Charakterisierung und Untersuchung der Regulierung der S-Adenosyl-L-Methionin Decarboxylase von Trypanosoma brucei:
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| adam_text | CHARAKTERISIERUNG UND UNTERSUCHUNG DER REGULIERUNG DER
S-ADENOSYL-L-METHIONIN DECARBOXYLASE VON TRYPANOSOMA BRUCEI DISSERTATION
DER FAKULTAET FUER CHEMIE UND PHARMAZIE DER EBERHARD-KARLS-UNIVERSITAET
TUEBINGEN ZUR ERLANGUNG DES GRADES EINES DOKTORS DER NATURWISSENSCHAFTEN
1994 VORGELEGT VON PAUL MARIA SELZER INHALTSVERZEICHNIS 1. EINLEITUNG 1
1.1. DIE BEDEUTUNG DER TRYPANOSOMEN 1 1.2. DIE BIOLOGIE DER TRYPANOSOMEN
2 1.2.1. KLASSIFIZIERUNG 2 1.2.2. DER LEBENSZYKLUS VON TRYPANOSOMA
BRUCEI 3 1.2.3. MORPHOLOGIE UND BIOCHEMISCHE BESONDERHEITEN . ... 5 1.3.
DIE IN VITRO KULTIVIERUNG VON TRYPANOSOMA BRUCEI . . 11 1.4. POLYAMINE
13 1.4.1. BEDEUTUNG UND FUNKTION DER POLYAMINE 13 1.4.2. DIE SYNTHESE
DER POLYAMINE IN TRYPANOSOMA BRUCEI . 14 1.5. DIE S-ADENOSYL-L-METHIONIN
DECARBOXYLASE 16 1.6. DIE CHEMOTHERAPIE DER AFRIKANISCHEN
TRYPANOSOMIASIS 19 1.7. ZIELSETZUNG DER ARBEIT 22 2. MATERIAL UND
METHODEN 24 2.1. MATERIAL 24 2.1.1. TRYPANOSOMEN 24 2.1.2. VERSUCHSTIERE
24 2.1.3. CHEMIKALIEN 24 2.1.4. MEDIEN, PUFFER UND LOESUNGEN 27 2.1.4.1.
ANZUCHT, ISOLIERUNG UND STABILATE VON TRYPANOSOMEN 27 2.1.4.2.
KULTIVIERUNG DER TRYPANOSOMEN 27 2.1.4.3. ENZYM-ASSAYS UND
POLYAMINBESTIMMUNG 29 2.1.4.4. RNA-ISOLIERUNG 31 2.1.4.5.
METABOLITBESTIMMUNG 32 2.1.4.5.1. GLUCOSEBESTIMMUNG 32 2.1.4.5.2.
PYRUVATBESTIMMUNG 32 2.1.4.6. ELEKTRONENMIKROSKOPIE UND IMMUNFLUORESZENZ
.... 32 2.2. METHODEN 34 2.2.1. ANZUCHT UND ISOLIERUNG VON TRYPANOSOMEN
34 2.2.2. ANLEGEN VON TRYPANOSOMEN-STABILATEN 35 2.2.3. AXENISCHE
KULTIVIERUNG VON BLUTFORM- TRYPANOSOMEN 36 2.2.3.1. BERECHNUNG DER
GENERATIONSZEIT 37 2.2.3.2. HERSTELLUNG VON KONDITIONIERTEM MEDIUM
(CMEM) . 37 2.2.3.3. KONTINUIERLICHE ERNEUERUNG DES MEDIUMS WAEHREND DER
KULTUR 38 2.2.4. TRANSFORMATION UND KULTIVIERUNG PROZYKLISCHER
TRYPANOSOMEN 38 2.2.5. ADOMETDC-ASSAY 39 2.2.5.1. HERSTELLUNG DER
ZELLEXTRAKTE 39 2.2.5.2. ENZYM-ASSAY 39 2.2.6. ODC-ASSAY 40 2.2.6.1.
HERSTELLUNG DER ZELLEXTRAKTE 40 2.2.6.2. ENZYM-ASSAY 40 2.2.7.
PROTEINBESTIMMUNG 41 2.2.8. ISOLIERUNG DER ADOMETDC 41 2.2.8.1. KOPPLUNG
VON MGBG AN CH-SEPHAROSE 41 2.2.8.2. AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE 42 2.2.9.
HALBWERTSZEITBESTIMMUNG DER ADOMETDC 43 2.2.10. BESTIMMUNG DER POLYAMINE
UND IHRER AUSGANGSSUBSTANZEN 43 2.2.11. ISOLIERUNG VON GESAMT-RNA AUS
TRYPANOSOMEN ... 44 2.2.12. METABOLITBESTIMMUNG 45 2.2.12.1.
GLUCOSEBESTIMMUNG 45 2.2.12.2. PYRUVATBESTIMMUNG 46 2.2.12.3.
PROTEINPRAEZIPITATION 46 2.2A3. INKUBATION DER TRYPANOSOMEN MIT BERENIL
47 2.2.14. MESSUNG DER FLUORESZENZINTENSITAET VON BERENIL IM ZELLKERN 47
2.2.15. GIEMSA FAERBUNG 48 2.2.16. IMMUNFLUORESZENZ-MARKIERUNG 48 2.2.17.
ELEKTRONENMIKROSKOPIE 49 3. ERGEBNISSE 51 3.1. CHARAKTERISIERUNG DER
ADOMETDC 51 3.1.1. KINETISCHE MESSUNGEN DER ADOMETDC 51 3.1.2.
MGBG-SEPHAROSE-AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE 57 II 3.1.3. BESTIMMUNG DER
HALBWERTSZEIT DER ADOMETDC .... 61 3.2. REGULIERUNG DER
POLYAMINBIOSYNTHESE IN AXENISCHEN KULTUREN 63 3.2.1. DIE
ADOMETDC-AKTIVITAET ALS MARKER DER DIFFERENZIERUNG 63 3.2.2. BESTIMMUNG
DER ODC-AKTIVITAET 68 3.2.3. BESTIMMUNG DER AUSGANGSSUBSTANZEN DER
POLYAMINBIOSYNTHESE 71 3.3. DIE WIRKUNG DES TRYPANOZIDEN MEDIKAMENTS
BERENIL 73 3.3.1. DER EFFEKT DER MEDIKAMENTE SINEFUNGIN UND BERENIL 73
3.3.2. DER EFFEKT VON P-GLYKOPROTEIN-MODULATOREN AUF DIE AUFNAHME VON
BERENIL 81 4. DISKUSSION 89 4.1. DIE TRYPANOSOMALE ADOMETDC 89 4.2. -
DIE POLYAMINBIOSYNTHESE UND DIE DIFFERENZIERUNG VON TRYPANOSOMEN 93 4.3.
DIE TRYPANOZIDE WIRKUNG VON BERENIL 97 4.4. AUSBLICK 101 5.
ZUSAMMENFASSUNG 103 6. LITERATURVERZEICHNIS 106 III
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