Zur Raumstruktur der Pyruvat Formiatlyase: Proteinkristallisation und Suche nach Schweratomderivaten ; Photoaffinitätsmarkierung mit S-Ethyl-(8-azido)-CoA
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1995
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INHALT
A.EINLEITUNG
1
B.
ERGEBNISSE
UND
DISKUSSION
10
I.
KRISTALLISATION
DER
PFL
UND
DERIVATISIERUNGSEXPERIMENTE
10
MIT
SCHWERATOMVERBINDUNGEN
1
.ISOLIERUNG
UND
KRISTALLISATION
DER
PFL
10
1.1
.ISOLIERUNG
DER
PFL
14
1.2.KRISTALLISATION
DER
PFL
21
KRISTALLISATIONSMETHODEN
25
KRISTALLISATION
DER
PFL
28
BESTIMMUNG
DER
GRENZKONZENTRATION
VERSCHIEDENER
29
FAELLUNGSMITTEL
KRISTALLISATION
DER
PFL
MIT
DER
HANGING-DROP-TECHNIK
30
ZUCHT
VON
PFL-KRISTALLEN
MIT
DER
DIALYSEMETHODE
32
VERSUCH
DER
OPTIMIERUNG
DER
KRISTALLISATIONSBEDINGUNGEN
34
VERSUCH
DER
KRISTALLISATION
VON
PFL-LIGAND-KOMOLEXEN
37
2.
ABSCHAETZUNG
DES
AUFLOESUNG
DES
PFL-KRISTALLS
UND
DIE
39
CHARAKTERISIERUNG
DES
KRISTALLGITTERS
ABSCHAETZUNG
DER
AUFLOESUNG
DES
PFL-KRISTALLS
UND
DIE
BESTIMMUNG
DER
39
RAUMGRUPPE
UND
DER
GITTERKONSTANTEN
BESTIMMUNG
DER
ASYMMETRISCHEN
EINHEIT
(AE)
UND
ABSCHAETZUNG
DES
41
SOLVENSGEHALTES
DES
PFL-KRISTALLS
3.
PRAEOARATION
VON
SCHWERATOM-DERIVATKRISTALLEN
42
3.1.DERIVATISIERUNG
VON
KRISTALLEN
DURCH
TRAENKEN
IN
SCHWERMETALLHALTIGER
48
MUTTERLAUGE
BEI
RAUMTEMPERATUR
3.2.
EXPERIMENTE
ZUR
SELEKTIVEN
MODIFIZIERUNG
DER
GELOESTEN
PFL
AN
DEN
51
CYSTEINEN
418/419
MODIFIZIERUNG
DER
PFL
MIT
ELLMAN'S
REAGENZ
51
MODIFIZIERUNG
DER
PFL
MIT
HG(LL)-ORGANISCHEN
VERBINDUNGEN
53
SYNTHESE VON
NEUEN
QUECKSILBERORGANISCHEN
REAGENZIEN
ZUR
54
MODIFIZIERUNG
VON
PROTEINSTAEMMIGEN
SH-GRUOOEN
DIE
MODIFIZIERUNG
DER
PFL
IN
LOESUNG
58
3.3.MEDIEN
ZUM
AUFBEWAHREN,
WASCHEN
UND
TRAENKEN
VON
PFL-KRISTALLEN
59
ZUSAMMENSETZUNG
DES
WASCHMEDIUMS
60
ZUSAMMENSETZUNG
DES
AUFBEWAHRUNGSMEDIUMS
61
3.4.DERIVATISIERUNG
VON
KRISTALLEN
DURCH
TRAENKEN
IN
SCHWERMETALLHALTIG
EN
63
MEDIEN
BEI
0-5C
3.5,VERSUCH
DER
KRISTALLISATION
VON
SCHWERMETALL-PFL-KOMPLEXEN
67
ZUR
HERSTELLUNG
VON
PFL-SCHWERMETALL-DERIVATKRISTALLEN
3.6.DISKUSSION
69
.
CHARAKTERISIERUNG
DES
COA-PFL-KOMPLEXES
UND
DIE
70
SPEZIFISCHE
MODIFIZIERUNG
DER
PFL
IM
COA-BINDEORT
CHARAKTERISIERUNG
DES
KOMPLEXES
ZWISCHEN
COA
UND
PFL
DURCH
71
BINDUNGSSTUDIEN
BESTIMMUNG
DER
ANZAHL
DER
COA-BINDUNGSORTE
UND
DEREN
73
DISSOZIATIONSKONSTANTEN
BESTIMMUNG
DER
DISSOZIATIONSKONSTANTE
DES
PFL-3'-DEPHOS
75
PHO-COA-KOMPLEXES
UND
DES
PFL-COA-KOMPLEXES
IN
ANWESENHEIT
VON
PYRUVAT
ODER
OXAMAT
DISKUSSION
DER
BINDUNGSSTUDIEN
77
MODIFIZIERUNG
DER
PFL
IM
COA-BINDUNGSORT
DURCH
78
PHOTOAFFINITAETSMARKIERUNG
2.1
.DIREKTE
PHOTOAFFINITAETSMARKIERUNG
VON
PFL
MIT
COA
83
2.2.PHOTOAFFINITAETSMARKIERUNG
VON
PFL
MIT
8-AZIDO-COA-DERIVATEN
87
2.2.1
.VORUNTERSUCHUNGEN
ZURPHOTOLYSE
VON
8-AZIDO-AMP
88
UND
STABILITAET
DER
PFL
IM
UV-LICHT
BEI
313NM
2.2.2.SYNTHESE
EINES
8-AZIDO-COA-DERIVATES
ZUR
91
PHOTOAFFINITAETSMARKIERUNG
DER
PFL
8-AZIDOADENOSIN-3',5'-DIPHOSPHAT
(XXII)
95
S-BENZOYL-4-PHOSPHOPANTETHEIN
(XXV)
UND
96
S-ETHYL-4-PHOSPHOPANTETHEIN
(XXVI)
VERSUCH
DER
SYNTHESE
VON
8-AZIDO-COA
(XV)
97
SYNTHESE
VON
S-ETHYL-(8-AZIDO)-COA
(XIX)
101
2.2.3.HEMMUNG
DER
PFL-REAKTION
MIT
S-ETHYL-(8-AZIDO)-COA
103
2.2.4.MODIFIZIERUNG
DER
PFL
105
IRREVERSIBLE
INAKTIVIERUNG
DER
PFL
105
KOVALENTMODIFIZIERUNG
107
SPEZIFITAET
DER
KOVALENTMODIFIZIERUNG
108
2.2.5.SUBSTRATSPEZIFITAET
DES
ADENINBINDEBEREICHS
DER
110
COA-BINDESTELLE
2.2.6.DISKUSSION
112
YY.EXPERIMENTELLER
TEIL
UND
THEORETISCHER
ANHANG
113
1
.CHEMIKALIEN
UND
GERAETE
113
2.METHODEN
117
2.1.BAKTERIENZUCHT
UND
ISOLATION
DER
PFI
117
BAKTERIENZUCHT
117
ISOLIERUNG
DER
PFI
119
ZELLAUFSCHLUSS
MIT
LYSOZYM
119
ISOLIERUNG
DER
PFL
119
2.2.PROTEINBE
STIMMUNGEN
122
2.3.HERKUNFT
DER
PFL-MUTANTENPROTEINE
122
2.4.HERKUNFT
DES
AKTIVASEPRAEPARATES
122
2.5.AKTIVIERUNG
DER
PFL
UND
BESTIMMUNG
DER
PFI-AKTIVITAET
(STANDARDTEST)
123
2,FI.ETEKTROP
HO
RESEN
123
SDS-PAGE
(SDS-POLYACRYLAMIDGELELEKTOPHORESE)
NACH
LAEMMLI
123
ZWEIDIMENSIONALE
ELEKTROPHORESE
123
FAERBEN
UND
ENTFAERBEN
DER
GELE
124
2.7.WESTEMBLOTTING
ZWECKS
ANSEQUENZIERUNG
VON
PEPTIDKETTEN
124
2.8.VERFAHREN
BEIM
KRISTALLISIEREN
124
VORBEREITUNG
DER
PFL
FUER
DIE
KRISTALLISATION
125
KRISTALLISATION
UEBER
DIALYSE
125
VORBEREITUNG
UND
GEBRAUCH
DER
DIALVSEMEMBRAN
BEI
125
BEREITEN
DER
ZU
DIALYSIERENDEN
LOESUNGEN
126
KRISTALLISATION
UEBER
HANGING-DROP
127
SILICONISIEREN
VON
DECKGLAESERN
FUER
DIE
MIKROSKOPIE
127
KRISTALLISATIONSANSAETZE
127
2.9.ROENTGENBEUGUNGSMESSUNGEN
AN
KRISTA
LLEN
UND
DATENAUSWERUNA
128
2.10.BESTIMMUNG
DES
PKG
VON
5-THIO-2-NITR
OBENZOESAEURE
ML)
131
2.11.DERIVATISIERUNGEN
DERCYSTEINE
MIT
ELLMAN'S
UND
QU
ANTIFIZIERUNG
131
VON
SH-GRUPPEN
MIT
ELLMAN'S
TEST
2.1
2.RADIOAKTIVITAETSMESSUNG
132
2.13.SYNTHESE
VON
4-PHOSPHOPANTETHEIN
(XXIV),
S-BEN
Z
O
VL-4-PHOSPH&:
133
OANTETHEIN
(XXV)
UND
S-ETHYL-4-PHOSPHOPANTETHEIN
(XXVI)
4-PHOSPHOPANTETHEIN
(XXIV)
133
DIBENZYL
PHOSPHINAT
133
4-PHOSPHOOANTETHEIN
(XXIV)
134
S-BENZOYL-4-PHOSPHOPANTETHEIN(XXV)
136
S-ETHYL-4-PHOSPHOPANTETHEIN
(XXVI)
137
2.14.HERSTELLUNG
DES
COA-SYNTHETASE-PRAEPARATES
139
ANREICHERUNG
DER
COA-SYNTHETASE
139
TESTS
VERSCHIEDENER
ENZYMAKTIVITAETEN
IM
COA
140
SYNTHETASE-PRAEPARAT
COA-SYNTHETASE-T
EST
140
TEST
DER
PHOSPHOTRANSACETYLASE-AKTIVITAET
(PTA-AKTIVITAET)
142
TEST
DER
PYRUVAT
KINASE-AKTIVITAET
(PK-AKTIVITAET)
143
TEST
DER
ATPASE-AKTIVITAET
143
2.15.ENZYMATISCHE
SYNTHESEN
VON
[U-^C-ADENOSINJ-COA
UND
144
[U
14C-ADENOSIN]-BZW.
[G
3
H]-3'-DEPHOSPHO-COA
UND
VON
ACETYL-COA
SYNTHESE
VON
[U
14
C-ADENOSIN]-COA
144
SYNTHESE
VON
[U
14
C-ADENOSIN]-3
,
-DEPHOSPHO-COA
/
147
[G
3
H]-3'-DEPHOSPHO-COA
SYNTHESE
VON
ACETYL-COA
147
2.16.SYNTHESEN
VON
S-AZIDOADENOSIN-A'.S'-DIPHOSPHAT,
8-AZIDO-COA
148
UND
-DERIVATEN
SYNTHESE
VON
8-AZIDOADENOSIN-3',5'-DIPHOSPHAT
(XXII)
148
SYNTHESE
VON
S-BROMOADENOSIN-ZCT.S'-DIPHOSPHAT
(XXI)
148
SYNTHESE
VON
8-AZIDOADENOSIN-3'.5'-DIPHOSPHAT
(XXII)
149
SYNTHESE
VON
S-BENZOYL-(ANHYDRO-8-AZIDO)-COA
(XXVII)
151
SYNTHESE
VON
S-ETHYL-(8-AZIDO)-COA
(XIX)
153
2.17
SYNTHESE
VON
S-ETHYL-(8-AMINO)COA
(XXXII)
2.18.BELICHTUNG
VON
PROTEIN
UND
NUCLEOTID
ZUR
KOVALENTMARKIERUNG
2.19.PHOSOHATTEST
IM
NMOL-BEREICH
155
156
157
3.
THEORETISCHER
ANHANG
159
YY.LITERATUR
167
E.ZUSAMMENFASSUNG
172 |
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| spelling | Becker, Andreas Verfasser aut Zur Raumstruktur der Pyruvat Formiatlyase Proteinkristallisation und Suche nach Schweratomderivaten ; Photoaffinitätsmarkierung mit S-Ethyl-(8-azido)-CoA [vorgelegt von Andreas Becker] 1995 175 S. Ill., graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Heidelberg, Univ., Diss. Photoaffinitätsmarkierung (DE-588)4174470-6 gnd rswk-swf Derivatisierung (DE-588)4113289-0 gnd rswk-swf Schwermetall (DE-588)4053963-5 gnd rswk-swf Kristallisation (DE-588)4033215-9 gnd rswk-swf Formiatacetyltransferase (DE-588)4348148-6 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Formiatacetyltransferase (DE-588)4348148-6 s Kristallisation (DE-588)4033215-9 s Schwermetall (DE-588)4053963-5 s Derivatisierung (DE-588)4113289-0 s Photoaffinitätsmarkierung (DE-588)4174470-6 s DE-604 DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=006877568&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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