Untersuchungen über die genetische Grundlage der Antigenverwandtschaft zwischen den beiden Serotypen des Virus der infektiösen Bursitis:
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1995
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
I.
EINLEITUNG
.
1
II.
LITERATURUEBERSICHT
.
3
2.1
ALLGEMEINE
BETRACHTUNGEN
UEBER
DIE
KRANKHEIT
.
3
2.2
STRUKTURMERKMALE
DES
IBDV
.
4
2.2.1
MORPHOLOGIE
DES
IBDV
.
5
2.2.2
DAS
GENOM
DES
IBDV
.
5
2.2.3
VIRALE
PROTEINE
.
6
2.3
KODIERENDE
KAPAZITAET
DES
GENOMS
UND
FUNKTIONELLE
BEDEUTUNG
.
7
DER
GEN-PRODUKTE
2.4
ANTIGENSTRUKTUR
UND
SEROLOGISCHE
REAKTIONSMUSTER
.
9
2.5
PROBLEMSTELLUNG
.
11
III.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
13
3.1
MATERIAL
.
13
3.1.1
VIREN
.
13
3.1.2
NAEHRMEDIEN
.
13
3.1.3
PUFFER
.
14
3.1.4
BAKTERIEN
.
20
3.1.5
PLASMIDE
.
20
3.1.6
OLIGONUKLEOTIDE
.
21
3.1.7
ANTIKOERPER
.23
3.2
METHODEN
.
23
3.2.1
VERMEHRUNG
UND
REINIGUNG
DES
VIRUS
.
23
3.2.2
ISOLIERUNG
DER
VIRALEN
DSRNA
.
25
3.2.3
ERMITTLUNG
DER
NUKLEINSAEUREKONZENTRATION
.
25
3.2.4
AGAROSEGEL-ELEKTROPHORESE
.
25
3.2.5
PHENOL-CHLOROFORM-EXTRAKTION
.
26
3.2.6
ETHANOLFAELLUNG
.
27
3.2.7
OLIGONUKLEOTIDREINIGUNG
.
27
3.2.8
REVERSE
TRANSKRIPTION
.
28
3.2.9
POLYMERASE-KETTENREAKTION
.
29
3.2.10
DNA-REINIGUNG
DURCH
GLASMATRIX
.
31
3.2.11
SEQUENZIERUNG
.
31
1.
DIREKTSEQUENZIERUNG
VON
PCR-PRODUKTEN
.
32
2.
SEQUENZIERUNG
VON
REKOMBINANTER
PLASMID-DNA
.
33
3.
SEQUENZGEL-ELEKTROPHORESE
.
33
3.2.12
DNA-HYBRIDISIERUNG
NACH
SOUTHERN
.
34
1.
HERSTELLUNG
VON
DIGOXIGENIN-MARKIERTEN
DSDNA-SONDEN
.
34
2.
DNA-TRANSFER
.
35
3.
HYBRIDISIERUNG
.
36
4.
IMMUNOLOGISCHER
NACHWEIS
.
36
3.2.13
COMPUTER-ANALYSE
.
37
3.2.14
DNA-SPALTUNG
MIT
RESTRIKTIONSENDONUKLEASEN
.
37
3.2.15
KLONIERUNG
IN
DEN
PUC18-VEKTOR
.
38
3.2.16
TRANSFORMATION
VON
E.
COLI
.
39
1.
HERSTELLUNG
DER
KOMPETENTEN
ZELLEN
.
39
2.
DURCHFUEHRUNG
DER
TRANSFORMATION
.
39
3.
SELEKTION
REKOMBINANTER
PLASMIDE
.
40
1.
A-KOMPLEMENTATION
.40
2
KOLONIE-IMMUNOBLOT
.
41
4.
ISOLIERUNG
UND
REINIGUNG
DER
PLASMIDE
.
41
3.2
17
PROTEINEXPRESSION
.
43
1.
SUBKLONIERUNG
.
43
2
EXPRESSION
.
44
3.2.18
PROTEINANALYSE
.
45
1.
POLYACRYLAMIDGEL-ELEKTROPHORESE
.
45
2.
COOMASSIE-FAERBUNG
.
46
3.
IMMUNOBLOT
.
46
4.
ELISA
.
46
5.
KOMPETITIVER
ELISA
.
47
IV.
ERGEBNISSE
.
49
4.1
REINIGUNG
DES
VIRUS
.
49
4.2
ISOLIERUNG
DER
DSRNA
.
49
4.3
UNTERSUCHUNGEN
MIT
DEM
VP3-GEN
DES
STAMMES
CU-1
.
52
4.3.1
SYNTHESE
DER
CDNA
UND
VERMEHRUNG
DES
VP3-GENS
.
52
4.3.2
HERSTELLUNG
DER
DNA-SONDE
.
55
4.3.3
KLONIERUNG
DES
VP3-GENS
DES
STAMMES
CU-1
.
55
4.3.4
EXPRESSION
DES
VP3
UND
SEINER
FRAGMENTE
IN
E.
COLI
.60
4.3.5
ANALYSE
DER
EXPRESSION
DER
VP3-FRAGMENTE
.
65
4.3.6
KARTIERUNG
DER
EPITOPE
.
69
1.
REAKTIONSMUSTER
DER
VP3-FRAGMENTE
MIT
ANTIKOERPERN
.
69
2.
ANALYSE
DER
ANTIGENSTRUKTUR
DES
VP3
IM
ELISA
.
78
4.3.7
ZUSAMMENHAENGE
ZWISCHEN
PRIMAERSTRUKTUR
DER
PEPTIDE
UND
.
85
ANTIGENSTRUKTUR
4.4
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
ANTIGENSTRUKTUR
DES
AMINOTERMINALEN
BEREICHS
.
88
DES
VP2
4.4.1
SYNTHESE
DER
VP2-CDNA
.
88
4.4.2
KLONIERUNG
DES
FUER
DEN
AMINOTERMINUS
DES
VP2
KODIERENDEN
.
90
GENSEGMENTS
4.4.3
EXPRESSION
DES
AMOINOTERMINALEN
VP2-PEPTIDS
IN
E.
COLI
.
94
V.
DISKUSSION
.
96
5.1
DIE
ANTIGENSTRUKTUR
DES
VP3
.
96
5.2
DIE
ANTIGENSTRUKTUR
DES
VP2
.
105
VI.
ZUSAMMENFASSUNG
.
107
VII.
SUMMARY
.
109
VIII.
RANGKUMAN
.
111
IX.
LITERATURVERZEICHNIS
.
113 |
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