Molekulare Analyse von Bx42, einem Chromatinproteingen und genetische Charakterisierung der Bx42-Region auf dem X-Chromosom von Drosophila melanogaster:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1994
|
| Schlagworte: | |
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| Beschreibung: | Köln, Univ., Diss., 1994 |
| Beschreibung: | 173 S. Ill., graph. Darst. |
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1.
EINLEITUNG
.
1
1.1. DIE
POLYTAENEN
SPEICHELDRUESENCHROMOSOMEN:
ECDYSON,
PUFFAKTIVITAET
UND
GENREGULATION
.
1
1.2.
DIE
ART
DER
BINDUNGSSTELLEN
EINES
PROTEINS
AN
POLYTAENEN
CHROMOSOMEN
GIBT
HINWEISE
AUF
SEINE
FUNKTION
BEI
DER
GENREGULATION
.
3
1.3.
DIE
IDENTIFIZIERUNG
PUFFSPEZIFISCHER
PROTEINE
MIT
ANTI
KOERPERN
GEGEN
CHROMATINPROTEINFRAKTIONEN
.
4
1.4.
DER
MONOKLONALE
ANTIKOERPER
BX42
DETEKTIERT
IM
IMMUNBLOT
EIN
66
KD
GROSSES
PROTEIN
.
5
1.5.
AB
KERNTEILUNGSZYKLUS
13
WIRD
DAS
BX42-ANTIGEN
IN
ALLEN
ZELLKERNEN
NACHGEWIESEN
.
5
1.6.
DIE
BINDUNGSSTELLEN
DES
BX42-ANTIGENS
AN
POLYTAENEN
CHROMOSOMEN
.
6
1.6.1.
DIE
BX42-BINDUNG
AM
SGJ-4-LOKUS
KORRELIERT
MIT
DESSEN
PUFFAKTIVITAET
.
6
1.6.2.
BX42
KANN
NUR
IN
GEGENWART
EINES
52BP
GROSSEN
FRAGMENTES
AM
SGJ-4-LOKUS
NACHGEWIESEN
WERDEN
.
7
1.7.
DIE
KLONIERUNG
VON
BX42
.
8
1.8.
THEMENSTELLUNG
.
10
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
1
1
2.1.
CHEMIKALIEN
.
11
2.2.
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
.
12
2.2.1.
BAKTERIENSTAEMME
.
12
2.2.2.
VEKTOREN
.
12
2.2.3.
GENBANKEN
.
12
2.2.4.
ARBEITEN
MIT
NUKLEINSAEUREN
.
12
2.2.4.1.
PRAEPARATION
VON
PLASMID-DNA
.
12
2.2.4.2.
PRAEPARATION
VON
PHAGEN-DNA
.
1
4
2.2.4.3.
PRAEPARATION
VON
GENOMISCHER
DNA
AUS
FLIEGEN
.
16
2.2.4.4.
HERSTELLUNG
UND
REINIGUNG
SYNTHETISCHER
OLIGONUKLEOTIDE
.
1
8
2.2.4.5.
ARBEITEN
MIT
RNA
.
20
2.2.4.6.
AUFTRENNUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
IN
AGAROSEGELEN
.
2
1
2.2.4.7.
ANALYSE
DER
MRNA:
IDENTIFIZIERUNG
DER
TRANSKRIPTIONSINITIATIONSSTELLEN
DES
BX42-GENS
MITTELS
SL
UND
"PRIMER
EXTENSION"-ANALYSE
.
25
2.2.4.7.1.
NUKLEASE-SL-SCHUTZEXPERIMENTE
MIT
EINER
EINZELSTRAENGIGEN
DNA-PROBE
(MODIFIZIERT
NACH
BERK
AND
SHARP,
1977,
MANIATIS,
1982)
.
2
5
2.2.4.7.2.
IDENTIFIZIERUNG
DES
TRANSKRIPTIONSINITIATIONSSTARTES
MITTELS
"PRIMER
EXTENSION"
(MODIFIZIERT
NACH
MANIATIS,
1982)
.
31
2.2.4.8.
SUBKLONIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
.
3
3
2.2.4.9.
SEQUENZIERUNG
.
3
5
2.2.4.10.
DELETIONSKLONIERUNG
.
3
7
2.2.4.11.
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN.
40
2.2.4.12.
DIGOXIGENIN-MARKIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
.
41
2.2.4.13.
FILTER
TRANSFER
VON
DNA
UND
RNA
.
4
1
2.2.4.14.
"CHURCH"-HYBRIDISIERUNG
VON
RADIOAKTIV
MARKIERTER
DNA
AN
FILTERGEBUNDENE
DNA
UND
RNA
(CHURCH,
1984)
.
4
2
2.2.4.15.
DEHYBRIDISIERUNG
VON
NYTROZELLULOSEFILTERN
.
4
3
2.2.4.16.
SICHTEN
DER
X.
EMBL4
GENBANK
.
4
4
2.2.5.
HISTOLOGISCHE
UND
IMMUNOLOGISCHE
TECHNIKEN
.
44
2.2.5.1.
IN
SITU
-HVBRIDISIERUNG
VON
BIOTIN
16
DUTP
MARKIERTER
YY
DNA
AN
POLYTAENEN
CHROMOSOMEN
(MODIFIZIERT
NACH
LANGER
UND
SAFER,
1982)
.
44
2.2.5.2.
IN
SITU
-RNA-HVBRIDISIERUNG
AN
EMBRYONEN.
4
6
2.2.5.3.
ANTIKOERPERFAERBUNG
AN
POLYTAENEN
CHROMOSOMEN
MITTELS
INDIREKTER
IMMUNFLUORESZENZ
.
4
7
2.2.5.4.
ANFAERBUNG
POLYTAENER
CHROMOSOMEN
.
4
8
2.2.5.5.
ANTIKOERPERFAERBUNG
AN
KC-ZELLEN
.
4
8
2.2.5.6.
CYTOLOGISCHE
KARTIERUNG
CHROMOSOMALER
REARRANGEMENTS
.
4
9
2.2.5.7.
PHYSIKALISCHE
KARTIERUNG
CHROMOSOMALER
REARRANGEMENTS
.
5
0
2.2.6.
GENETISCHE
ARBEITEN
.
5
3
2.2.6.1.
FLIEGENSTAEMME
.
5
3
2.2.6.2.
AUFZUCHT
DER
FLIEGEN
(GENAUERE
ANGABEN
UNTER
ROBERTS
1986
UND
ASHBURNER
1989)
.
5
3
2.2.6.3.
EIABLAGEN
SOWIE
DECHORIONISIERUNG
UND
FIXIERUNG
DER
EMBRYONEN
.
5
3
2.2.6.4.
MUTAGENESEN
DES
1.
CHROMOSOMS
.
5
6
2.2.6.4.I.
"SCREEN
A":
ROENTGENINDUZIERTER
VERLUST
EINES
P
ELEMENTES
.
5
6
2.2.6.4.2.
"SCREEN
B":
ROENTGENINDUZIERTER
"LETALSCREEN"UEBER
EIN
LEBENSFAEHIGES
RAN-ALLEL
.
60
2.2.4.6.3.
"SCREEN"
C:
ROENTGENINDUZIERTER
"LETALSCREEN"UEBER
DIE
DUPLIKATION
DP(1.4)MBN+
.
64
3.
ERGEBNISSE
TEIL
1
.
6
7
3.1.
DIE
VERTEILUNG
DES
BX42-PROTEINS
.
6
7
3.1.1.
DIE
VERTEILUNG
DES
BX42-PROTEINS
IN
KC-ZELLEN.
6
7
3.1.2.
DIE
VERTEILUNG
DES
BX42-PROTEINS
AN
POLYTAENEN
CHROMOSOMEN
.
6
9
3.2.
DIE
ZEITLICHE
UND
RAEUMLICHE
VERTEILUNG
DER
BX42
TRANSKRIPTE
UND
DIE
LOKALISATION
ANGRENZENDER
TRANSKRIPTE
IN
DER
BX42-REGION
.
71
3.2.1.
DAS
ENTWICKLUNGSPROFIL
DER
BX42-TRANSKRIPTE
.
71
3.2.2.
AUSDEHNUNG
DER
BX42-TRANSKRIPTIONSEINHEIT
UND
IDENTIFIZIERUNG
DER
3'
UND
5'
VON
BX42
GELEGENEN
TRANSKRIPTIONSEINHEITEN
.
7
4
3.2.3.
DIE
RAEUMLICHE
VERTEILUNG
DER
BX42-TRANSKRIPTE
.
7
6
3.3.
DIE
MOLEKULARE
ANALYSE
DES
BX42-LOKUS
.
7
8
3.3.1.
DER
GENOMISCHE
"WALK"
IN
DER
REGION
8C7-8
.
7
8
3.3.2.
DIE GENOMISCHE
STRUKTUR
DES
BX42-GENS
.
.8
0
3.3.3.
DIE
SEQUENZIERUNG
DES
BX42-GENS
.
8
1
3.3.4.
DIE
ANALYSE
DER
SEQUENZ
.
81
3.3.5.
EXON/INTRON-ANALYSE
.
8
6
3.3.6.
BESTIMMUNG
DES
TRANSKRIPTIONSTARTES
DER
BX42
TRANSKRIPTIONSEINHEIT
MITTELS
SL
UND
"PRIMER
EXTENSION"-ANALYSE
.
8
8
3.6.6.1.
TRANSKRIPTIONSSTARTBESTIMMUNG
MITTELS
SL-ANALYSE
.
8
8
3.3.6.2.
BESTAETIGUNG
DES
TRANSKRIPTIONSSTARTPUNKTES
SL
MITTELS
"PRIMER
EXTENSION"-ANALYSE
.
90
3.4.
DAS
PUTATIVE
BX42-PROTEIN
.
9
2
3.4.1.
DIE
KERNLOKALISIERUNG
DES
PUTATIVEN
BX42
PROTEINS
.
94
3.4.2.
DAS
PUTATIVE
BX42-PROTEIN
BESITZT
EINE
SIGNIFIKANTE
HOMOLOGIE
ZU
FUN20
AUS
SACCHAROMYCES
CEREVISIAE
(HEFE)
.
9
5
4.
ERGEBNISSE
TEIL
2
.
9
7
4.1.
DIE
BX42-TRANSKRIPTIONSEINHEIT
KARTIERT
PROXIMAL
DER
DEFIZIENZ
DF(L)KA14
.
9
8
4.2.
ERZEUGUNG
VON
BX42-DEFIZIENZEN
UND
DUPLIKATIONEN
UEBER
ROENTGENINDUZIERTEN
P-ELEMENT-VERLUST
.
9
8
4.2.1.
CYTOLOGISCHE
UND
MOLEKULARE
ANALYSE
DER
P(RY
+
)
INSERTIONSLINIE
A27.1.F1
.
99
4.2.2.
DIE
MUTAGENESE:
"SCREEN
A"
.
101
4.2.3.
ANALYSE
DER
MOEGLICHEN
EXCISIONSEREIGNISSE:
DIE
DEFIZIENZ
DF(L)18.1.15
.
101
4.2.4.
ANALYSE
DER
PUTATIVEN
TRANSPOSITIONSEREIGNISSE
.
105
4.3.
DAS
TAN-ALLEL
(T)
.
106
4.3.1.
VERSUCH
DER
ISOLIERUNG
VON
BX42
AUSFALLMUTATIONEN
UEBER
TANT
"SCREEN
B"
.
107
4.3.2.
CYTOLOGISCHE
UND
MOLEKULARE
ANALYSE
DER
DEFIZIENZ
DF(L)9A4-5
.
107
4.4.
DIE
DUPLIKATION
DP(1.4)MBN
+
.
112
4.4.1.
EIN
PHOTOTAXISTEST
BESTAETIGT,
DASS
DIE
DP(1.4)MBN
+
HOMOZYGOT
NICHT
LEBENSFAEHIG
IST
.
114
4.4.2.
"SCREEN
C":
RETTUNG
LETALER
X-CHROMOSOMALER
LINIEN
MIT
DER
DP(1.4)MBN
+
.
114
4.4.3.
CYTOLOGISCHE
UND
MOLEKULARE
ANALYSE
DER
MIT
DER
DP(L,4)MBN
+
GERETTETEN
LETALEN
X-CHROMOSOMALEN
LINIEN
.
115
4.4.4.
CHARAKTERISIERUNG
DER
TRANSLOKATION
T(1.2R)29A-7
.
116
4.5.
GENETISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DER
MIT
DER
DP(L,4)MBN
+
GERETTETEN
LETALEN
X-CHROMOSOMALEN
LINIEN
.
121
5.
DISKUSSION
ZU
TEIL
1
.
13
1
5.1.
DAS
BX42-ANTIGEN
BINDET
AN
POLYTAENEN
CHROMOSOMEN
AN
100-120
PUFFS
.
1
31
5.2.
DIE
BEIDEN
BX42-TRANSKRIPTE
WERDEN
DIFFERENTIELL
EXPRIMIERT
.
133
5.2.1.
DAS
3
'-ENDE
DES
BX42-GENS:
DIE
DIFFERENTIELLE
POLYADENYLIERUNG
DER
BX42-TRANSKRIPTE
.
133
5.2.2.
DIE
TRANSKRIPTIONSSTARTBESTIMMUNG
ERGAB
DIE
BENUTZUNG
VON
UNTERSCHIEDLICHEN
STARTSTELLEN
.
134
5.2.3.
EINE
ANALYSE
DES
PUTATIVEN
PROMOTORBEREICHES
DER
BX42-TRANSKRIPTIONSEINHEIT
UNTERSTUETZT
DIE
BENUTZUNG
DES
TRANSKRIPTIONSSTARTPUNKTES
S3
.
135
5.2.4.
AUCH
DIE
BENUTZUNG
DES
TRANSKRIPTIONSSTART
PUNKTES
S2
KANN
ALS
SICHER
ANGESEHEN
WERDEN
.
135
5.2.5.
DIE
"PRIMER
EXTENSION
"
-ANALYSE
BESTAETIGT
DIE
BENUTZUNG
DES
TRANSKRIPTIONSSTARTPUNKTES
S1
.
136
5.3.
IST
DAS
BX42-PROTEIN
EIN
ESSENTIELLES
CHROMATINPROTEIN?
.
137
5.3.1.
DIE
STRUKTUR
DES
BX42-PROTEINS
.
137
5.3.2.
DOMAENEN
DES
BX42-PROTEINS
SIND
KONSERVIERT
.
139
6.
DISKUSSION
ZU
TEIL
2
.
141
6.1.
"SCREEN
A":
ISOLIERUNG
DER
DF(L)18.1.15
UND
EFFIZIENZ
DER
MUTAGENESE
.
141
6.1.1.
DER
BALANCER
IN(L)DL49FA
N
VERURSACHT
"NON
DISJUNCTION"
.
142
6.1.2.
PRAEMEIOTISCHE
CLUSTER
WURDEN
DURCH
DIE
BESTRAHLUNG
VON
2-4
TAGE
ALTEN
MAENNCHEN
WEITGEHEND
VERMIEDEN
.
143
6.1.3.
DIE
PUTATIVEN
TRANSPOSITIONSEREIGNISSE
.
143
6.2.
"SCREEN
B":
DIE
DF(L)9A4-5
IST
ALLEL
ZU
TAN
.
1
44
6.2.1.
POSITIVE
GEOTAXIS
.
145
6.2.2.
LICHTSTREUUNG
.
145
6.2.3.
PAARUNGSVERHALTEN
UND
"MARKIERUNG"
.
145
6.3.
DER
DP(1.4)MBN+-"
SCREEN"
.
146
6.3.1.
IN
DER
DP(1.4)MBN
+
IST
DAS
X-CHROMOSOMALE
INTERVALL
8C7,8-8E1,2
KOMPLETT
AN
DIE
BASIS
DES
4.
CHROMOSOMS
TRANSLOZIERT
.
147
6.3.2.
HEMIZYGOT
LETALE
LINIEN,
DIE
UEBER
DIE
DP(1.4)MBN
+
LEBENSFAEHIG
SIND,
KOENNEN
TREFFER
BESITZEN,
DIE
DIE
BX42-TRANSKRIPTIONSEINHEIT
UMFASSEN
.
147
6.3.3.
DIE
ISOLIERUNG
DER
TRANSLOKATION
T(1,2R)29A-7
.
149
6.3.4.
CHARAKTERISIERUNG
DER
X-CHROMOSOMALEN
REGION
8C7,8-8E1,2
DURCH
KOMPLEMENTATION
.
150
6.4.
AUSSICHTEN
.
151
7.
ZUSAMMENFASSUNG
ZU
TEIL
1
.
153
8.
ZUSAMMENFASSUNG
ZU
TEIL
2
.
155
LITERATUR
.
1
5
7 |
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| author_facet | Wieland, Claudia |
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