Charakterisierung humaner erythrozytärer Acetylcholinesterase unter Verwendung monoklonaler und polyklonaler Antikörper:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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1994
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
.
1
1.1
HETEROGENITAET
DER
ACETYLCHOLINESTERASE
(ACHE)
.
1
1.2
BIOSYNTHESE
UND
BIOLOGISCHE
FUNKTIONEN
DER
ACHE
.
3
1.3
CHARAKTERISIERUNG
DER
ACHE
MITTELS
ANTIKOERPER
.
5
1.4
ZIELSETZUNG
DER
VORLIEGENDEN
ARBEIT
.
6
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
7
2.1
TIERE
.
7
2.2
ZELLMATERIAL
.
7
2.3
REAGENTIEN
UND
CHEMIKALIEN
.
7
2.4
PUFFER
UND
LOESUNGEN
.
8
2.5
HERSTELLUNG
MONOKLONALER
ANTIKOERPER
GEGEN
ACHE
AUS
HUMANEN
.
14
ERYTHROZYTEN
2.5.1
IMMUNISIERUNG
VON
BALB/C-MAEUSEN
.
14
2.5.2
VERGLEICH
MURINER
ACHE-SPEZIFISCHER
SERUMANTIKOERPERTITER
MIT
ZWEI
.
14
UNTERSCHIEDLICHEN
ADJUVANTIEN
BEI
DER
IMMUNISIERUNG
2.5.3
KULTIVIERUNG
DER
MYELOMZELLEN
.
15
2.5.4
ZELLFUSION
.
15
2.5.5
KULTIVIERUNG
DER
HYBRIDOMZELLEN
.
17
2.5.6
SCREENINGTEST
MIT
HILFE
EINES
DIREKTEN
ELISA
.
17
2.5.7
KLONIERUNG
.
18
2.5.8
KONSERVIERUNG
POSITIVER
KLONE
.
18
2.5.9
MASSENPRODUKTION
VON
MONOKLONALEN
ANTIKOERPERN
.
18
2.5.10
BESTIMMUNG
DER
IMMUNGLOBULINKLASSEN
UND
-SUBKLASSEN
.
19
2.5.11
ISOLIERUNG
DER
MONOKLONALEN
ANTIKOERPER
UEBER
PROTEIN
G
SEPHAROSE
.
19
2.5.12
UEBERPRUEFUNG
DER
REINHEIT
DER
MONOKLONALEN
ANTIKOERPER
.
20
2.5.13
KOPPLUNG
VON
PEROXIDASE
AN
DIE
MONOKLONALEN
ANTIKOERPER
.
20
2.6
HERSTELLUNG
VON
POLYKLONALEN
DOTTERANTIKOERPEM
GEGEN
HUMANE
.
21
ERYTHROZYTAERE
ACHE
2.6.1
IMMUNISIERUNG
EINES
LEGEHUHNES
.
21
2.6.2
BESTIMMUNG
DES
ANTIKOERPERTITERS
AUS
DEM
DOTTER
.
21
2.6.3
ISOLIERUNG
DER
DOTTERANTIKOERPER
.
21
2.7
EINFLUSS
DER
MONOKLONALEN
ANTIKOERPER
UND
DES
DOTTERANTI
.
22
KOERPERS
AUF
DIE
ENZYMAKTIVITAET
DER
ACHE
2.8
SDS-POLYACRYLAMIDGEL-ELEKTROPHORESE
.
23
2.8.1
IMMUNOBLOTTING
(WESTERN-BLOT)
.
24
2.8.2
UEBERPRUEFUNG
DER
REINHEIT
DER
VERWENDETEN
CHOLINESTERASEN
.
25
MITTELS
SDS-POLYACRYLAMIDGEL-ELEKTROPHORESE
2.8.3
UEBERPRUEFUNG
DER
KREUZREAKTIVITAET
DER
MONOKLONALEN
ANTIKOERPER
2H3
.
26
UND
4G2
SOWIE
DES
POLYKLONALEN
DOTTERANTIKOERPERS
ZUR
ACHE
BZW.
BUCHE
ANDERER
SPEZIES
2.8.4
NACHWEIS
UNGEBUNDENER
UND
DICHLORPHOS-GEBUNDENER
ACHE
AUS
.
26
HUMANEN
ERYTHROZYTEN
2.8.5
IMMUNHISTOLOGISCHE
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
SPEZIFITAET
DER
HERGESTELL
.
27
TEN
ANTIKOERPER
3.
ERGEBNISSE
.
28
3.1
HERSTELLUNG
MONOKLONALER
ANTIKOERPER
GEGEN
ACHE
AUS
HUMANEN
.
28
ERYTHROZYTEN
3.1.2
VERGLEICH
MURINER
ACHE-SPEZIFISCHER
SERUMANTIKOERPERTITER
UNTER
VER
WENDUNG
UNTERSCHIEDLICHER
ADJUVANTIEN
BEI
DER
IMMUNISIERUNG
.
31
3.1.3
KLONIERUNG
DER
HYBRIDOMZELLEN
.
31
3.1.4
BESTIMMUNG
DER
IMMUNGLOBULINKLASSEN
UND
-SUBKLASSEN
.
31
3.1.5
ISOLIERUNG
DER
MONOKLONALEN
ANTIKOERPER
AUS
ZELLKULTURUEBERSTAND
MIT
.
34
HILFE
DER
PROTEIN-G-SEPHAROSE
3.1.6
UEBERPRUEFUNG
DER
REINHEIT
DER
MONOKLONALEN
ANTIKOERPER
.
35
3.2
HERSTELLUNG
VON
POLYKLONALEN
DOTTERANTIKOERPEM
GEGEN
ACHE
AUS
.
38
HUMANEN
ERYTHROZYTEN
3.2.1
BESTIMMUNG
DES
ACHE-SPEZIFISCHEN
ANTIKOERPERTITERS
IM
DOTTER
.
38
3.2.2
ISOLIERUNG
DER
DOTTERANTIKOERPER
.
39
3.3
DER
ZEITLICHE
VERLAUF
DER
ACETYLCHOLINESTERASEAKTIVITAET
MITTELS
ELLMAN
.
39
TEST,
UNTER
VERWENDUNG
DER
HERGESTELLTEN
ANTIKOERPER
3.4
UNTERSUCHUNG
DER
REINHEIT
DER
VERWENDETEN
ACHE
UND
BUCHE
.
41
3.5
KREUZREAKTION
DER
MONOKLONALEN
ANTIKOERPER
2H3,4G2
UND
DES
.
43
DOTTERANTIKOERPERS
ZUR
ACHE
UND
BUCHE
ANDERER
SPEZIES
3.6
NACHWEIS
UNGEBUNDENER
UND
DICHLORPHOS-VERSETZTER
ACHE
AUS
HUMANEN
ERYTHROZYTEN
.
44
3.7
IMMUNHISTOCHEMISCHE
FAERBUNG
DER
ACHE
NEUROMUSKULAERER
.
47
SYNAPSEN
UNTER
VERWENDUNG
DES
MONOKLONALEN
ANTIKOERPERS
2H3
UND
DES
DOTTERANTIKOERPERS
4.
DISKUSSION
.
48
5.
ZUSAMMENFASSUNG
.
57
6.
SUMMARY
.
59
7.
LITERATURVERZEICHNIS
.
61 |
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