Veränderungen der Immunogenität von Tumorzellen durch das Newcastle Disease Virus: zelluläre und humorale Immunreaktionen
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INHALT
SEITE
ABKUERZUNGEN
I
1.
EINLEITUNG
1
1.1.
IMMUNOGENITAET
VON
TUMOREN
1
1.2.
AKTIV-SPEZIFISCHE
IMMUNTHERAPIE
BEI
TUMORERKRANKUNGEN
2
1.3.
NEWCASTLE
DISEASE
VIRUS
ALS
IMMUNOLOGISCHES
ADJUVANS
4
1.4.
IMMUNTHERAPIE
BEIM
FORTGESCHRITTENEN
NIERENZELLKARZINOM
6
1.5.
ZIEL
DER
VORLIEGENDEN
ARBEIT
8
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
9
2.1.
ZELL-UND
VIRUSMATERIAL
9
2.1.1.
GEWINNUNG
MONONUKLEAERER
ZELLEN
AUS
PERIPHEREM
BLUT
9
2.1.2.
DEPLETION
VON
LYMPHOZYTENSUBPOPULATIONEN
AUS
ISOLIERTEN
MONONUKLEAEREN
ZELLEN
MIT
ANTIKOERPERKONJUGIERTEN
MAGNET
PARTIKELN
9
2.1.3.
KRYOKONSERVIERUNG
VON
ZELLEN
10
2.1.4.
ZELLMATERIAL
UND
ZELLKULTUR
11
2.1.5.
VIRUSMATERIAL
12
2.2.
VAKZINIERUNG
12
2.2.1.
HERSTELLUNG
DER
VAKZINE
2.2.2.
PATIENTEN
2.2.3.
VERABREICHUNG
DER
VAKZINE
12
13
13
INHALT
2.3.
ASSAY
ZUR
BESTIMMUNG
ZELLVERMITTELTER
ZYTOTOXIZITAET
13
2.4.
ASSAY
ZUR
BESTIMMUNG
ANTIKOERPERVERMITTELTER
ZELLULAERER
ZYTOTOXIZITAET
(ADCC)
15
2.5.
NACHWEIS
VON
ZYTOKINEN
IN
ZELLKULTURUEBERSTAENDEN
UND
PATIENTENSEREN
IM
ELISA
16
2.5.1.
INTERFERON-Y
16
2.5.2.
TUMORNEKROSEFAKTOR-A
17
2.5.3.
INTERFERON-A
17
2.6.
NACHWEIS
VON
LOESLICHEN
LNTERLEUKIN-2-REZEPTOREN
(SLL-2R)
IN
ZELLKULTURUEBERSTAENDEN
IM
ELISA
17
2.7.
POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE
(PAGE)
UND
IMMUNOBLOT
18
2.7.1.
VORBEREITUNG
DER
PROBEN
18
2.7.2.
PAGE
19
2.7.3.
IMMUNOBLOT
19
2.8.
BESTIMMUNG
VON
NDV-TITERN
IN
VIRUSSTAMMLOESUNGEN
UND
VON
ANTI-NDV-ANTIKOERPERTITERN
IN
PATIENTENSEREN
20
2.8.1.
HAEMAGGLUTINATIONSTEST
20
2.8.2.
HAEMAGGLUTINATIONS-HEMMTEST
(HEH)
22
2.8.3.
NEURAMINIDASE-HEMMTEST
(NAH)
22
2.8.4.
NEUTRALISATIONSTEST
(CPN)
23
2.9.
IMMUNOPEROXIDASEFAERBUNG
VON
NDV-INFIZIERTEN
TUMORZELLEN
26
2.10.
MTT-ASSAY
ZUR
BESTIMMUNG
DES
ZYTOPATHISCHEN
EFFEKTS
VON
NDV
BEI
TUMORZELLEN
UND
NORMALEN
ZELLEN
27
2.11.
DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE
PHAENOTYPISIERUNG
VON
LEUKOZYTEN
AUS
PERIPHEREM
BLUT
(FACS-ANALYSE)
27
2.12.
STATISTIK
28
3.
ERGEBNISSE
29
3.1.
LICHTMIKROSKOPISCHER
NACHWEIS
DER
INFEKTION
VON
TUMORZEILEN
MIT
NDV
29
3.2.
ZYTOPATHISCHER
EFFEKT
VON
NDV
AUF
ZELLEN
IN
VITRO
29
3.2.1.
HUMANE
ZELLEN
31
3.2.2.
AFFENNIERENZELLEN
32
3.3.
EINFLUSS
VON
NDV
AUF
DIE
ZELLULAERE
ZYTOTOXIZITAET
VON
PBMC
GEGEN
TUMORZELLEN
33
3.3.1
INKUBATION
DER
EFFEKTORZELLEN
MIT
NDV
33
3.3.2.
INKUBATION
DER
TARGETZELLEN
MIT
NDV
34
3.3.3.
INKUBATION
VON
EFFEKTOR
UND
TARGETZELLEN
MIT
NDV
34
3.4.
ZELLULAERE
ZYTOTOXIZITAET
VON
PBMC
NACH
DEPLETION
VERSCHIEDENER
EFFEKTORZELLSUBPOPULATIONEN
35
3.5.
ANTIKOERPERVERMITTELTE
ZELLULAERE
ZYTOTOXIZITAET
(ADCC)
VON
PBMC
GEGEN
AUTOLOGE
UND
ALLOGENE
TUMORZELLEN
37
INHALT
3.6.
VERAENDERUNG
DER
NATUERLICHEN
ZELLULAEREN
ZYTOTOXIZITAET
VON
PATIENTEN-PBMC
WAEHREND
DER
BEHANDLUNG
MIT
VAKZINE
38
3.7.
VERAENDERUNGEN
DES
PHAENOTYPS
VON
PATIENTEN-PBMC
WAEHREND
DER
BEHANDLUNG
MIT
VAKZINE
39
3.8.
NACHWEIS
VON
ANTIKOERPERN
GEGEN
DIE
VAKZINE
IN
PATIENTENSEREN
41
3.9.
BESTIMMUNG
DER
ANTI-NDV-ANTIKOERPERTITER
IN
PATIENTENSEREN
MIT
HEH,
CPN
UND
NAH
42
3.10.
IN-VITRO
UND
/N-V/VO-LNDUKTION
VON
IFN-A,
IFN-Y
UND
TNF-A
DURCH
NDV
44
3.10.1.
ZYTOKINSPIEGEL
IN
ZELLUEBERSTAENDEN
44
3.10.2.
ZYTOKINSPIEGEL
IN
PATIENTENSEREN
46
4.
DISKUSSION
48
5.
ZUSAMMENFASSUNG
62
6.
LITERATUR
64
ANHANG
80
7.
INDUKTION
UND
REGULATION
DER
IMMUNANTWORT
DURCH
ZYTOKINE:
EXPERIMENTELLE
DARSTELLUNG
AM
BEISPIEL
VON
LNTERLEUKIN-2
UND
SEINEM
LOESLICHEN
REZEPTOR
80
7.1.
EINFUEHRUNG
80
7.2.
ERGEBNISSE
82
7.2.1.
HEMMUNG
DER
ZELLPROLIFERATION
VON
CTLL-2
DURCH
SLL-2R
82
-
S!L-2R-VERDUENNUNGSREIHE
VERSUS
KONSTANTE
MENGEN
RLL-2
-
KONSTANTE
S!L-2R-KONZENTRATIONEN
VERSUS
RIL-2-VERDUEN
NUNGSREIHE
-
PRAEINKUBATION
VON
SIL-2R
MIT
RLL-2
-
VARIATION
DER
ZELLZAHL
IN
EINER
S!L-2R-VERDUENNUNGSREIHE
UND
KONSTANTER
MENGE
RLL-2
7.2.2.
EINFLUSS
VON
SLL-2R
AUF
DIE
STIMULATION
ZYTOTOXISCHER
PBMC
MIT
RLL-2
85
7.2.3.
EINFLUSS
VON
SLL-2R
AUF
DIE
PROLIFERATION
KULTIVIERTER
PBMC
86
7.2.4.
EINFLUSS
VON
SLL-2R
AUF
DIE
SEKUNDAERE
PRODUKTION
LOESLICHER
IL-2-REZEPTOREN
88
7.3.
DISKUSSION
89
7.4.
ZUSAMMENFASSUNG
92
8.
GERAETE,
VERBRAUCHSMATERIAL
U.
A.
94
EIDESSTATTLICHE
ERKLAERUNGEN
DANKSAGUNG
LEBENSLAUF |
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