Primär-aktiver, ATP-abhängiger Transport von Cysteinyl-Leukotrienen aus Mastozytomzellen und Hepatozyten:
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I
INHALTSVERZEICHNIS
0. ABKUERZUNGEN V
I. ZUSAMMENFASSUNG 1
H. EINLEITUNG 3
I. BIOLOGISCHER TRANSPORT UEBER PLASMAMEMBRANEN 3
1.1. AKTIVE UND PASSIVE TRANSPORTPROZESSE 4
1.2. ATP-BINDENDE, PRIMAER-AKTIVE TRANSPORTPROTEINE 5
1.3. MEHRFACHRESISTENZ IN MALIGNEN TUMOREN 7
1.4. TRANSPORTSYSTEME FUER GLUTATHION-KONJUGATE 8
1.4.1. TRANSPORT AM ISOLIERTEN ORGAN 9
1.4.2. TRANSPORT AM VESIKELMODELL 10
2. LEUKOTRIENE 11
2.1. ARACHIDONAT: VORLAEUFER DER EIKOSANOIDE 12
2.2. BIOSYNTHESEWEGE VON EIKOSANOIDEN 12
2.3. ZELLULAERE QUELLEN VON LEUKOTRIENEN 14
2.4. BIOLOGISCHE WIRKUNG DER LEUKOTRIENE 16
2.5. KATABOLISMUS UND HEPATOBILIAERE EXKRETION 16
2.6. HEMMUNG DER BIOSYNTHESE UND BIOLOGISCHEN WIRKUNG 19
3. FRAGESTELLUNGEN UND ZIELSETZUNG DER ARBEIT
20
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
HTTP://D-NB.INFO/943052386
HI. MATERIAL UND METHODEN
1. RADIOAKTIVE ISOTOPE, CHEMIKALIEN UND ENZYME
1.1. RADIOAKTIV-MARKIERTE EIKOSANOIDE
1.2. CHEMIKALIEN UND ENZYME
2. ZELLKULTUR
2.1. SUSPENSIONSKULTUR VON MASTOZYTOM-ZELLEN
2.1.1. EINFRIEREN UND AUFTAUEN VON ZELLEN
2.1.2. BESTIMMUNG VON ZELLZAHL UND VIABILITAET
2.2. PLASMAMEMBRAN-VESIKEL AUS MASTOZYTOM-ZELLEN
2.3. LEUKOTRIENMETABOLITEN IM MASTOZYTOM-HOMOGENAT
2.3.1. VORBEREITUNG DER ZELLEN ZUR INKUBATION
2.3.2. INKUBATION UND AUFBEREITUNG DER PROBEN
2.3.3. RADIO-RP-HPLC VON [3H]LEUKOTRIENEN
3. AUFNAHME VON [
3H]LEUKOTRIENEN IN PLASMAMEMBRAN-VESIKEL
3.1. INKUBATION MIT [
3H]LEUKOTRIENEN UND [3H]EIKOSANOIDEN
3.2. INKUBATION VON [3H]LTC4 MIT TRANSPORT-HEMMSTOFFEN
3.3. MESSUNG DER AUFNAHME VON [3H]EIKOSANOIDEN IN DIE VESIKEL
3.4. BERECHNUNG DER AUFNAHME UND STATISTIK DER ERGEBNISSE
4. ENDOGENE LEUKOTRIEN-PRODUKTION AN MASTOZYTOM-ZELLEN
4.1. VORBEREITUNG VON ZELLEN AUS DER ZELLKULTUR
4.2.
STIMULATION DER
ZELLEN
MIT CA2+-LONOPHOR
A 23187
4.3. AUFARBEITUNG DER ZELLUEBERSTAENDE UND ZELLSEDIMENTE
4.4. RADIOIMMUNOASSAY (RIA): MESSUNG VON
IR-LTC
4
4.5. HEMMUNG DURCH MK-886 UND MK-571
III
5./6. LEUKOTRIEN-TRANSPORT AN WEITEREN ZELLTYPEN 30
5.1. TIERE 30
5.2. HEPATOZYTENVEREINZELUNG 30
5.3. VORBELADEN VON HEPATOZYTEN MIT CDNB 31
5.3.1. EFFLUX VON DNP-SG AUS HEPATOZYTEN 32
5.3.2. GSH/GSSG-MESSUNG IN HEPATOZYTEN 32
6.1. PRAEPARATION GEMISCHTER MEMBRAN-VESIKEL DER LEBER 33
6.2. TRENNUNG SINUSOIDALER VON KANALIKULAEREN VESIKELN 34
6.3. MARKER-ENZYM-AKTIVITAETEN DER PLASMAMEMBRANEN 34
6.4. PLASMAMEMBRAN-VESIKEL AUS ERYTHROZYTEN 35
IV. ERGEBNISSE 36
1. CYSTEINYL-LEUKOTRIEN TRANSPORT DURCH PLASMAMEMBRAN-VESIKEL VON
MASTOZYTOM-ZELLEN 36
1.1. [
3H]CYSTEINYL-LEUKOTRIENE UND [3H]LEUKOTRIEN B4 36
1.2. K^-WERTE FUER [
3H]LEUKOTRIEN C4 UND ATP 38
1.3. SUBSTRATSPEZIFITAETEN DES TRANSPORTSYSTEMS 40
1.4. METABOLISMUS: [3H]LEUKOTRIENE IM ZELLHOMOGENAT 41
2. HEMMUNG DES ATP-ABHAENGIGEN TRANSPORTS IN MASTOZYTOM-VESIKELN 43
2.1. HEMMUNG DES [
3H]LTC4-TRANSPORTS DURCH VANADAT 43
2.2. HEMMUNG DURCH MK-886, MK-571, LY 245769, DNP-SG 44
2.3. HEMMUNGSTYP VON MK-571, LY 245769, MK-886 45
2.4. HEMMUNG DURCH PGD
2, PGE2, PGF^ 47
2.5. HEMMUNG DURCH VERSCHIEDENE ZYTOSTATIKA 48
3. CYSTEINYL-LEUKOTRIEN TRANSPORT AN INTAKTEN MASTOZYTOM-ZELLEN 49
3.1. ENDOGENE PRODUKTION VON CYSTEINYL-LEUKOTRIENEN 49
3.2. HEMMUNG DER LTC
4-BIOSYTHESE DURCH MK-886 51
3.3. HEMMUNG DES LTC
4-EXPORTS UND DER BIOSYNTHESE DURCH MK-571 52
IV
4. PRIMAER-AKTIVER TRANSPORT VON LEUKOTRIENEN AN DER LEBER
4.1. [
3H]LTC4 UND [3H]DNP-SG ALS SUBSTRATE KANALIKULAERER VESIKEL
4.2. EFFLUX
VON
DNP-SG
AUS ISOLIERTEN HEPATOZYTEN-PRAEPARATIONEN
4.3. TRANSPORT AN NORMALEN/TRANSPORTDEFIZIENTEN LEBER-VESIKELN
4.4. TRANSPORT AN ERYTHROZYTEN-VESIKELN TRANSPORTDEFIZIENTER TIERE
4.5. SUBSTRATSPEZIFITAETEN DES PRIMAER-AKTIVEN TRANSPORTSYSTEMS
4.6. HEMMUNG DES AKTIVEN TRANSPORTS DURCH ZYTOSTATIKA
V. DISKUSSION
61
1. PRIMAER-AKTIVER, ATP-ABHAENGIGER TRANSPORT VON
CYSTEINYL-LEUKOTRIENEN AUS MASTOZYTOM-ZELLEN
1
'L
' CHARAKTENSIERUNG DES TRANSPORTSYSTEMS AM VESIKELMODELL
.2. DARSTELLUNG DES TRANSPORTSYSTEMS AN INTAKTEN ZELLEN
2.
HEMMSTOFFE DES TRANSPORTSYSTEMS AN MASTOZYTOM-ZELLEN
2.1. HEMMUNG DES PRIMAER-AKTIVEN TRANSPORTS AM VESIKELMODELL
2.2. HEMMUNG DES PRIMAER-AKTIVEN TRANSPORTS AN INTAKTEN ZELLEN
65
66
69
3. ATP-ABHANGIGER TRANSPORT VON LEUKOTRIENEN IN DIE GALLE
3.1. CHARAKTERISIERUNG DES TRANSPORTS AN KANALIKULAEREN VESIKELN
3.2. HEMMUNG DES PRIMAER-AKTIVEN TRANSPORTS AM VESIKELMODELL 4
4. SCHLUSSBETRACHTUNG: PRIMAER-AKTIVER, ATP-ABHAENGIGER
TRANSPORT VON CYSTEINYL-LEUKOTRIENEN
4.1. AUSBLICK
VI. LITERATURVERZEICHNIS
70
70
73
74
76
78 |
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