Molekulare Kartierung und funktionale Analysen des rassenspezifisch wirksamen Mehltauresistenzgens Mlg in Gerste (Hordeum vulgare):
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1994
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
.
1
1.1
GENETISCHE
GRUNDLAGEN
VON
PFLANZE/PATHOGEN-INTERAKTIONEN
.
1
1.2
WIRKUNG
VON
RESISTENZGENEN
.
3
1.2.1
HYPERSENSITIVE
REAKTION
UND
PHYTOALEXINE
.
3
1.2.2
ZELLWANDMODIFIKATIONEN
.
4
1.2.3
BEDEUTUNG
DES
PHENYLPROPANOID-STOFIWECHSELS
FUER
RESISTENZREAKTIONEN
.
4
1.3
DAS
PATHOSYSTEM
GERSTE/MEHHAU
.
5
1.3.1
MEHLTAU
.
5
1.3.2
MEHLTAURESISTENZ
IN
GERSTE
.
6
1.4
EXPERIMENTELLE
ANSAETZE
ZUR
ISOLIERUNG
VON
RESISTENZGENEN
.
8
1.4.1
GENISOLIERUNG
ANHAND
DES
ZUGEHOERIGEN
GENPRODUKTS
.
8
1.4.2
INSERTIONSMUTAGENESE
.
8
1.4.3
GENKARTEN-ORIENTIERTE
ISOLIERUNG
VON
RESISTENZGENEN
.
8
1.5
ZIELE
DIESER
ARBEIT
.
9
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
11
2.1
PFLANZENMATERIAL
UND
KREUZUNGEN
.
11
2.2
PILZANZUCHT
UND
INFEKTIONSTESTS
.
13
2.3
BAKTERIENSTAEMME
UND
VEKTOREN
.
13
2.4
HAEUFIG
VERWENDETE
MEDIEN
UND
PUFFER
.
14
2.5
CHEMIKALIEN
UND
ENZYME
.
14
2.6
PRAEPARATION
VON
NUKLEINSAEUREN
.
15
2.6.1
PRAEPARATION
VON
PFLANZEN-DNA
.
15
2.6.2
PRAEPARATION
VON
PLASMID-DNA
.
15
2.7
HERSTELLUNG
EINER
GENOMISCHEN
KSPL
PLASMID-BIBLIOTHEK
AUS
GERSTE
.
16
2.8
TRENNUNG
UND
FILTEIBINDUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
.
16
2.8.1
TRENNUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
IN
AGAROSEGELEN
UND
KAPILLARTRANSFER
.
16
2.8.2
TRENNUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
IN
DENATURIERENDEN
PAA-GELEN
UND
ELEKTROTRANSFER
.
17
2.9
HERSTELLUNG
RADIOAKTIV
MARKIERTER
DNA-SONDEN
.
18
2.10
SOUTHERN-HYBRIDISIERUNG
.
18
2.11
KOPPLUNGSANALYSE,
FORMELN
.
19
2.12
FIXIERUNG
UND
FAERBUNG
VON
GERSTENBLAETTEM
.
20
2.13
ANALYSE
IRREVERSIBLER
MEMBRANBESCHAEDIGUNG
.
20
2.14
TRANSKRIPTIONSINHIBITION
IN
PLANTA
.
20
3.
ERGEBNISSE
.
22
3.1
IDENTIFIZIERUNG
VON
ENG
AN
DAS
AZZG-RESISTENZGEN
GEKOPPELTEN
MOLEKULAREN
MARKERN
.
22
3.1.1
BESTIMMUNG
DER
GENETISCHEN
DISTANZEN
ZWISCHEN
DEN
RFLP-LOCI
UND
DEM
AZZG-LOCUS
.
25
3.1.2
DIAGNOSTISCHE
MARKER
FUER
DIE
ANWESENHEIT
DES
AZZG-RESISTENZALLELS.28
3.1.3
VARIIERENDE
REKOMBINATIONSFREQUENZEN
IN
DER
UMGEBUNG
DES
AZZG-LOCUS
.
31
3.1.4
DIE
LAENGE
DER
INTROGRESSIERTEN
FRAGMENTE
IN
DEN
MOLEKULAR
ANALYSIERTEN
AZZG-RUECKKREUZUNGSLINIEN.
35
3.1.5
ZUR
ABSTAMMUNG
DES
RESISTENZLOCUS
IN
DEN
VERSCHIEDENEN
AZZG-RUCKKREUZUNGSLINIEN.
38
3.2
FUNKTIONALE
ANALYSE
DES
AZZG-RESISTENZLOCUS
.
41
3.2.1
HYPERSENSITIVER
ZELLTOD
ALS
RESISTENZREAKTION
IN
PFLANZE/PATHOGENSYSTEMEN
.
41
3.2.2
VERGLEICHENDE,
MIKROSKOPISCHE
ANALYSE
VON
AZZG
UND
AZ/A/2-VERMITTELTER
RESISTENZREAKTION
.
41
3.2.3
GENDOSISANALYSE
.
47
3.2.3.1
GANZZELLAUTOFLUORESZENZ
ALS
INDIKATOR
FUER
DEN
ZELLTOD
DER
ANGEGRIFFENEN
PFLANZENZELLE
.
50
3.2.4
MIKROSKOPISCHE
ANALYSE
VON
VERMUTLICHEN
AZZG-DEFEKTMUTANTEN
.
52
3.2.5
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
REGULATION
DER
VON
AZZG
KONTROLLIERTEN
RESISTENZREAKTION
.
54
3.2.5.1
VERSUCHSANORDNUNG
ZUR
TRANSKRIPTIONSINHIBITION
INPLANTA
.
55
3.2.5.2
EINFLUSS
DES
RNA-SYNTHESEINHIBITORS
CORDYCEPIN
AUF
DIE
VON
DEN
RASSENSPEZIFISCHEN
RESISTENZGENEN
AZZG
UND
MLAL2
VERMITTELTE
RESISTENZREAKTION
.
57
3.2.5.3
ACTINOMYCIN
D
INHIBIERT
WIE
CORDYCEPIN
DIE
VON
AZZG
UND
MIA
12
KONTROLLIERTE
PFLANZLICHE
ZELLTODREAKTION
.
66
3.2.5.4
CORDYCEPIN
BLOCKIERT
DIE
DE
NOVO
TRANSKRIPTIONS-ABHAENGIGE
DEETIOLIERUNG
IN
GERSTENKEIMLINGEN
.
69
4.
DISKUSSION
.
70
4.1
RFLP-KARTIERUNG
DES
MZG-RESISTENZLOCUS
.
70
4.2
"LINKAGE
DRAG"
UM
DEN
AFZG-LOCUS
.
77
4.3
ZUM
EVOLUTIONAEREN
URSPRUNG
DER
AFZG-RESISTENZALLELE
.
79
4.4
MLG
UND
MIA
/^-VERMITTELTE
RESISTENZ
WIRKEN
ZU
UNTERSCHIEDLICHEN
STADIEN
DER
PILZENTWICKLUNG
.
82
4.4.1
EINFLUSS
VERSCHIEDENER
ZELLTYPEN
DER GERSTENHLATTEPIDERMIS
AUF
DIE
AKTIVIERUNG
DER
ZELLTODREAKTION
.
84
4.5
UEBERPRUEFUNG
DER
BEDEUTUNG
DER
ZELLTODREAKTION
ANGEGRIFFENER
ZELLEN
FUER
DIE
VON
MLG
VERMITTELTE
RESISTENZ
.
86
4.5.1
ZUR
REGULATION
DER
VON
MLG
KONTROLLIERTEN,
VERMUTLICHEN
RESISTENZREAKTIONEN
.
88
5.
ZUSAMMENFASSUNG
.
91
5.1
ANHANG
.
94
6.
LITERATURVERZEICHNIS
.
99 |
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