Corynebacterium glutamicum: Untersuchungen zum Lysinexport und Isolierung der Gene des Glutamatimports - einem Bindeprotein-abhängigen Transportsystem
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Jülich
Forschungszentrum, Zentralbibliothek
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1.
EINLEITUNG
1
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
9
2.1.
BAKTERIENSTAEMME
UND
PLASMIDE
9
2.2.
NAEHRMEDIEN
UND
KULTURBEDINGUNGEN
11
2.2.1.
NAEHRMEDIEN
11
2.2.2.
KULTIVIERUNG
DER
BAKTERIEN
12
2.3.
BESTIMMUNG
ZELLINTEMER
UND
-EXTERNER
AMINOSAEUREKONZENTRATIONEN
13
2.3.1.
SILIKONOELZENTRIFUGATION
13
2.3.2.
REVERSEDPHASE
HPLC
14
2.4.
MESSUNG
DER
GLUTAMATAUFHAHME
14
2.5.
BESTIMMUNG
DER
ASPARTATKINASE-AKTIVITAET
15
2.6.
GENETISCHE
TECHNIKEN
17
2.6.1.
DNA
TECHNIKEN
17
2.6.2.
TECHNIKEN
ZUR
TRANSFORMATION
VON
ZELLEN
2.6.3.
OPTIMIERTE
METHODE
ZUR
HERSTELLUNG
VON
PLASMIDGENBANKEN
IN
18
C.
GLUTAMICUM
20
2.6.4.
HERSTELLUNG
VON
PHAGENLYSATEN
21
2.7.
SYNTHESE,
REINIGUNG
UND
MARKIERUNG
VON
OLIGONUKLEOTIDEN
21
2.8.
SOUTHERN-HYBRIDISIERUNG
22
2.9.
DNA-SEQUENZIERUNG
UND
SEQUENZANALYSE
24
3_
ERGEBNISSE
27
3.1.
LYSINEXPORT
3.1.1.
UNTERSUCHUNG
DER
MUTANTE
3
5/48
MIT
DEFEKT
27
IM
LYSINEXPORT
3.1.2.
ISOLIERUNG
RESTRIKTIONSDEFEKTER
MUTANTEN
VON
35/48
27
MIT
HILFE
DES
PHAGEN
CL3
1
3.1.3.
EINFUEHRUNG
EINER
COSMIDBANK
IN
3
5/48RES-A
DURCH
KONJUGATION
UND
29
KOMPLEMENTATIONSEXPERIMENTE
31
3
1.3.1.
KOMPLEMENTATIONSEXPERIMENTE
MIT
EINER
PWKO-PLASMIDGENBANK
32
3.1.4.
KONSTRUKTION
DES
RESTRIKTIONSDEFEKTEN
LYSINPRODUZENTEN
II7/3
3.1.5.
METHIONINEFFEKT
AUF
DIE
LYSINPRODUKTION
UND
ISOLIERUNG
32
DER
MUTANTE
NA8
34
3
1.5.1.
DIREKTE
ERSTELLUNG
EINER
PLASMIDGENBANK
IN
DER
MUTANTE
NA8
36
3.2.
KONSTRUKTION
VON
LOW-COPY
VEKTOREN
UND
ANWENDUNG
ZUR
EXPRESSION
EINES
AUF
HIGH-COPY-VEKTOREN
INSTABILEN
GENS
37
3.2.1.
KONSTRUKTION
DES
ZOVV-CQPJ-VEKTORS
PWKO
37
3.2.2.
KONSTRUKTION
DER
/OIV-CQPY-VEKTOREN
PKWO
UND
PKW3
39
SEITE
3.2.3.
ANWENDUNG
VON
PWKO
ZUR
UNTERSUCHUNG
DER
UEBEREXPRESSION
DER
DEREGULIERTEN
HOMOSERINDEHYDROGENASE
42
3.3.
ISOLIERUNG
DES
GLUTAMATAUFNAHMESYSTEMS
44
3.3.1.
BESTIMMUNG
DER
GLUTAMATAUFNAHME
BEI
DER
MUTANTE
MIO
46
3
.3.2.
KOMPLEMENTATION
VON
M
10
MIT
HILFE
EINER
PLASMIDGENBANK
IM
LOW-COPY
VEKTOR
PKW3
47
3.3.3.
EINGRENZUNG
DES
KOMPLEMENTIERENDEN
FRAGMENTS
DURCH
HYBRIDISIERUNG
MIT
EINEM
SYNTHETISCHEN
OLIGONUKLEOTID
48
3.3.4.
SEQUENZIERUNG
DES
KOMPLEMENTIERENDEN
DNA-FRAGMENTS
49
3.3.5.
HOMOLOGIEVERGLEICHE
UND
ANALYSEN
DER
OFFENEN
LESERASTER
5
5
3.3.5.1.
SEQUENZANALYSE
VON
GHIA
UND
DEM
ABGELEITETEN
PROTEIN
55
3.3
5.2.
SEQUENZANALYSE
VON
GLUB
UND
DEM
ABGELEITETEN
PROTEIN
58
3.3.5.3.
SEQUENZANALYSE
VON
GLUC
UND
DEM
ABGELEITETEN
PROTEIN
59
3.3.5.4.
SEQUENZANALYSE
VON
GLUD
UND
DEM
ABGELEITETEN
PROTEIN
59
3.3.6.
SEQUENZIERUNG
DER
DEN
G/W-GENEN
BENACHBARTEN
DNA-BEREICHE
60
3.3.7.
MESSUNG
DER
GLUTAMATAUFNAHME
NACH
UEBEREXPRESSION
DES
SEQUENZIERTEN
BEREICHES
IM
WILDTYP
13032
61
6.
LITERATURVERZEICHNIS
4.
DISKUSSION
65
4.1.
LYSINEXPORT
4.2.
VERWENDUNG
DES
LOW-COPY
VEKTORS
PWKO
ZUR
UEBEREXPRESSION
65
VON
HOM-1
4.3.
GLUTAMATAUFNAHME
67
68
5.
ZUSAMMENFASSUNG
76
77 |
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| topic_facet | Lysin Resorption Exkretion Glutamate Corynebacterium glutamicum Hochschulschrift |
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