DNA-Bindung und Protein-Interaktion des 86-Kilodalton-IE-2-Proteins des menschlichen Cytomegalovirus:
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1994
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1
INHALTSVERZEICHNIS
A)
ZUSAMMENFASSUNG
.
3
B)
EINLEITUNG
.
4
C)
MATERIALIEN
UND
METHODEN
.
9
1.
BAKTERIEN
UND
EUKARYOTE
ZELLEN
.
9
2.
NUKLEINSAEUREN
.
9
2.1
OLIGONUKLEOTIDE
.
9
2.2
PLASMIDE
.
10
2.3
SONSTIGE
NUKLEINSAEUREN
.
12
3.
ENZYME
UND
REAGENZGEMISCHE
.
12
4.
STANDARDMETHODEN
ZUR
ISOLATION,
MODIFIKATION
UND
ANALYSE
VON
NUKLEINSAEUREN
.
13
5.
PRAPARATION
VON
PROKARYOT
EXPRIMIERTEN
PROTEINEN
.
14
6.
DELETIONSMUTAGENE.SE
.
15
7.
PROTEIN-GELELEKTROPHORESE
UND
IMMUNOBLOT
.
15
8.
ZELLKULTUR,
TRANSFEKTION
UND
LUZIFERASEANALYSE
.
16
9.
METHODEN
ZUR
UNTERSUCHUNG
VON
PROTEIN/DNA-INTERAKTIONEN
.
17
9.1
DNASEL-SCHUTZEXPERIMENTE
(DNASEL-FOOTPRINT)
.
17
9.2
GELRETARDATIONS-ANALYSE
.
18
9.3
METHYLIERUNGS
UND
ETHYHERUNGS-INTERFERENZANALYSE
(ML-,
EL-ANALYSE)
18
9.4
HYDROXYLRADIKAL-INTERFERENZANALYSE
(HRL-ANALYSE)
.
19
9.5
PHENANTHROLIN-KUPFER-PROTEKTIONSANALYSE
.
19
10.
METHODEN
ZUR
UNTERSUCHUNG
VON
PROTEIN/PROTEIN-LNTERAKTIONEN
.
20
10.1
IN
VUERO-TRANSLATION
VON
PROTEINEN
.
20
10.2
PROTEIN-AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
UND
GLUTATHION-S-TRANSFERASE
(GST)
FUSIONSPROTEINE
.
20
10.3
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
PROTEINEN
UND
FAR-WESTEM
BLOTANALYSE
.
21
D)
ERGEBNISSE
.
23
1.
DIE
INTERAKTION
DES
86-KDA
IE-2
PROTEINS
MIT
DNA
.
23
L
.
1
NACHWEIS
EINER
INTERAKTION
DES
IE86-PROTEINS
IM
IE
1/2
PROMOTORBEREICH
.
23
1.2
CHARAKTERISIERUNG
DES
EINFLUSSES
SPEZIFISCHER
UND
UNSPEZIFISCHER
DNA-KOMPETITOREN
AUF
DIE
IE86/CRS-WECHSELWIRKUNG
.
27
1.3
NACHWEIS
EINER
SUPERRETARDATION
DURCH
EINEN
FUER
IE86
SPEZIFI
SCHEN,
MONOKLONALEN
ANTIKOERPER
IN
DER
GELRETARDATIONS-ANALYSE
.
29
1.4
NACHWEIS
EINER
GLEICHZEITIGEN
INTERAKTION
DES
1E86
UND
DES
TATA
BOX
BINDENDEN
PROTEINS
(TBP)
IM
IE
1/2
PROMOTORBEREICH
.
31
1.5
CHARAKTERISIERUNG
DER
IE86/CRS-BINDUNGSSTELLE
DURCH
PHENANTHROHN-KUPFER-PROTEKTIONSANALYSE
.
32
1.6
IDENTIFIZIERUNG
INDIVIDUELLER
NUKLEOSIDKONTAKTE
DES
1E86-PROTEINS
AM
CRS
DURCH
HYDROXYLRADIKAL-LNTERFERENZANALYSE
.
33
2
1.7
NACHWEIS
VON
"MINOR
GROOVE"-KONTAKTEN
DES
IE86-PROTEINS
AM
CRS
DURCH
METHYLIERUNGS-INTERFERENZANALYSE
.
35
1.8
NACHWEIS
DER
BINDUNG
DES
IE86-PROTEINS
AN
EIN
INOSIN-SUBSTITU
IERTES
CRS-ELEMENT
.
36
1.9
IDENTIFIZIERUNG
VON
PHOSPHATKONTAKTEN
DES
IE86-PROTEINS
AM
CRS-ELEMENT
DURCH
ETHYLIERUNGS-INTERFERENZANALYSE
.
38
1.10
NACHWEIS
DER
BINDUNG
VON
IE86
AN
EINEM
PALINDROMEN
CRS
ELEMENT
DURCH
GELRETARDATIONS-ANALYSE
.
40
1.11
IDENTIFIZIERUNG
VON
"MINOR
GROOVE"-KONTAKTEN
VON
IE86
AM
PALINDROMEN
CRS
DURCH
METHYLIERUNGS-INTERFERENZANALYSE
.
41
1.12
IDENTIFIZIERUNG
VON
DREI
IE86-BINDUNGSSTELLEN
INNERHALB
EINES
FRUEHEN
PROMOTORS
DES
HCMV
DURCH
DNASEL-PROTEKTIONSANALYSE
.
42
1.13
NACHWEIS
VON
"MINOR
GROOVE"-KONTAKTEN
VON
IE86
AM
EAIE2
MOTIV
DURCH
METHYLIERUNGS-INTERFERENZANALYSE
.
44
2.
FUNKTIONELLE
ANALYSEN
ZUR
TRANSAKTIVIERUNG
DES
ULI
12-PROMOTORS
DURCH
IE86
.
45
2.1
FUNKTIONELLE
CHARAKTERISIERUNG
DER
IE86-BINDUNGSSTELLEN
DES
ULI
12-PROMOTORS
DURCH
DELETIONSMUTANTENANALYSE
.
45
2.2
FUNKTIONELLE
CHARAKTERISIERUNG
DER
IE86-BINDUNGSSTELLEN
DURCH
CIS-TRANSFERANALYSEN
.
46
3.
NACHWEIS
DER
INTERAKTION
VON
IE86
MIT
ATF/CREB-PROTEINEN
.
48
3.1
NACHWEIS
EINER
CREB-2
BINDUNGSSTELLE
IM
UL
11
2-PROMOTOR
DURCH
DNASEL-PROTEKTIONSANALYSE
.
48
3.2
NACHWEIS
EINER
DIREKTEN
INTERAKTION
VON
IE86
MIT
DEM
TRANSKRIP
TIONSFAKTOR
CREB-2
DURCH
FAR-WESTEM
BLOTANALYSE
.
50
3.3
LOKALISATION
DER
CREB-2-INTERAKTIONSDOMAENE
VON
IE86
DURCH
FAR-WESTERN
BLOTANALYSE
.
51
3.4
IDENTIFIZIERUNG
WEITERER
IE86-INTERAKTIONSPARTNER
AUS
DER
FAMILIE
DER
ATF/CREB-PROTEINE
.
52
D)
DISKUSSION
.
54
E)
LITERATURVERZEICHNIS
.
63
F)
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
SO |
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