Expression von drei antifungalen Proteinen aus Gerste (Hordeum vulgare) in transgenen Tabakpflanzen und deren Analyse bezüglich Veränderungen in ihrer Resistenz gegenüber dem Schadpilz R.solani:
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I.
EINLEITUNG
.
3
A
ISOLATION
DER
GENE
FUER
RASSEN-SORTEN-SPEZIFISCHE
RESISTENZ
.
4
B.
SYNTHESE
TOXISCHER
SUBSTANZEN
.
5
C.
EINSATZ
ANTIFUNGALER
PROTEINE
.
6
1.
PFLANZLICHE
CHITINASEN:
.
6
2
BAKTERIELLE
CHITINASEN
.
10
3
PFLANZLICHE
SS-I,3-GLUCANASEN'
.
10
4.
RIBOSOMEN-INHIBIERENDE
PROTEINE
.
12
5.
SONSTIGE
PROTEINFAEKTOREN
.
13
D.
DAS
ZIEL
DIESER
ARBEIT:
.
13
1.
WAS
BISHER
UEBER
DIE
IN
DIESER
ARBEIT
VERWENDETEN
GENE
BEKANNT
WAR:
.
14
II.
MATERIAL
UND
METHODEN:
.
16
A.
MATENAL
.
17
1
STAMME
UND
PLASMIDE:
.
18
2.
PFLANZEN
.
18
3.
MEDIEN
.
19
4.
PUFFER.
.
20
B.
METHODEN
.
22
1.
ISOLATION
VON
PLASMID-DNA
AUS
E.COLI:
.
22
2.
ISOLATION
VON
PLASMID-DNA
AUS
A.TUMEFACIENS:
.
22
3.
ISOLATION
GENOMISCHER
DNA
AUS
TABAKBLAETTERN:
.
22
4.
ISOLATION
VON
GESAMT-RNA
AUS
PFLANZENGEWEBE:
.
23
5.
HERSTELLUNG
RADIOAKTIV
MARKIERTER
SONDEN:
.
23
6.
HERSTELLUNG
VON
GESAMTPROTEINEXTRAKTEN
AUS
PFLANZENGEWEBEN:
.
23
7.
PRAPARATION
VON
INTERZELLULAREN-WASCHFLUESSIGKEIT
(IWF)'
.
23
8
SEPARATION
DER
PROTEINE
UND
WCSTCM-BLOT-ANALYSC
.
24
9.
REINIGUNG
SYNTHETISCHER
OLIGONUKLEOTIDE
.
24
10.
SEQUENZIERUNG
.
24
11
TRANSFORMATION
VON
BAKTERIEN
.
24
12.
TRANSFORMATION
DER
PFLANZEN
.
25
13.
OBERFLAECHENSTERILISATION
VON
TABAKSAMEN
.
26
14
GEWAECHSHAUSVERSUCHE
.
26
III
ERGEBNISSE
.
28
A
ETABLIERUNG
EINES
INFCKTIONSMODELLS
.
28
B
RIP-TRANSGENE
TABAKPFLANZEN
.
33
1.
DIE
VERWENDETEN
KONSTRUKTE:
.
33
2.
MOLEKULARBIOLOGISCHE
ANALYSE
DER
WUNL(-ATG)-RIP
TRANSGENEN
PFLANZEN
.
36
3
PRUEFLING
DER
WUN
1
(-ATG)-RIP
TRANSGENEN
TABAKPFLANZEN
AUF
ERHOEHTE
PILZRESISTENZ:
.
37
4.
MOLCKULARBIOLOGISCHE
ANALYSE
DER
35S-RLP-TRANSGENEN
PFLANZEN'
.
38
5.
PRUEFUNG
DER
35S-RIP-TRANSGENEN
TABAKPFLANZEN
AUF
ERHOEHTE
PILZRESISTENZ:
.
42
6
MOLEKULARBIOLOGISCHE
ANALYSE
DER
35S-SPRIP-TRANSGENEN
PFLANZEN:
.
43
7.
PRUEFUNG
DER
35S-SPRIP-TRANSGCNCN
TABAKPFLANZEN
AUF
ERHOEHTE
PILZRESISTENZ:
.
47
8
ZUSAMMENFASSUNG
DER
DATEN
DER
RIP-TRANSGENEN
TABAKPFLANZEN:
.
47
C.
CHIG-TRANSGENE
TABAKPFLANZEN
.
48
1.
VERWENDETE
KONSTRUKTE
.
48
2.
MOLEKULARBIOLOGISCHE
ANALYSE
DER
WUNL(-ATG)-CHIG-TRANSGENEN
TABAKPFLANZEN
.
50
3.
PRUEFLING
DER
WUNL(-ATG)-CHIG
TRANSGENEN
TABAKPFLANZCN
AUF
ERHOEHTE
PILZRESISTENZ
.
53
4.
MOLEKULARBIOLOGISCHE
ANALYSE
DER
35S-CHIG-TRANSGCNEN
TABAKPFLANZEN
.
53
5.
PRUEFLING
DER
35S-CHIG-TRANSGCNCN
TABAKPFLANZEN
AUF
ERHOEHTE
PILZRESISTENZ
.
55
6.
ZUSAMMENFASSUNG
DER
DATEN
DER
CHIG-TRANSGENEN
TABAKPFLANZEN
.
55
D.
GLUG-TRANSGENE
PFLANZEN
.
56
1.
VERWENDETE
KONSTRUKTE
.
56
2.
MOLEKULARBIOLOGISCHE
ANALYSE
DER
WUNL(-ATG)-GLUG-TRANSGENEN
TABAKPFLANZEN
.
56
3.
PRUEFLING
DER
WUNL(-ATG)-GLUG
TRANSGENEN
PFLANZEN
AUF
ERHOEHTE
PILZRESISTENZ
.
59
4.
MOLEKULARBIOLOGISCHE
ANALYSE
DER
35S-GLUG-TRANSGENEN
TABAKPFLANZEN
.
60
5.
PRUEFLING
DER
35S-GLUG-TRANSGENEN
TABAKPFLANZEN
AUF
ERHOEHTE
PILZRESISTENZ
.
61
6.
ZUSAMMENFASSUNG
DER
DATEN
DER
GLUG-TRANSGENEN
TABAKPFLANZEN
.
64
IV.
DISKUSSION
.
65
A.
DIE
RIP-TRANSGENEN
PFLANZEN
.
68
B
DIE
CHIG-TRANSGENEN
PFLANZEN
.
69
C
DIE
GLUG-TRANSGENEN
PFLANZEN
.
72
D
ZUSAMMENFASSUNG
.
73
E
AUSBLICK
.
74
V.
LITERATUR:
.
76 |
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