN
42
2.2.9.
BESTIMMUNG
DER
IC
50
FUER
VERSCHIEDENE
PDE-INHIBITOREN
44
2.2.10.
WIRKUNG
VON
CGMP,
CAMP
UND
CA
2+
/CAM
AUF
DIE
RSPDE
45
2.2.11.
MICHAELIS-MENTEN-KINETIK
47
2.2.11.1.
BESTIMMUNG
VON
UND
V
MAX
MIT
UND
OHNE
FAKTOR
48
2.2.11.2.
BESTIMMUNG
DES
HEMMTYPS
MIT
ABSCHAETZUNG
DER
KJ
FUER
(-)-ROLIPRAM
49
23.
METHODEN
ZUR
ISOLIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
DES
FAKTORS
50
2.3.1.
NACHWEISMETHODE
FUER
DEN
FAKTOR
50
2.3.2.
PRAEPARATION
DES
FAKTORS
51
2.3.3.
CHROMATOGRAPHISCHE
VERFAHREN
51
23.3.1.
HYDROPHOBE
INTERAKTIONS-CHROMATOGRAPHIE
AN
PHENYL-SEPHAROSE
52
2.3.3.2.
HYDROPHOBE
INTERAKTIONS-CHROMATOGRAPHIE
AN
OCTYL-SEPHAROSE
52
2.3.3.3.
LONENAUSTAUSCH-CHROMATOGRAPHIE
AN
MONO
Q
HR
5/10
52
23.3.4.
REVERSED-PHASE-CHROMATOGRAPHIE
AN
PRO
RPC
HR
2/5
53
2.3.4.
SDS
PAGE
53
2.3.5.
EXPERIMENTE
ZUM
ADSORPTIONS-VERHALTEN
54
2.3.6.
WIRKUNG
UNTERSCHIEDLICHER
PROTEINE
AUF
DIE
3
H-ROLIPRAM-BINDUNG
55
2.3.7.
EINFLUSS
VON
DETERGENZIEN
AUF
DIE
3
H-ROLIPRAM-BINDUNG
55
2.3.8.
ADSORPTIONS-VERSUCHE
MIT
ROHEXTRAKT
55
2.3.9.
EXTRAKTIONS-VERSUCHE
56
2.3.10.
DIALYSE-VERSUCHE
56
2.3.11.
UNTERSUCHUNG
VERSCHIEDENER
SUBSTANZEN
AUF
FAKTOR-EIGENSCHAFTEN
57
2.4.
ALLGEMEINE
METHODEN
58
2.4.1.
PROTEINBESTIMMUNG
58
2.4.2.
UNSPEZIFISCHER
PROTEASE-ASSAY
58
2.4.3.
ENTSALZEN,
ENTFERNEN
VON
NIEDERMOLEKULAREN
SUBSTANZEN
59
2.4.4.
KONZENTRIERUNG
VON
PROBEN
59
2.4.5.
FAELLUNGS-METHODEN
60
2.4.6.
DETERGENZIEN
60
2.4.7.
SILANISIERUNG
60
2.4.8.
BEHANDLUNG
DER
REAKTIONSGEFAESSE
MIT
BSA
BZW.
DETERGENS
60
TEILT
3.
ERGEBNISSE
61
3.1.
ISOLIERUNG
UND
REINIGUNG
EINER
RSPDE
61
3.1.1.
NACHWEIS
EINER
RSPDE
61
3.12.
SCHEMA
I
ZUR
ISOLIERUNG
EINER
RSPDE
63
3.12.1.
GEWEBEPRAEPARATION
64
3.12.2.
AFFINITAETS-CHROMATOGRAPHIE
64
3.12.3.
LONENAUSTAUSCH-CHROMATOGRAPHIE
AN
MONO
Q
HR
5/10
64
3.12.4.
GEL-CHROMATOGRAPHIE
AN
SUPEROSE
6
HR
10/30
67
3.1.3.
BILANZ
70
3.1.4.
UNTERSUCHUNG
AUF
UNSPEZIFISCHE
PROTEASE-AKTIVITAET
72
3.1.5.
WEITERE
VERSUCHE
ZUR
REINIGUNG
EINER
RSPDE
72
3.I.5.I.
HYDROPHOBE
INTERAKTIONS-CHROMATOGRAPHIE
73
3.1.52.
SCHEMA
II
ZUR
ISOLIERUNG
EINER
RSPDE
75
32.
CHARAKTERISIERUNG
DER
RSPDE
79
32.1.
BESTIMMUNG
DES
NATIVEN
MOLEKULARGEWICHTS
79
32.1.1.
GELFILTRATION
AN
SUPEROSE
6
HR
10/30
79
32.1.2.
NATIVE
GRADIENTENGEL-ELEKTROPHORESE
(PHAST
SYSTEM)
79
32.1.3.
NATIVE
LINEARE
GEL-ELEKTROPHORESE
MIT
ANSCHLIESSENDER
ENZYMELUTION
80
32.1.4.
NATIVE
GRADIENTENGEL-ELEKTROPHORESE
MIT
ANSCHLIESSENDER
ENZYMELUTION
82
3.2.2.
BESTIMMUNG
DES
MOLEKULARGEWICHTS
NACH
DENATURIERUNG
84
32.2.1.
SDS
POLYACRYLAMIDGEL-ELEKTROPHORESE
84
32.2.2.
SDS
POLYACRYLAMIDGEL-ELEKTROPHORESE
MIT
ANSCHLIESSENDER
ENZYMELUTION
86
3.2.3.
STUDIEN
ZUM
BINDUNGS
UND
AFFINITAETSVERHALTEN
GEGENUEBER
(-)-ROLIPRAM
87
32.3.1.
BESTIMMUNG
VON
K
D
UND
B
MAX
87
32.3.2.
BESTIMMUNG
DES
HILL-KOEFFIZIENTEN
89
32.3.3.
BESTIMMUNG
DER
IC
50
FUER
(-)-ROLIPRAM
IN
VERSCHIEDENEN
REINIGUNGSFRAKTIONEN
90
3.2.4.
BESTIMMUNG
DER
IC50
FUER
VERSCHIEDENE
PDE-HEMMER
92
3.2.5.
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
WIRKUNG
VON
CGMP,
CAMP
UND
CA
2+
/CAM
AUF
DIE
RSPDE
93
3.2.6.
MICHAELIS-MENTEN-KINETIK
94
32.6.1.
BESTIMMUNG
VON
UND
V
MAX
,
EINFLUSS
DES
FAKTORS
95
3.2.62.
BESTIMMUNG
DES
HILL-KOEFFIZIENTEN
97
32.6.3.
BESTIMMUNG
DES
HEMMTYPS
MIT
ABSCHAETZUNG
DER
KJ
FUER
(-)-ROLIPRAM
99
4.
DISKUSSION
105
4.1.
NACHWEIS
UND
ISOLIERUNG
EINER
RSPDE
105
4.2.
CHARAKTERISIERUNG
DER
RSPDE
110
5.
ZUSAMMENFASSUNG
TEIL
I
116
TEILH
6.
ERGEBNISSE
118
6.1.
NACHWEIS
UND
ISOLIERUNG
DES
FAKTORS
118
6.1.1.
OPTIMIERUNG
DER
3
H-ROLIPRAM-BINDUNG
118
6.1.2.
VERSUCHE
ZUR
ISOLIERUNG
UND
ANREICHERUNG
DES
FAKTORS
120
6.2.
VERSUCHE
ZUR
CHARAKTERISIERUNG
DES
FAKTORS
125
6.2.1.
ADSORPTIONS-VERHALTEN
125
6.2.2.
UNTERSCHIEDLICHE
OBERFLAECHEN-BEHANDLUNG
DER
PROBENROEHRCHEN
130
6.2.3.
WIRKUNG
UNTERSCHIEDLICHER
PROTEINE
AUF
DIE
3
H-ROLIPRAM-BINDUNG
133
6.2.4.
EINFLUSS
VON
DETERGENZIEN
AUF
DIE
3
H-ROLIPRAM-BINDUNG
134
6.2.5.
ADSORPTIONS-VERSUCHE
MIT
ROHEXTRAKT
135
6.2.6.
EXTRAKTIONS-VERSUCHE
136
6.2.7.
DIALYSE-VERSUCHE
140
6.2.8.
UNTERSUCHUNG
WEITERER
SUBSTANZEN
AUF
FAKTOR-EIGENSCHAFTEN
140
7.
DISKUSSION
142
7.1.
NACHWEIS
UND
ISOLIERUNG
DES
FAKTORS
142
7.2.
VERSUCH
EINER
CHARAKTERISIERUNG
DES
FAKTORS
144
8.
ZUSAMMENFASSUNG
TEIL
II
147
9.
LITERATURVERZEICHNIS
149
ANHANG
I
ANHANG
N
LEBENSLAUF
DANKSAGUNG |
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| spelling | Pahlke, Gudrun Verfasser aut Isolierung und Charakterisierung einer Rolipram-sensitiven-Phosphodiesterase aus Schweinecortex vorgelegt von Gudrun Pahlke 1995 164 S. graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Berlin, Freie Univ., Diss., 1995 Rolipram (DE-588)4304904-7 gnd rswk-swf Phosphodiesterasen (DE-588)4174389-1 gnd rswk-swf Großhirnrinde (DE-588)4072114-0 gnd rswk-swf Schwein (DE-588)4053848-5 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Schwein (DE-588)4053848-5 s Großhirnrinde (DE-588)4072114-0 s Phosphodiesterasen (DE-588)4174389-1 s Rolipram (DE-588)4304904-7 s DE-604 DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=006877825&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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