Kryofixation von Zellsuspensionen am Metallspiegel am Beispiel der Hefen Rhodotorula glutinis und Saccharomyces cerevisiae:
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
ZUSAMMENFASSUNG 1
1. EINLEITUNG 2
1.1. MORPHOLOGISCHE UNTERSUCHUNG BIOLOGISCHER STRUKTUREN 2
1.2. LICHTMIKROSKOPISCHE UNTERSUCHUNG VON ZELLEN 2
1.3. ELEKTRONENMIKROSKOPISCHE UNTERSUCHUNG VON ZELLEN 3
1.4. CHEMISCHE FIXATION 5
1.5. KRYOFIXATION 6
1.5.1. PRINZIP DER KRYOFIXATION 6
1.5.2. KRYOFIXATIONSVERFAHREN 7
1.5.3. METALLSPIEGELKRYOFIXATION 8
1.5.4. KRYOFIXATION VON ZELLSUSPENSIONEN 9
1.6. GEFRIERSUBSTITUTION 10
1.7. KRYOELEKTRONENMIKROSKOPIE 11
1-8. GEFRIERBRUCH UND GEFRIERAETZUNG 11
1.9. GEFRIERTROCKNUNG 11
1.10. TIEFTEMPERATUREINBETTUNG 12
1.11. RHODOTORULA GLUTINIS UND SACCHAROMYCES CEREVISIAE 12
1.11.1. EIGNUNG ALS MODELL 12
1.11.2. SYSTEMATISCHE EINORDNUNG VON R. GLUTINIS UND S. CEREVISIAE 13
1.11.3. ENTWICKLUNGSZYKLUS VON R. GLUTINIS UND S. CEREVISIAE 13
1.12. PROBLEMSTELLUNG 16
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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2. MATERIAL UND METHODEN 17
2.1. MATERIAL 17
2.1.1. CHEMIKALIEN 17
2.1.2. SONSTIGE MATERIALIEN 18
2.1.3. GERAETE 18
2.2. METHODEN 19
2.2.1. HERSTELLUNG DER MEDIEN FUER DIE ZELLAUFZUCHT 19
2.2.1.1. NORMALMEDIUM 19
2.2.1.2. NAEHRBOEDEN 19
2.2.1.3. MEDIUM MIT ERHOEHTER ZUCKERKONZENTRATION 20
2.2.2. ZELLKULTIVIERUNG UND -AUFBEWAHRUNG 20
2.2.3. ZELLANZUCHT ZUR PRAEPARATION 20
2.2.4. ZELLERNTE 21
2.2.5. KRYOFIXATION AM KUPFERSPIEGEL 21
2.2.6. GEFRIERSUBSTITUTION UND TIEFTEMPERATUREINBETTUNG 24
2.2.6.1. SUBSTITUTION IN METHANOL MIT 0.5% URANYLACETAT 25
2.2.6.2. SUBSTITUTION IN METHANOL OHNE ZUSAETZE BZW. MIT 0.4%
URANYLACETAT 25
2.2.6.3. SUBSTITUTION IN ACETON OHNE ZUSAETZE BZW. MIT 0.1% URANYLACETAT
25
2.2.7. GEFRIERSUBSTITUTION UND EPOXIDEINBETTUNG 26
2.2.8. BEFILMEN DER NETZE 26
2.2.9. ULTRAMIKROTOMIE DER GEFRIERSUBSTITUIERTEN PRAEPARATE 27
2
.
2
.
10
.
KONTRASTIERUNG DER SCHNITTE
28
2.2.10.1. LOWICRYL-PRAEPARATE 28
2.2.10.2. EPOXID-PRAEPARATE 28
2.2.11. ELEKTRONENMIKROSKOPISCHE UNTERSUCHUNG DER
GEFRIERSUBSTITUIERTEN PRAEPARATE 29
2.2.12. ENTWICKLUNG DER NEGATIVE 29
2.2.12. ENTWICKLUNG DER POSITIVE 30
3. ERGEBNISSE 31
3.1. KRYOFIXATIONSTECHNIK 31
3.1.1. KIYOFIXATION EINER RHODOTORULA GLUTINIS-SUSPENSION
OHNE KRYOPROTEKTION (KF 141290) 32
3.1.2. KRYOFTXATION EINES GLYCERIN-WASSER-GEMISCHS ZUR
BEURTEILUNG DER EINFRIERTECHNIK 36
3.1.3. KIYOFIXATION EINER R. GLUTINIS-SUSPENSION MIT
KRYOPROTEKTION (KF 130291) 37
3.1.4. GLYCERIN- UND ZUCKERTOLERANZ DER HEFE R. GLUTINIS 44
3.2. SUBSTITUTIONSTECHNIKEN 46
3.2.1. SUBSTITUTION EINER R. GLUTINIS-SUSPENSION MIT ACETON
OHNE ZUSAETZE UEBER 8 TAGE (KF 090491) 47
3.2.2. SUBSTITUTION EINER SACCHAROMYCES CEREVISIAE -SUSPENSION
MIT ACETON OHNE ZUSAETZE UEBER 8 TAGE (KF 050892) 52
3.2.3. SUBSTITUTION EINER R. GLUTINIS- UND EINER S. CEREVISIAE -
SUSPENSION
NACH ANZUCHT IN 0.1 BZW. 0.3 M GLUCOSE MIT ACETON OHNE ZUSAETZE
UEBER 8 TAGE (KF 050992) 55
3.2.4. SUBSTITUTION EINER R. GLUTINIS- UND EINER S. CEREVISIAE -
SUSPENSION
NACH ANZUCHT IN 0.1 BZW. 0.3 M GLUCOSE IN ACETON MIT 0.1%
URANYLACETAT UEBER 8 TAGE (KF 050992) 61
3.2.5. SUBSTITUTION EINER R. GLUTINIS- UND EINER S. CEREVISIAE -
SUSPENSION
IN METHANOL (KF 290992) 65
3.2.6. SUBSTITUTION EINER R. GLUTINIS- UND EINER S. CEREVISIAE -
SUSPENSION
IN ACETON MIT 0.4% OSMIUMTETROXID (KF 271192) 72
4. DISKUSSION 76
4.1. KRYOFIXATION UND VERIFIZIERUNG 76
4.2. QUALITAET DER FIXATION 78
4.3. KRYOFIXATION MIT UND OHNE KRYOPROTEKTION 80
4.4. EINFRIERTECHNIK 84
4.5. SUBSTITUTIONSTECHNIK _ 85
4.5.1. ACETON GEGEN METHANOL 85
4.5.2. MIT UND OHNE ZUSATZ CHEMISCHER FIXANTIEN 86
5. LITERATUR 89 |
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