Entwicklung und Bewertung eines Verfahrens zum Nachweis von Legionella spp. in Leitungswasserproben unter Anwendung der Polymerase-Kettenreaktion (PCR):
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INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG
1.1 YY ENTDECKUNG DER LEGIONELLEN
1-2 YY TAXONOMIE DER LEGIONELLACEAE
1-3 YY DIE LEGIONELLOSE
1.4 YY NACHWEIS IN WASSER
1.5 YY FRAGESTELLUNG DER ARBEIT
2. MATERIALIEN
YY GERAETE
YY VERBRAUCHSARTIKEL
YY LOESUNGEN, PUFFER, KULTURMEDIEN UND TESTKITS
YY CHEMISCHE GRUNDSUBSTANZEN, ENZYME UND ANTIKOERPER
YY BAKTERIENSTAEMME
YY PRIMER- UND SONDENSEQUENZEN
3. METHODEN
2.1
2.2
2.3
2.4
2.5
2.6
3.1
3.2
3
.
2.1
3
.
2.2
3
.
2.3
3
.
2.4
3.3
3
.
3.1
3
.
3.2
3
.
3.3
3
.
3.4
3
.
3.5
ENTNAHME VON LEITUNGSWASSERPROBEN
MIKROBIOLOGISCHE METHODEN
HERSTELLUNG VON BAKTERIENZELLSUSPENSIONEN UND
BESTIMMUNG DEREN KEIMZAHLEN
ISOLIERUNG VON LEGIONELLA SPP. AUS LEITUNGSWASSER
PROBEN MITTELS FILTRATION UND KULTUR
EINFRIEREN UND REKULTIVIEREN VON LEGIONELIA-
STAEMMEN
DIREKTER IMMUNFLUORESZENZTEST
MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN
EXTRAKTION DER GESAMT-DNA AUS LEGIONELLA PNEU
MOPHILA
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG VON OUEGONUKLEOTIDEN
RADIOAKTIVE MARKIERUNG UND AUFREINIGUNG DER
GENSONDEN-DNA UND HERSTELLUNG DER
HYBRIDISIERUNGSLOESUNG
REAKTIONSBEDINGUNGEN FUER DIE POLYMERASE-
KETTENREAKTION
ENTFERNUNG DES MINERALOELS AUS DEM
PCR-REAKTIONSGEFAESS NACH DER AMPLIFIKATION
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
HTTP://D-NB.INFO/943052033
3.3.6
3.3.7
3.3.8
SOUTHERN"
RT'.'^U .AGAROSE'GE,ELEKTRPL'ORESE,
S:
32
YBRIDISIERUNG UND AUTORADIOGRAOHIE
I A
KOMMERZIELLES TESTKIT BIOGRAPHIE 3 4
36
4
* ERGEBNISSE
4.1
4.1.1
4.1.2
4.1.3
4.1.4
4.1.5
4.1.6
*4.1.7
4.1.8
4.1.9
4.1.10
4.2
5- DISKUSSION
SPP-
IN ^LEITUNGSWASSERPROBEN* NAHVFEIS VON LEGIONE,LA
'
D^PCTP^UKT ELEKTROPHORETISCHE, AUFTREYYYYYYYYYYG
WAHL DES PRIMERSYSTEMS
FIFSAUES""
8 ^ ZUSAMMENSET2U"8 DES REAKTIONS-
- OPTIMIERUNG DER PROBENVORBEREITUNG
BESTIMMUNG DER SENSITIVITAET DES ENTWICKELTEN
VERFAHRENS ZUM NACHWEIS VON LEGIONELIA SPP
UEBERPRUEFUNG DER SPEZIFITAET DES ENTWICKELTEN
VERFAHRENS ZUM NACHWEIS VON LEGIONELLA SPP
EINFLUSS VON STERILISATIONSMETHODENAUF DEN NACHWEIS
VON LEGIONELLA SPP. MITTELS
PCR
AMPLIFIKATION EINES UNSPEZIFISCHEN DNA-FRAGMENTS
IN DER NEGATIVKONTROLLE AGMENTS
AES,
T ^"AESTER
765"'5
39
39
39
4 1
42
42
45
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53
56
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5.1.2
5.1.3
5.2
5.2.1
5.2.2
5.3
5.3.1
5.3.2
5.3.3
VO. LEGIONELLEN 62
. ; . ,-U,,U ^U-UWEIS VON LEGIC
V K
YY
BLOLOGISCHE EIGENSCHAFTEN DER LEGIONELLFN
VERBREITUNG DER LEGIONELLEN
- NACHWEIS VON LEGIONELLEN IN WASSERPROBEN
DIE LEGIONELLOSEN
F
-
DAS PONTIAC-FIEBER
- DIE LEGIONELLA-PNEUMONIE
DIE POLYMERASE-KETTENREAKTION
(PCR)
- ANWENDUNGEN
- PRINZIP
' S"
ZINSHTITUTSR
EINF"HRUN8 DER
PCR IM LAB0R DES
62
63
63
64
64
64
68
68
69
71
5.4
5.4.1
5.4.2
5.4.3
5.4.4
5.4.5
5.4.6
5.5
5.5.1
5.5.2
5.5.3
5.6
ENTWICKLUNG DER METHODE ZUM NACHWEIS VON LEGIONELLA
SPP
' AUTOKLAVTRENTNTHILZSTERILISIEREN VON REAKTIONS-
GEFAESSEN . ,
- UNSPEZIFISCHE BANDE BEI 104 BP
- WEITERE UNSPEZIFISCHE BANDEN
- SENSITIVITAET
- AUFBEREITUNG VON LEITUNGSWASSERPROBEN
VERGLEICH
VON PCR, KULTUR UND KIT YY ,
- VERGLEICH: PCR AUS 1,5 ML UND PCR AUS 100 ML
(EIGENE EXPERIMENTELLE PCR)
. VERGLEICH:
PCR AUS 100 ML UND KULTUR
- VERGLEICH: PCR AUS 100 ML UND TESTKIT
SCHLUSSFOLGERUNGEN UND AUSBLICK
6.
ZUSAMMENFASSUNG
72
72
74
74
75
75
76
76
76
78
79
80
81
7.
ANHANG
7.1 YY ABKUERZUNGEN
7
2
YY LITERATUR
7.3
YY EIGENE VEROEFFENTLICHUNGEN
7.4 YY LEBENSLAUF
83
85
106
107 |
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