Kernresonanzspektroskopische Untersuchungen zur Ethanolinhibierung und Nebenproduktbildung bei Zymomonas mobilis:
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Jülich
Forschungszentrum
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INHALT
1.
EINLEITUNG
1
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
9
2.1
CHEMIKALIEN
UND
ENZYME
9
2.2
ORGANISMEN
9
2.3
NAEHRMEDIEN
UND
KULTIVIERUNG
9
2.4
BESTIMMUNG
DES
BAKTERIENWACHSTUMS
11
2.5
NMR-MESSUNGPN
12
2.5.1
/H-V/'VO-NMR-SPEKTROSKOPIE
12
2.5.2
$
1
P-NMR-SPEKTROSKOPIE
VON
PERCHLORSAEURE-EXTRAKTEN
13
2.5.3
BESTIMMUNG
VON
1
^C-ANREICHERUNGEN
14
2.6
BESTIMMUNG
VON
ENZYMAKTIVITAETEN
15
2.6.1
HERSTELLUENG
VON
ZELLFREIEM
ROHEXTRAKT
15
2.6.2
PHOTOMETRISCHE
ENZYMTESTS
15
2.6.3
NMR-SPEKTROSKOPISCHE
ENZYMTESTS
18
2.6.4
PROTEINBESTIMMUNG
19
2.7
BESTIMMUNG
DES
CYTAPLASMAVOLUMENS
19
2.8
QUANTITATIVE
BESTIMMUNG
VON
SUBSTRATEN
UND
PRODUKTEN
20
2.8.1
BESTIMMUNG
MITTELS
ENZYMATISCHER
METHODEN
20
2.8.2
BESTIMMUNG
MITTELS
GASCHROMATOGRAPHIE
23
2.8.3
BESTIMMUNG
MITTELS
HPLC
23
3.
ERGEBNISSE
24
3.1
DER
GLUCOSE-STOFFWECHSEL
IN
Z.
MOBILIS
24
3.1.1
/N-WVO-3
1
P-NMR-MESSUNGEN
24
3.1.2
IN-VITRO-^
1
P-NMR-MESSUNGEN
31
3.1.2.1
IDENTIFIZIERUNG
UND
QUANTIFIZIERUNG
DER
SIGNALE
VON
EXTRAKTSPEKTREN
31
3.1.2.2
BESTIMMUNG
INTRAZELLULAERER
METABOLIT
KONZENTRATIONEN
NACH
EINEM
GLUCOSEPULS
38
3.2
DER
EINFLUSS
VON
ETHANOL
AUF
DEN
GLUCOSE-STOFFWECHSEL
IN
Z.
MOBILIS
42
3.2.1
/N-V/VO-NMR-SPEKTROSKOPIE
VON
Z.
MOB/7/S-SUSPENSIONEN
IN
GEGENWART
VON
ETHANOL
42
3.2.2
31
P-NMR-SPEKTROSKOPIE
VON
PERCHLORSAEURE-EXTRAKTEN
44
3.2.3
EINFLUSS
VON
ETHANOL
AUF
DIE
SPEZIFISCHEN
AKTIVITAETEN
DER
PHOSPHOGLYCERAT-MUTASE
UND
ENOLASE
47
3.3
DIE
NEBENPRODUKTBILDUNG
IN
Z.
MOBILIS
48
3.3.1
DER
EINFLUSS
VON
SUBSTRAT
UND
WACHSTUMSBEDINGUNGEN
AUF
DIE
NEBENPRODUKTBILDUNG
48
3.3.2
DIE
BIOSYNTHESE
DER
NEBENPRODUKTE
56
3.3.2.1
FERMENTATIONEN
MIT
1
^C-ANGEREICHERTEN
ZUCKERN
56
3.3.2.2
ENZYMATISCHE
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
NEBENPRODUKTBILDUNG
60
4.
DISKUSSION
66
5.
ZUSAMMENFASSUNG
79
6.
LITERATUR
81
7.
ANHANG
87 |
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