Entwicklung von Enzymimmunoassays zum Nachweis von Pyrethroiden:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1994
|
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| Beschreibung: | München, Techn. Univ., Diss., 1994 |
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
ABKUERZUNGEN.
.
VI
I
EINLEITUNG
.
1
II
MATERIAL
UND
METHODEN.
.
17
1
CHEMIKALIEN
UND
REAGENZIEN.
.
17
1.1
CHEMIKALIEN.
.
17
1.2
PYRETHROIDE,
PYRETHROIDDERIVATE
UND
ANDERE
VERBINDUNGEN
ZUR
BESTIMMUNG
DER
KREUZREAKTIVITAETEN.
.
18
1.3
PYRETHROID-STANDARDLOESUNGEN.
.
19
1.4
IMMUNREAGENZIEN.
.
20
2
PUFFER
UND
LOESUNGEN.
.
20
2.1
PUFFER
UND
LOESUNGEN
FUER
DEN
ENZYMIMMUNOASSAY.
.
20
2.2
PUFFER
UND
LOESUNGEN
FUER
DIE
REINIGUNG
DER
ANTIKOERPER.
.
21
2.3
MEDIEN
UND
LOESUNGEN
FUER
DIE
HERSTELLUNG
MONOKLONALER
ANTIKOERPER.
.
22
3
VERBRAUCHSMATERIAL.
.
23
4
GERAETE.
.
23
5
SYNTHESE
UND
CHARAKTERISIERUNG
DER
HAPTEN-PROTEIN-KONJUGATE.
.
25
5.1
KOPPLUNG
UEBER
CARBODIIMID.
.
25
5.1.1
IMMUNKONJUGATE
(KOPPLUNG
I).
.
26
5.1.2
HAPTEN-OVALBUMIN-KONJUGATE
(KOPPLUNG
II).
.
28
5.2
KOPPLUNG
UEBER
DCC
UND
NHS
.
29
5.2.1
HAPTEN-OVALBUMIN-KONJUGATE
(KOPPLUNG
HI)
.
29
5.3
CHARAKTERISIERUNG
DER
HAPTEN-PROTEIN-KONJUGATE.
.
30
5.3.1
PROTEINBESTIMMUNG
.
30
5.3.2
SPEKTRALPHOTOMETRISCHE
BESTIMMUNG
DER
HAPTENDICHTE.
.
31
5.3.3
ERMITTLUNG
DES
KOPPLUNGSERFOLGS
DURCH
ENZYMIMMUNOASSAY.
.
32
5.3.4
BESTIMMUNG
DER
HAPTENDICHTE
DURCH
CHLOR-ELEMENTARANALYSE.
.
32
6
POLYKLONALE
ANTIKOERPER.
.
33
6.1
IMMUNISIERUNG
UND
SERUMGEWINNUNG
.
33
6.2
SERUMAUFBEREITUNG.
.
34
6.3
NOMENKLATUR
DER
POLYKLONALEN
ANTIKOERPER.
.
34
7
MONOKLONALE
ANTIKOERPER.
.
34
7.1
IMMUNISIERUNG.
.
34
7.2
ZELLKULTURBEDINGUNGEN.
.
36
7.3
GEWINNUNG
DER
MILZZELLEN.
.
37
7.4
VORBEREITUNG
DER
MYELOMZELLEN.
.
37
7.5
ZELLFUSION
MIT
PEG.
.
37
7.6
SELEKTION.
.
38
7.6.1
HAT-SELEKTION
.
38
7.7
ERMITTLUNG
DER
FUSIONSRATEN.
.
40
7.8
KLONIERUNG
.
40
7.9
NOMENKLATUR
DER
MONOKLONALEN
ANTIKOERPER.
.
41
7.10
KRYOKONSERVIERUNG
DER
ZELLEN.
.
41
7.11
KONSERVIERUNG
DER
MONOKLONALEN
ANTIKOERPER.
.
42
8
REINIGUNG
DER
ANTIKOERPER.
.
42
8.1
AMMONIUMSULFATFAELLUNG
.
42
8.2
ULTRAFILTRATION.
.
42
8.3
CHROMATOGRAPHIE
UEBER
SPECTRA
GEL
FAST-IGG.
.
43
8.4
PROTEIN
A-CHROMATOGRAPHIE.
.
43
8.5
PROTEIN
G-CHROMATOGRAPHIE.
.
43
9
ENTWICKLUNG
UND
OPTIMIERUNG
DER
ENZYMIMMUNOASSAYS
ZUM
NACHWEIS
VON
PYRETHROIDEN.
.
44
9.1
AUSWAHL
DER
HAPTEN-PROTEIN-KONJUGATE
FUER
DIE
FESTE
PHASE.
.
49
9.2
BLOCKIERUNG
UNSPEZIFISCHER
REAKTIONEN.
.
50
9.3
ENZYMIMMUNOASSAYS
MIT
POLYKLONALEN
ANTIKOERPERN.
.
50
9.3.1
KOMPETITIVER
ENZYMIMMUNOASSAY
MIT
IMMOBILISIERTEM
HAPTEN-PROTEIN-KONJUGAT.
.
50
9.3.2
KOMPETITIVER
ENZYMIMMUNOASSAY
MIT
HAPTEN-BIOTIN-TRACER.
.
51
9.4
ENZYMIMMUNOASSAYS
MIT
MONOKLONALEN
ANTIKOERPERN
.
51
9.4.1
SCREENING
.
51
9.4.2
KOMPETITIVER
ENZYMIMMUNOASSAYMIT
IMMOBILISIERTEM
HAPTEN-PROTEIN-KONJUGAT.
.
53
9.4.3
KOMPETITIVER
ENZYMIMMUNOASSAY
MIT
PEROXIDASE
KONJUGIERTEN
ANTIKOERPERN
.
53
10
AUSWEITUNG
DES
ENZYMIMMUNOASSAYS.
.
55
11
CHARAKTERISIERUNG
DER
ANTIKOERPER.
.
57
11.1
BESTIMMUNG
DER
IMMUNGLOBULIN-SUBKLASSEN.
.
57
11.2
IGG-BESTIMMUNG
.
57
11.3
ZWEIDIMENSIONALE
TITERBESTIMMUNG
.
58
11.4
ERMITTLUNG
DER
KREUZREAKTIVITAETEN.
.
58
11.5
AFFINITAETSBESTIMMUNG
.
59
12
KOPPLUNG
VON
MONOKLONALEN
ANTIKOERPER
AN
PEROXIDASE.
.
60
13
MISCHUNG
VON
MONOKLONALEN
ANTIKOERPERN.
.
61
14
LOESUNGSMITTELVERTRAEGLICHKEIT.
.
62
15
PROBENMESSUNG
.
62
III
ERGEBNISSE.
.
64
1
SYNTHESE
UND
CHARAKTERISIERUNG
DER
HAPTEN-PROTEIN-KONJUGATE.
.
64
1.1
SPEKTRALPHOTOMETRISCHE
BESTIMMUNG
DER
HAPTENDICHTE.
.
64
1.2
ERMITTLUNG
DES
KOPPLUNGSERFOLGS
DURCH
ENZYMIMMUNOASSAY.
.
64
1.3
BESTIMMUNG
DER
HAPTENDICHTE
DURCH
CHLOR-ELEMENTARANALYSE.
.
65
1,4
AUSWAHL
DER
IMMUNKONJUGATE.
.
66
2
POLYKLONALE
ANTIKOERPER.
.
67
2.1
IMMUNISIERUNG
UND
SERUMGEWINNUNG
.
67
2.2
KOMPETITIVER
ENZYMIMMUNOASSAYS
MIT
IMMOBILISIERTEM
HAPTEN-PROTEIN-KONJUGAT.
.
67
2.2.1
AUSWAHL
DER
HAPTEN-PROTEIN-KONJUGATE
FUER
DIE
FESTE
PHASE.
.
68
2.2.2
BLOCKIERUNG
UNSPEZIFISCHER
REAKTIONEN.
.
69
2.3
CHARAKTERISIERUNG
DER
ANTISEREN.
.
70
2.3.1
ZWEIDIMENSIONALE
TITERBESTIMMUNG
.
70
2.4
ENZYMIMMUNOASSAY
ZUM
NACHWEIS
VON
PERMETHRIN
UND
CYPERMETHRIN
MIT
ANTISERUM
A7
.
72
2.4.1
ERMITTLUNG
DER
KREUZREAKTIVITAETEN.
.
72
2.4.2
AFFINITAETBESTIMMUNG
VON
ANTISERUM
A7
.
74
2.5
ENZYMIMMUNOASSAY
ZUM
NACHWEIS
VON
ALLETHRIN
UND
FENFLUTHRIN
MIT
ANTISERUM
D5
.
76
2.5.1
ERMITTLUNG
DER
KREUZREAKTIVITAETEN,
.
76
2.5.2
AFFINITAETSBESTINUNUNG
VON
ANTISERUM
D5
.
77
2.6
ENZYMIMMUNOASSAY
ZUM
NACHWEIS
VON
ALLETHRIN
MIT
ANTISERUM
D7.
.
77
2.6.1
ERMITTLUNG
DER
KREUZREAKTIVITAETEN.
.
78
2.6.2
AFFINITAETSBESTINUNUNG
VON
ANTISERUM
D7
.
78
2.7
ENZYMIMMUNOASSAY
ZUM
NACHWEIS
VON
ALLETHRIN,
CYFLUTHRIN,
CYPERMETHRIN
UND
PERMETHRIN
MIT
ANTISERUM
D12.
78
2.7.1
ERMITTLUNG
DER
KREUZREAKTIVITAETEN.
.
78
2.7.2
AFFINITAETSBESTINUNUNG
VON
ANTISERUM
D12.
.
80
2.8
KOMPETITIVER
ENZYMIMMUNOASSSAY
MIT
HAPTEN-BIOTIN-TRACER.
.
80
2.9
REINIGUNG
DER
ANTIKOERPER.
.
81
2.9.1
AMMONIUMSULFATFAELLUNG
.
81
3
MONOKLONALE
ANTIKOERPER.
.
83
3.1
IMMUNISIERUNG
UND
GEWINNUNG
DER
HYBRIDOMZELLEN.
.
83
3.2
ERMITTLUNG
DER
FUSIONSRATEN.
.
83
3.3
CHARAKTERISIERUNG
DER
ANTIKOERPER.
.
84
3.3.1
BESTIMMUNG
DER
IMMUNGLOBULIN-SUBKLASSEN.
.
84
3.3.2
IGG-BESTIMMUNG
.
85
3.3.3
ZWEIDIMENSIONALE
TITERBESTIMMUNG
.
85
3.4
ENZYMIMMUNOASSAY
ZUM
NACHWEIS
VON
ALLETHRIN
MIT
DEM
MAK
3/B4-1/F8
.
86
3.4.1
ERMITTLUNG
DER
KREUZREAKTIVITAETEN.
.
86
3.4.2
AFFINITAETSBESTINUNUNG
.
86
3.5
ENZYMIMMUNOASSAY
ZUM
NACHWEIS
VON
ALLETHRIN
MIT
DEN
MAK
1/E2-5/B5
UND
1/A5-7/C10.
88
3.5.1
ERMITTLUNG
DER
KREUZREAKTIVITAETEN.
.
88
3.5.2
AFFINITAETSBESTINUNUNG
.
89
3.6
REINIGUNG
DER
ANTIKOERPER.
.
90
3.7
KOPPLUNG
DER
ANTIKOERPER
AN
PEROXIDASE.
.
91
3.8
MISCHUNG
VON
MONOKLONALEN
ANTIKOERPERN.
.
94
4
LOESUNGSMITTELVERTRAEGLICHKEIT.
.
96
5
PROBENMESSUNG
.
97
IV
DISKUSSION
.
103
1
SYNTHESE
UND
CHARAKTERISIERUNG
DER
HAPTEN-PROTEIN-KONJUGATE.
.
103
2
POLYKLONALE
ANTIKOERPER.
.
106
3
MONOKLONALE
ANTIKOERPER.
.
108
4
ENZYMIMMUNOASSAY.
.
113
5
AUSBLICK.
.
123
V
ZUSAMMENFASSUNG.
.
126
VI
LITERATUR.
.
128
VII
ANHANG
.
146 |
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