Untersuchungen zur Solubilisierung und Isolierung NPA-(Naphthylphthalamidsäure)-bindender Proteine aus Mais (Zea mays L.):
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-I-
INHALTSVERZEICHNIS
ABKOERZUNGSVERZEICHNIS.IV
1 EINLEITUNG.1
1.1 EINFUEHRUNG UND UEBERSICHT.1
1.2 AUXIN UND AUXIN-BINDENDE-PROTEINE.2
1.3 AUXINTRANSPORT.4
1.4 PHYTOTROPINWIRKUNG UND -BINDUNG.5
2 MATERIAL UND METHODEN.8
2.1 MATERIAL.8
2.1.1 PFLANZENMATERIAL.8
2.1.2 GERAETE. 8
2.1.2.1 ZENTRIFUGEN UND ROTOREN. 8
2.1.3 MATERIALIEN.8
2.1.4 CHEMIKALIEN.9
2.1.4.1 DETERGENZIEN.10
2.2 METHODEN.10
2.2.1 LIGANDENSYNTHESE.10
2.2.1.1 NAPHTHYLPHTHALAMIDSAEURE.10
2.2.1.2 AMINO-NAPHTHYLPHTHALAMIDSAEURE.11
2.2.1.3 HYDROXY-NAPHTHYLPHTHALAMIDSAEURE.11
2.2.2 UEBERPRUEFUNG DER SYNTHESEN.12
2.2.2.1 DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE.12
2.2.2.2 HPLC.12
2.2.3 ANZUCHT UND ERNTE DES PFLANZENMATERIALS.13
2.2.4 PRAEPARATION DER MIKROSOMENFFAKTION.13
2.2.5 ANREICHERUNG VON PLASMAMEMBRANVESIKELN MIT HILFE DES
ZWEI-PHASENSYSTEMS.14
2.2.6 BESTIMMUNG DER GLUCANSYNTHASE-IL-AKTIVITAET.16
2.2.7 BINDUNGSTESTS.17
2.2.7.1 ZENTRIFUGATIONSTESTS.17
2
.
2
.
7.2
GLEICHGEWICHTSDIALYSE.18
2.2.8 SOLUBILISIERUNG DER MEMBRANPROTEINE.19
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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-II-
2.2.9
2
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2.2.14.3
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2.2.14.5
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3.1.2
3.2
3.2.1
3.2.2
3.3
3.3.1
3.3.2
3.3.3
3.4
3.4.1
3.4.2
3.5
3.6
3.7
3.8
AMMONIUMSULFAT-FAELLUNG.
ANIONENAUSTAUSCHER-SAEULE.
GELFILTRATIONS-SAEULEN.
FPLC.~
AFFINITAETSMATRIZES.
AMINO-NPA-AFFINITAETSMATRIX.
HYDROXY-NPA-AFFINITAETSMATRIX.
KONTROLL-SEPHAROSEMATRIZES.
METHODEN ZUR PROTEINCHARAKTERISIERUNG.
PROTEINBESTIMMUNG.
PROBENVORBEREITUNG FUER SDS-PAGE.
SDS-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE.
SILBER-FAERBUNG.
COOMASSIE-FAERBUNG.
WESTERNBLOT.
IMMUNOFAERBUNG.
.20
.20
.20
21
.21
.22
.22
.23
.23
.23
.23
.24
.25
.26
.27
.27
ERGEBNISSE.
LIGANDENSYNTHESE.
DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE
HPLC
CHARAKTERISIERUNG DER FRAKTIONEN DES ZWEI-PHASENSYSTEMS
GLUCANSYNTHASE-IL-AKTIVITAET.
ANREICHERUNGSFAKTOR DER [3H]-NPA-BINDUNG.
CHARAKTERISIERUNG DER [3H]-NPA-BINDUNG.
PH-WERT-ABHAENGIGKEIT.
SAETTIGUNGSEXPERIMENTE.
KOMPETITIONSTESTS MIT NPA, N-NPA UND NPA-OH
SOLUBILISIERUNG.
SOLUBILISIERTE FRAKTIONEN IM BINDUNGSTEST.
SOLUBILISIERTE FRAKTIONEN AUF DER AFFINITAETSCHROMATO
GELFILTRATION.
ANIONENAUSTAUSCHER.
AMMONIUMSULFAT-FAELLUNG.
GELFILTRATION MITTELS FPLC.
.29
.29
.29
.30
.32
.32
.33
.34
.34
.35
.36
.38
.38
GRAPHIE.
43
.47
.50
.51
.53
-III-
3.9
3.9.1
3.9.2
3.10
3.11
3.11.1
3.11.2
3.12
4
5
FRAKTIONEN DER GELTILLRATION MITTELS FPLC NACH SOLUBILISIERUNG
IN BPO^I AUF DEN AFFINITAETSMAFRIZES.
AMINO-NPA-SEPHAROSE.
HYDROXY-NPA-SEPHAROSE.
ANREICHERUNG.
AUFFEINIGUNG IN IMIDAZOLPUFFER.
SAETTIGUNGSANALYSE NACH SOLUBILISIERUNG UND AMMONIUMSULFAT-
FAELLUNG.
AUFREINIGUNG AUF DER AMINO-NPA-MATRIX
UEBERPRUEFUNG MITTELS IMMUNONACHWEIS MIT FAAZT
'
DISKUSSION.
ZUSAMMENFASSUNG.
LITERATURVERZEICHNIS.
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.56
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.61
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