Untersuchungen zur Regulation der Hämatopoese durch lymphozytäre Subpopulationen bei Patienten mit aplastischer Anämie:
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II
INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1.
EINLEITUNG
1
1.1
NORMALE
HAEMATOPOESE
1
1.1.1
STAMMZELLEN
1
1.1.2
DIE
ZYTOKINE,
REGULATIONSPROTEINE
DER
HAEMATOPOESE
2
1.1.2.1
KOLONIEN
STIMULIERENDE
FAKTOREN
3
1.1.2.2
ERYTHROPOIETIN
5
1.1.2.3
STAMMZELL-FAKTOR
5
1.1.2.4
INTERLEUKIN
1
(IL-1)
6
1.1.2.5
LNTERLEUKIN-2
(IL-2)
7
1.1.2.6
LNTERLEUKIN-6
(IL-6)
8
1.1.2.7
LNTERLEUKIN-7
(IL-7)
8
1.1.2.8
INTERFERON-A,
-SS,
-7
(IFNA,
-SS,
-7)
9
1.1.2.9
TUMOR-NEKROSE-FAKTOR
(TNF)
9
1.1.3
EINFLUSS
LYMPHOIDER
ZELLEN
AUF
DIE
REGULATION
DER
HAEMATOPOESE
10
1.1.3.1
T-LYMPHOZYTEN
11
1.1.3.2
NATUERLICHE
KILLERZELLEN
(NK-ZELLEN)
11
1.1.3.3
KLINISCHE
RELEVANZ
FUER
LYMPHOZYTAERE-HAEMATOPOETISCHE
INTERAKTIONEN
12
1.2
PATHOLOGISCHE
HAEMATOPOESE
APLASTISCHE
ANAEMIE
12
1.2.1
PATHOGENESE
DER
APLASTISCHEN
ANAEMIE
12
1.2.1.1
ANGEBORENE
FORMEN
DER
APLASTISCHEN
ANAEMIE
12
1.2.1.2
IDIOPATHISCHE
APLASTISCHE
ANAEMIE
13
1.2.1.3
SEKUNDAER
ERWORBENE
FORMEN
DER
APLASTISCHEN
ANAEMIE
13
1.2.2
PATHOPHYSIOLOGIE
DER
APLASTISCHEN
ANAEMIE
14
III
1.2.2.1
STAMMZELLEN
UND
STROMA
14
1.2.2.2
IMMUNSUPPRESSION
DER
HAEMATOPOESE
14
1.2.3
THERAPIE
UND
KLINISCHER
VERLAUF
DER
APLASTISCHEN
ANAEMIE
16
1.2.3.1
ANTI-LYMPHOZYTEN-GLOBULIN
(ALG)
17
1.2.3.2
METHYLPREDNISOLON
(MP)
17
1.2.3.3
CYCLSPORIN
A
(CSA)
17
1.2.3.4
THERAPIESCHEMA
DER
DREIFACHTHERAPIE
MIT
ALG,
MP,
CSA
18
1
2.3.5
DIAGNOSE
UND
KLASSIFIZIERUNG
DER
PATIENTEN
MIT
AA
18
1.2.3.6
EVALUATIONSKRITERIEN
NACH
THERAPIE
19
1.3
DAS
IMMUNSYSTEM
19
1.3.1
PRIMAERE
LYMPHATISCHE
ORGANE
20
1.3.2
SEKUNDAERE
LYMPHATISCHE
ORGANE
21
1.3.3
DER
LYMPHOZYTENKREISLAUF
21
1.3.4
B-LYMPHOZYTEN
22
1.3.5
T-LYMPHOZYTEN
22
1.3.5.1
T-ZELL-REZEPTOR-KOMPLEX
23
1.3.5.2
AKTIVIERUNG
VON
T-ZELLEN
25
1.3.5.3
78-T-ZELLEN
26
2.
FRAGESTELLUNG
29
3.
METHODEN
30
3.1
ANALYTISCHE
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
30
3.1.1
AUFBAU
UND
FUNKTION
EINES
DURCHFLUSSZYTOMETERS
30
3.1.1.1
PROBENZUFUEHRUNG
30
3.1.1.2
MESSUNG
DER
LICHTSTREUUNG
30
3.1.1.3
MESSUNG
DER
FLUORESZENZ
31
IV
3.1.1.4
SIGNALVERARBEITUNG
AUSWERTUNG
YY
31
3.1.1.5
DREI-FARBEN-FACS-ANALYSEN
34
3.2
ZELLSORTIERUNG
35
3.3
IN
VITRO
KULTIVIERUNG
HAEMATOPOETISCHER
ZELLEN
36
3.3.1
KULTIVIERUNG
IN
SEMISOLIDEN
MEDIEN
36
3.3.2
SUSPENSIONSKULTUREN
37
3.4
MATERIALIEN
UND
ARBEITSVORECHRIFTEN
38
3.4.1
ZYTOKINE,
MEDIEN,
CHEMIKALIEN,
PLASTIKMATERIALIEN,
ANTIKOERPER
38
3.4.1.1
ZYTOKINE
38
3.4.1.2
MEDIEN
38
3.4.1.3
CHEMIKALIEN
UND
PROTEINE
38
3.4.1.4
PLASTIKMATERIALIEN
39
3.4.1.5
MONOKLONALE
UND
POLYKLONALE
ANTIKOERPER
39
3.4.2
FACS-MARKIERUNG
MIT
DIREKT
MARKIERTEN
ANTIKOERPERN
39
3.4.3
FACS-MARKIERUNG
MIT
UNMARKIERTEN
ANTIKOERPERN
(SEKUNDAERMARKIERUNG)
40
3.4.4
FACS-MARKIERUNG
MIT
PROPIDIUM-JODID
ZUR
VIABILITAETSBESTIMMUNG
40
3.4.5
FACS-MARKIERUNG
ZUR ZELLSORTIERUNG
MIT
FACSTAR
41
3.4.6
ZUBEREITUNG
DER
METHYLZELLULOSE
41
3.4.7
METHYLZELLULOSE-ANSATZ
ZUR
KULTIVIERUNG
HAEMATOPOETISCHER
VORLAEUFERZELLEN
41
3.4.8
HERSTELLUNG
VON
MEDIEN
(1X)
AUS
PULVER
42
3.4.9
HERSTELLUNG
VON
IMDM
(1X)
AUS
PULVER
42
3.4.10
SERUMHALTIGES
MEDIUM
43
3.4.11
SERUMFREIES
MEDIUM
43
3.4.12
SERUMFREIER
MC-ANSATZ
45
3.4.13
ZELLZAEHLUNG
UND
VIABILITAETSBESTIMMUNG
45
V
3.4.14
EINFRIEREN
VON
ZELLMATERIAL
46
3.4.15
AUFTAUEN
VON
ZELLMATERIAL
46
3.4.16
ISOLIERUNG
MONONUKLEAERER
ZELLEN
AUS
PB
UND
KM
UEBER
FICOLL-DICHTE
-
GRADIENTEN-ZENTRIFUGATION
46
3.4.17
ADHAERENZ
ZUR
DEPLETION
ODER
ISOLIERUNG
VON
MONOZYTEN
47
3.4.18
PANNING:
METHODE
ZUR
ZELLANREICHERUNG
VON
ZELLULAEREN
SUBPOPULATIONEN
47
3.4.19
ISOLIERUNG
CD34+
KM-ZELLEN
UEBER
AFFINITAETSSAEULEN
49
3.5
ERGEBNISBERECHNUNG
UND
STATISTIK
51
3.5.1
ERGEBNISBERECHNUNG
51
3.5.2
STATISTISCHE
PRUEFVERFAHREN
AUF
SIGNIFIKANTE
UNTERSCHIEDE
52
3.6
PATIENTENKOLLEKTIVE
UND
NORMALPERSONEN
56
4.
ERGEBNISSE
58
4.1
PHAENOTYPISCHE
CHARAKTERISIERUNG
PERIPHERER
LYMPHOZYTEN
VON
PATIENTEN
MIT
ERWORBENEN
APLASTISCHEN
ANAEMIE
58
4.1.1
VERTEILUNG
VON
T-ZELLEN,
B-ZELLEN
UND
NATUERLICHEN
KILLERZELLEN
58
4.1.2
ANTEIL
DER
ASS-,
Y8-,
UND
8TCS1-T-ZELLEN
IM
PERIPHEREN
BLUT
VON
AA-PATIENTEN
62
4.1.3
VERTEILUNG
DES
ANTIGEN
CD28
AUF
T-ZELLEN
IM
PERIPHEREN
BLUT
VON
PATIENTEN
MIT
AA
67
4.1.4
AKTIVIERTE
T-ZELLEN
IM
PERIPHEREN
BLUT
VON
PATIENTEN
MIT
AA
70
4.2
CHARAKTERISIERUNG
LYMPHOZYTAERER
ZELL-POPULATIONEN
IM
KNOCHENMARK
(KM)
VON
PATIENTEN
MIT
AA
72
4.3
FUNKTIONELLE
UNTERSUCHUNGEN
VON
ASS
UND 78-T-ZELLEN
VON
PATIENTEN
MIT
AA
VON
PATIENTEN
MIT
AA
HINSICHTLICH
SUPPRIMIERENDER
EIGENSCHAFTEN
AUF
DAS
WACHSTUM
VON
KNOCHENMARKVORLAEUFERZELLEN
74
4.3.1
AUTOLOGE
KOKULTUREN
VON
T-ZELLEN
UND
T-ZELL-DEPLETIERTEN
KNOCHENMARKZELLEN
74
4.3.2
KOKULTUREN
VON
ASS
UND
78-T-ZELLEN
VON
PATIENTEN
MIT
AA
MIT
ALLOGENEN
CD34+
KM-ZELLEN
VON
NORMALPERSONEN
75
5.
DISKUSSION
83
VI
5.1
PHAENOTYPISCHE
CHARAKTERISIERUNG
PERIPHERER
LYMPHOZYTEN
VON
PATIENTEN
MIT
ERWORBENEN
APLASTISCHEN
ANAEMIE
83
5.1.1
VERTEILUNG
VON
T-ZELLEN,
B-ZELLEN
UND
NATUERLICHEN
KILLERZELLEN
84
5.1.2
ANTEIL
DER
ASS-,
76-,
UND
5TCS1-T-ZELLEN
IM
PERIPHEREN
BLUT
VON
AA-PATIENTEN
85
5.1.3
UNTERSUCHUNG
DES
ANTIGEN
CD28
AUF
T-ZELLEN
IM
PERIPHEREN
BLUT
VON
PATIENTEN
MIT
AA
87
5.1.4
AKTIVIERTE
T-ZELLEN
IM
PERIPHEREN
BLUT
VON
PATIENTEN
MIT
AA
88
5.2
CHARAKTERISIERUNG
LYMPHOZYTAERER
ZELL-POPULATIONEN
IM
KNOCHENMARK
(KM)
VON
PATIENTEN
MIT
AA
89
5.3
FUNKTIONELLE
UNTERSUCHUNGEN
VON
ASS
UND 78-T-ZELLEN
VON
PATIENTEN
MIT
AA
VON
PATIENTEN
MIT
AA
HINSICHTLICH
SUPPRIMIERENDER
EIGENSCHAFTEN
AUF
DAS
WACHSTUM
VON
KNOCHENMARKVORLAEUFERZELLEN
90
5.3.1
AUTOLOGE
KOKULTUREN
VON
T-ZELLEN
UND
T-ZELL-DEPLETIERTEN
KNOCHENMARKZELLEN
90
5.3.2
KOKULTUREN
VON
ASS
UND
78-T-ZELLEN
VON
PATIENTEN
MIT
AA
MIT
ALLOGENEN
CD34+
KM-ZELLEN
VON
NORMALPERSONEN
91
5.3.3
ZUSAMMENHANG
DER
ERGEBNISSE
MIT
MOEGLICHEN
PATHOPHYSIOLOGISCHEN
MECHANISMEN
DER
AA
93
6.
ZUSAMMENFASSUNG
94
7.
LITERATURVERZEICHNIS
97 |
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