"Protein-Design" am humanen Bikunin:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1994
|
| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | III, 194 S. Ill., graph. Darst. |
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
:
SEITE
:
1.
ERKLAERUNG
DER
ABKUERZUNGEN
1-6
2.
EINLEITUNG
2.1
PROTEINASE
-
INHIBITOREN
7
2.2
KUNITZ-TYP
-
PROTEINASE
-
INHIBITOREN
8
2.3
INTER-A-TRYPSIN
-
INHIBITOR
9-12
2.4
BIKUNIN,
DIE
LEICHTE
KETTE
DER
LALNHIBITOR
-
PROTEINE
13
-
IS
2.5
GENTECHNISCHE
DARSTELLUNG
VON
REKOMBINANTEM
BIKUNIN
16-17
3.
ZIELSETZUNG
18
-19
4.
ZUSAMMENFASSUNG
20
-
23
5.
GERAETE
UND
MATERIALIEN
24
-
44
5.1
GERAETE
24
-
26
5.2
MATERIALIEN
27
-
30
5.3
BAKTERIENSTAEMME
31
-
33
5.4
VEKTOREN
34
-
44
6.
METHODEN
45
-101
6.1
ANLEGEN
VON
BAKTERIENKULTUREN
45
6.2
ISOLIERUNG
VON
PLASMID-DNA
AUS
E.COLI
46
-
52
6.2.1
PRAEPARATIVE
PLASMIDISOLIERUNG
46
-
48
6.2.2
ISOLIERUNG
VON
PLASMID-DNA
NACH
DER
"ALKALLNE
LYSIS
METHOD"
49
6.2.3
REINIGUNG
VON
PLASMID-DNA
DURCH
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
50
6.2.4
DENATURIERUNG
VON
PLASMID-DNA
FUER
DIE
EINZELSTRANGSEQUENZIERUNG
51
6.2.5
SCHNELLISOLIERUNG
VON
PLASMID-DNA
NACH
DER
*CTAB-LYSE
'
51
-
52
6.3
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
DNA
52
6.4
FAELLUNG
VON
DNA
53
6.5
PHENOLEXTRAKTION
VON
DNA
53
6.6
DNA-GELELEKTROPHORESE
IN
AGAROSE-GELEN
54
-
55
6.7
ISOLIERUNG
VON
DNA
AUS
AGAROSE-GELEN
55
-
57
6.7.1
ELEKTROELUTION
VON
DNA
AUS
TBE-OELEN
55
6.7.2
ISOLIERUNG
VON
DNA
AUS
AGAROSE-OELEN
NACH
DER
'
OENE-CLEAN*
56
-
57
METHODE
INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
:
6.8
ENZYMATISCHE
MODIFIZIERUNG
VON
VEKTOR-DNA
57
-
63
6.8.1
HYDROLYSE
VON
DNA
DURCH
RESTRLKTIONSENDONUKLEASEN
57
-
59
6.8.2
5
'
-DEPHOSPHORYLIERUNG
VON
DNA
59
6.8.3
NUKLEASE
S-L
BEHANDLUNG
ZUM
POLIEREN
VON
DNA-ENDEN
60
6.8.4
KLENOW-BEHANDLUNG
ZUM
POLIEREN
-
BZW.
AUFFUELLEN
VON
DNA-ENDEN
61
6.8.5
PROTEINABBAU
DURCH
BEHANDLUNG
MIT
PROTEINASE
K
61
6.8.6
LIGATION
VON
DNA-FRAGMENTEN
62
6.9
SYNTHESE
UND
REINIGUNG
DER
OLIGONUKLEOTIDE
63
-
68
6.9.1
SYNTHESE
NACH
DER
PHOSPHOR-AMIDLT-METHODE
63
-
67
6.9.2
ABSPALTUNG
DER
SCHUTZGRUPPEN
UND
REINIGUNG
DER
OLIGONUKLEOTIDE
67-68
6.10
5'-PHOSPHORYLIERUNG
UND
HYBRIDISIERUNG
VON
OLIGONUKLEOTIDEN
69
-
71
6.10.1
5
'
-PHOSPHORYLIERUNG
VON
OLIGONUKLEOTID-SSDNA
69
6.10.2
HYBRIDISIERUNG
VON
5
'
-PHOSPHORYLIERTEN
OLIGONUKLEOTIDEN
69
-
71
6.11
HERSTELLUNG
VON
TRANSFORMATIONSKOMPETENTEN
E.COLI-ZELLEN
71
6.12
TRANSFORMATION
VON
E.COLI
MIT
PLASMID-DNA
71
-
72
6.13
SEQUENZIERUNG
VON
REKOMBINANTER
PLASMID-DNA
72
-
78
6.13.1
DNA-SEQUENZANALYSE
NACH
SANGER
MIT
[ X
32
P]-ATP
72
-
76
6.13.1.1
PRAEPARATION
DES
SEQUENZIERGELES
73
6.13.1.2
DURCHFUEHRUNG
DER
SEQUENZIERREAKTION
74
-
75
6.13.1.3
ELEKTROPHORESE
UND
AUTORADIOGRAPHIE
75
-
76
6.13.2
NICHT
RADIOAKTIVE
DNA-SEQUENZIERUNG
NACH
SANGER
76
-
78
6.13.2.1
"CYCLE-SEQUENCING"
76
-
77
6.13.2.2
OELLAUF
MIT
HILFE
DES
'DIREKT-BLOTTING-ELEKTROPHORESE-SYSTEMS'
78
6.14
IN
VITRO
MUTAGENESEVERFAHREN
79
-
81
6.14.1
KASSETTEN-MUTAGENESE
79
6.14.2
"MASEPOHL'-MUTAGENESE
79
-
80
6.14.3
PCR-MUTAGENESE
80
-
81
6.15
EXPRESSION
UND
ISOLIERUNG
VON
REKOMBINANTEM
BIKUNIN
82
-
83
6.15.1
INDUKTION
UND
EXPRESSION
DER
BIKUNIN-FUSIONSPROTEINE
IN
E.COLI
82
COSC
6769
6.15.2
INDUKTION
UND
EXPRESSION
VON
BIKUNIN
IN
E.COLL
BL
21-[DE-3]
UND
83
E.COLI
HMS
174-[DE-3]
6.15.3
KOMPARTIMENTIERUNGSTEST
FUER
E.COLI
HMS
174-[DE-3]
83
6.16
ZELLAUFSCHLUQ
84
6.17
ISOLIERUNG
(LES
REKOMBINANTEN
BIKUNINS
AUS
"INCLUSION-BODIES"
84
-
86
6.17.1
ISOLIERUNG
DER
'INCLUSION-BODY'-FRAKTION
NACH
EXPRESSION
IN
COSC
6769
84
-
85
6.17.2
ISOLIERUNG
DER
*INCLUSION-BODY*-FRAKTLON
NACH
EXPRESSION
IN
BL
-
85-86
21-[DE-3]
INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
:
6.18
AMEISENSAEURE-SPALTUNG
DER
FUSIONSPROTEINE
86
6.19
RENATURIERUNG
DER
REKOMBINANTEN
BIKUNIN-VARIANTEN
87
-
91
6.19.1
MATRIXUNTERSTUETZTE
RENATURIERUNG
VON
REKOTNBINANTETN
BIKUNIN
87
-
90
6.19.1.1
BRCN-AKTIVIERUNG
VON
SEPHAROSE
UND
KOPPLUNG
VON
PROTEINEN
88
-
89
6.19.1.2
DARSTELLUNG
VON
ANHYDROCHYMOTRYPSIN
BZW.
ANHYDROTRYPSIN
89
-
90
6.19.2
RENATURIERUNG
VON
REKOMBINANTEM
BIKUNIN
NACH
CREIGHTON
90
-
91
6.20
AUFKONZENTRIEREN
VON
PROTEINLOESUNGEN
91
6.21
ENTSALZUNG
VON
PROTEIN-LOESUNGEN
91
-
92
6.22
REINIGUNG
DER
RENATURIERTEN
BIKUNIN
-
VARIANTEN
92
-
94
6.22.1
REINIGUNG
DURCH
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
AM
"TARGET'-ENZYM
92
6.22.2
REINIGUNG
VON
RENATURIERTEN
BIKUNIN
-
VARIANTEN
DURCH
FPLC
93
6.22.3
REINIGUNG
RENATURIERTEN
BIKUNINS
DURCH
OELFILTRATION
94
6.23
CHARAKTERISIERUNG
DER
BIKUNIN
-
VARIANTEN
MITTELS
HPLC
94
6.24
PAA-GELELEKTROPHORESE
MIT
DNA
UND
PROTEINEN
95
-
96
6.24.1
PROBENVORBEREITUNG
95
6.24.2
GIESSEN
DER
PAA-GELE
UND
ELEKTROPHORESE
95
6.24.3
FAERBEN
DER
GELE
96
6.24.3.1
"COOMASSIE-BLUE-FAERBUNG"
96
6.24.3.2
SILBERFAERBUNG
96
6.25
DETEKTION
REKOMBINANTER
PROTEINE
IN
PAA-GELEN
DURCH
97
"WESTERNBLOTTING
"
6.25.1
IMMUNOLOGISCHER
NACHWEIS
VON
PROTEINEN
NACH
"WESTERNBLOTTING*
98
6.26
DURCHFUEHRUNG
DER
ENZYMTESTS
99
-
101
6.26.1
CATHEPSIN
G-HEMMTEST
99
6.26.2
CHYMOTRYPSIN-HEMMTEST
100
6.26.3
ELASTASE-HEMMTEST
100
6.26.4
KALLIKREIN-HEMMTEST
101
6.26.5
TRYPSIN-HEMMTEST
101
7.
ERGEBNISSE
102
-171
7.1
AMPLIFIZIERUNG
UND
ISOLIERUNG
DER
BIKUNIN-CDNA
102
-
104
7.2
VERIFIZIERUNG
DER
BIKUNIN-CDNA
104
-
107
7.3
NOMENKLATUR
DER
KLONIERTEN
BIKUNIN
-
VARIANTEN
107
-
108
7.4
SUBKLONIERUNG
DER
PEX-BAMHI/HIND
III-FRAGMENTE
IN
PNH04.1.1
109
-
111
7.5
NEUKLONIERUNG
UND
MUTAGENESE
DES
5
'
-BEREICHES
DER
BIKUNIN-CDNA
112
-
115
7.6
NEUKLONIERUNG
UND
MUTAGENESE
DES
FUER
DIE
C-TERMINALE
INHIBITOR
116
-
125
DOMAENE
KODIERENDEN
BEREICHES
DER
BIKUNIN-CDNA
INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
:
7.7
REKOMBINATION
DER
NEUKLONIERTEN
5'-REGION
DER
BIKUNIN-CDNA
125
-
128
MIT
DEM
APA
I/HIND
III
-
FRAGMENT
DER
3
'
-REGION
7.8
MUTAGENESE
DER
BIKUNIN-CDNA
MIT
HILFE
DER
PCR
129
-
135
7.9
SUBKLONIERUNG
DER
REKOMBINANTEN
BIKUNIN-CDNA-SEQUENZEN
IN
136
-
137
DIE
EXPRESSIONSVEKTOREN
DER
PET
-
SERIE
7.10
CASSETTENMUTAGENESE
DER
VOLLREKOMBINANTEN
BIKUNIN-CDNA
IN
137
-
139
PET
LLB,A*
7.11
EXPRESSION
DER
REKOMBINANTEN
BIKUNIN
-
VARIANTEN
140
-
151
7.11.1
EXPRESSION
UND
ISOLIERUNG
VON
REKOMBINANTEN
BIKUNIN
ALS
FUSIONS
140
-
141
PROTEIN
7.11.2
DETEKTION
UND
ISOLIERUNG
VON
REKOMBINANTEM
BIKUNIN
NACH
EXPRESSION
142
-
145
IN
E.COLL
BL21-[DE-3]
UNTER
VERWENDUNG
VON
PET
11B
UND
PET
11B,A"
7.11.3
EXPRESSION
UND
DETEKTION
VON
REKOMBINANTEM
BIKUNIN
IN
E.COLI
HMS
146
-
147
174-PE-3]
UNTER
VERWENDUNG
DES
SEKRETORISCHEN
VEKTORS
PET
12B
7.11.4
VERGLEICH
DER
EXPRESSIONSRATEN
DER
EINGESETZTEN
VEKTORSYSTEME
148
-
151
7.12
RENATURIERUNG
DER
REKOMBINANTEN
BIKUNIN
-
VARIANTEN
152
-
156
7.12.1
RENATURIERUNG
VON
REKOMBINANTEM
BIKUNIN
NACH
CREIGHTON
154
7.12.2
MATRIXUNTERSTUETZTE
RENATURIERUNG
VON
REKOMBINANTEM
BIKUNIN
155
-
156
7.13
REINIGUNG
DER
RENATURIERTEN
BIKUNIN
-
VARIANTEN
156
-
158
7.13.1
REINIGUNG
DER
RENATURIERTEN
BIKUNIN
-
VARIANTEN
DURCH
FPLC
156
-
157
7.13.2
REINIGUNG
DER
RENATURIERTEN
BIKUNIN
-
VARIANTEN
DURCH
AFFINITAETS
157
-
158
CHROMATOGRAPHIE
AN
CHYMOTRYPSIN
-
UND
ANHYDROCHYMOTRYPSIN
-
SEPHAROSE
7.14
CHARAKTERISIERUNG
DER
RENATURIERTEN
BIKUNIN
-
VARIANTEN
158
-
159
7.15
BESTIMMUNG
DER
INHIBITORISCHEN
AKTIVITAET
DER
REKOMBINANTEN
159
-
162
BIKUNIN
-
VARIANTEN
GEGENUEBER
SERINPROTEINASEN
7.16
INHIBIERUNG
VON
HUMANEN
MASTZELL-PROTEASEN
MIT
REKOMBINANTEM
163
-
166
BIKUNIN
7.17
BEEINFLUSSUNG
DER
HIV
-
REPLIKATION
DURCH
REKOMBINANTE
BIKUNIN
-
167
-
171
VARIANTEN
8.
DISKUSSION
UND
AUSBLICK
9.
LITERATURVERZEICHINS
172
-
184
185
-
194 |
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