Einsatz von Megabasentechniken bei Gerste, insbesondere die Klonierung von Gersten-DNA in künstliche Hefechromosomen (YACs):
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Aachen
Shaker
1995
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INHALTEVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
.
1
2
LITERATURUEBERSICHT
.
2
2.1
MOLEKULARE
MARKER
.
2
2.2
TECHNIKEN
ZUR
ANREICHERUNG
SPEZIFISCHER
GENOMISCHER
REGIONEN
MIT
MOLEKULAREN
MARKERN
.
5
2.3
PULS-FELD-GEL-ELEKTROPHORESE
(PFGE)
.
9
2.4
METHODEN
ZUR
KARTENGESTUETZTEN
KLONIERUNG
VON
GENEN
.
12
2.4
1
BAKTERIELLE
SYSTEME
ZUR
KLONIERUNG
GROSSER
DNA-FRAGMENTE
.
13
2
4.2
KUENSTLICHE
HEFECHROMOSOMEN
(YACS)
.
13
2
4.3
YAC-BANKEN
UND
IHRE
ANWENDUNG
BEI
PFLANZLICHEN
GENOMEN
.
18
3
MATERIAL
UND
METHODEN
.
21
3.1
PFLANZENMATERIAL
.
21
3.2
VEKTOREN
UND
WIRTSSTAEMME
.
21
*
3.3
DNA-MOLEKULARGEWICHTSTANDARDS
.
23
3
4
STANDARDMETHODEN
.
24
3
5
ISOLATION
HOCHMOLEKULARER
DNA
AUS
GERSTE
.
29
3.6
KLONIERUNG
VON
GERSTEN-DNA
IN
HEFE
.
30
3.7
SICHTUNG
DER
YAC-BANK
.
38
3.8
ISOLATION
VON
ENDSTAENDIGEN
SEQUENZEN
DER
YAC-INSERTIONEN
.
43
4
ERGEBNISSE
.
46
4
1
KLONIERUNG
VON
MEGABASEN-DNA
DER
GERSTE
IN
HEFE
.
46
4.2
CHARAKTERISIERUNG
DER
YAC-BANK
.
50
4.2
1
GROESSE
DER
KLONE
UND
REPRAESENTANZ
DER
YAC-BANK
.
50
4.2.2
EXPERIMENTE
ZUR
UEBERPRUEFUNG
DER
STABILITAET
VON
YAC-KLONEN
.
55
4
3
SICHTUNG
DER
YAC-BANK
.
.
58
4.3.1
VERGLEICH
UND
ENTWICKLUNG
GEEIGNETER
VERFAHREN
ZUR
SICHTUNG
DER
YAC
BANK
.
58
4.3.2
SICHTUNG
DER
YAC-BANK
MIT
SONDEN
AUS
DEM
BEREICH
DES
AF/A-LOCUS
.
61
4
4
GEWINNUNG
TERMINALER
INSERTSEQUENZEN
MIT
HILFE
DER
"INVERSEN-PCR-REAKTION"
.
66
VIII
INHALTSVERZEICHNIS
5
DISKUSSION
.
68
5.1
STAND
UND
PROBLEME
DER
YAC-KLONIERUNG
DES
GERSTENGENOMS
.
68
5.2
WEGE
ZUR
VERWENDUNG
VON
YAC-KLONEN
DES
GERSTENGENOMS
IN
DER
ZUECHTUNGS
FORSCHUNG
.
82
6
ZUSAMMENFASSUNG
.
88
7
LITERATURVERZEICHNIS
.
89
8
ANHANG
.
107
8.1
CHEMIKALIEN,
MEDIENZUSAETZE,
ENZYME
.
107
8.2
ANALYSIERTE
KLONE
MIT
MIKROTITERPLATTENADRESSEN
.
110 |
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