Untersuchungen zur Induktion des Sekundärstoffwechsels von Streptomyces tendae Tü 901:
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1994
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
.
1
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
6
2.1.
CHEMIKALIEN
.
6
2.2.
NAEHRMEDIEN
.
7
2.3.
MIKROORGANISMEN
.
10
2.4.
KULTURBEDINGUNGEN
.
10
2.4.1
STAMMHALTUNG
UND
KONSERVIERUNG
.
10
2.4.1.1.
STAMMHALTUNG
VON
STREPTOMYCETEN
.
10
2.4.1.2.
HERSTELLUNG
VON
TESTPLATTEN
.
10
2.4.1.3.
HERSTELLUNG
EINER
SPORENSUSPENSION
.
11
2.41.4.
STAMMKONSERVIERUNG
.
11
2
4.2
SCHUETTELKULTUREN
.
11
2.4.3.
TITERBESTIMMUNGEN
.
12
2.4.4.
EINSTELLEN
DES
TITERS
BEI
YARROWIA
LIPOLYTICA
.
12
2.5.
TROCKENGEWICHTSBESTIMMUNGEN
.
12
2.6.
PROTEINBESTIMMUNG
.
13
2.7.
FERMENTATION
.
13
2
7.1.
BATCH-F
ERMENTATION
.
14
27.1.1.
FERMENTATION
IM
25
1
MASSSTAB
.
.
.
.14
INHALTSVERZEICHNIS
2.7
1.2.
FERMENTATION
IM
10
1
MASSSTAB
.
15
2
7.1.3.
FERMENTATION
IM
2
1
MASSSTAB
.
15
2.7.2.
KONTINUIERLICHE
FERMENTATION
.
15
2.8
BESTIMMUNG
DER
AMMONIUM-KONZENTRATION
.
17
2.9.
EXTRAKTION
INTRAZELLULAERER
METABOLITE
.
17
2
10.
TRANSFER
IN
N-MANGELMEDIUM
(NACH
OCHI,
1987A)
.
17
2.11.
BESTIMMUNG
DER
MRNA-SYNTHESERATE
.
18
2.12.
ISOLIERUNG
VON
MUTANTEN
VON
STREPTOMYCES
TENDAE
TU
901/8C
DURCH
SPONTANE
MUTAGENESE
.
18
2.12.1.
ISOLIERUNG
VON
MUTANTEN
AUS
KONTINUIERLICHEN
KULTUREN
.
18
2.12
2
INDUZIERBARKEIT
DER
SPORULATION
.
19
2.123
ISOLIERUNG
VON
RELAXED
(REL)
MUTANTEN
.
19
2.13.
ENZYMATISCHE
UNTERSUCHUNGEN
.
19
2.13.1
HERSTELLUNG
DER
ROHEXTRAKTE
.
19
2.13.2.
BESTIMMUNG
DER
FRUCTOSE-1,6-BISPHOSPHAT-ALDOLASE
(E.C
4.1
2
13)
.
20
2
13.3.
BESTIMMUNG
DER
6-PHOSPHOGLUCONAT-DEHYDROGENASE
(E.C.
1
1
1.44)
.
21
2
13.4.
BESTIMMUNG
DER
HEXOKINASE
(E.C.
2.7.1.1)
.
21
2
14.
ENZYMATISCHE
SYNTHESE
VON
GUANOSIN-5'-DIPHOSPHAT-3'
DIPHOSPHAT
(PPGPP)
.
22
2
14.1
ANREICHERUNG
EINER
PPGPP-SYNTHETASE
AUS
STREPTOMYCES
TENDAE
TU
901/8C
.
22
2.14.2.
ABTRENNUNG
DER
RIBOSOMEN
.
22
2
14
3.
ASSAY
EINER
PPGPP-SYNTHETASE
AUS
STREPTOMYCES
TENDAE
TUE901/8C
.
23
INHALTSVERZEICHNIS
2.14.4.
AMMONIUMSULFAT-FAELLUNG
.
24
2.14.5.
PRAEPARATIVE
PPGPP-SYNTHESE
(VERAENDERT
NACH
CASHEL,
1974)
.
24
2.15
LONENAUSTAUSCH-CHROMATOGRAPHIE
.
24
2.16.
AUSSCHLUSS-CHROMATOGRAPHIE
.
25
2.17.
HPLC-ANALYTIK
.
25
2.17.1.
ANALYTIK
VON
MONOSACCHARIDEN
UND
ZUCKERALKOHOLEN
.
25
2
17
2.
ANALYTIK
VON
AMINOSAEUREN
26
2
17
3.
ANALYTIK
VON
NIKKOMYCINEN
MIT
LONENPAAR-REVERSED
PHASE-HPLC
.
27
2.17.4.
ANALYTIK
VON
NUKLEOTIDEN
.
27
2.17.5.
ANALYTIK
VON
NUKLEOTIDEN
MIT
ANIONENAUSTAUSCH-HPLC
.
28
2.17.6
ANIONENAUSTAUSCH-HPLC
MIT
AMINO-MODIFIZIERTEN
KIESELGELPHASEN
.
28
3.
ERGEBNISSE
.
30
3.1.
INDUKTION
DES
SEKUNDAERSTOFFWECHSELS
VON
STREPTOMYCES
TENDAE
TUE
901/8C
IN
BATCH-FERMENTATION
.
30
3.1.1
WACHSTUMS
UND
PRODUKTIONSVERLAUF
.
30
3.1.2
BESTIMMUNG
DER
EXTRAZELLULAEREN
AMINOSAEUREN
.
31
3
13.
BESTIMMUNG
DER
INTRAZELLULAEREN
AMINOSAEUREN
WAEHREND
DER
NIKKOMYCIN-PRODUKTION
.
32
3.1.4.
BESTIMMUNG
INTRAZELLULAERER
NUKLEOTIDE
WAEHREND
DES
PRODUKTIONSVERLAUFS
.
33
3.2.
BESTIMMUNG
VON
SCHLUESSELENZYMEN
DES
C-KATABOLISMUS
.
35
3.2.1
BESTIMMUNG
DER
FRUCTOSE-1,6-BISPHOSPHAT-ALDOLASE
.
37
INHALTSVERZEICHNIS
3.2.2
BESTIMMUNG
DER
HEXOKINASE
.
37
3.2.3.
BESTIMMUNG
DER
6-PHOSPHOGLUCONAT-DEHYDROGENASE
.
38
3.3.
KONTINUIERLICHE
FEMENTATION
IM
SUBSTRATLIMITIERTEN
CHEMOSTATEN
.
38
3.4.
INDUKTION
DES
SEKUNDAERSTOFIWECHSELS
VON
STREPTOMYCES
TENDAE
TUE
901/8C
IN
KONTINUIERLICHER
KULTUR
.
39
3.4.1.
GENETISCHE
STABILITAET
UNTER
KONTINUIERLICHEN
KULTURBEDINGUNGEN
.
39
3.4.1.1.
LUFTMYZELBILDUNG
UND
NIKKOMYCIN
PRODUKTION
.
40
3.5.
AKKUMULIERUNG
INTRAZELLULAERER
NUKLEOTIDE
UNTER
N-MANGEL
.
40
3.6.
CHARAKTERISIERUNG
THIOSTREPTON-RESISTENTER
MUTANTEN
VON
STREPTOMYCES
TENDAE
TUE901/8C
.
42
3.6.1
AKKUMULIERUNG
VON
PPGPP
BEI
EINER
THIOSTREPTON
RESISTENTEN
MUTANTE
VON
STREPTOMYCES
TENDAE
TUE
901/8C
.
43
3.6.2
BESTIMMUNG
DER
MRNA-SYNTHESERATE
BEI
STREPTOMYCES
TENDAE
TUE
901/8C
.
44
3.6.3.
BESTIMMUNG
DER
MRNA-SYNTHESERATE
BEI
STREPTOMYCES
TENDAE
TU
901/8C
23
TSPR
.
45
3.6.4.
INTRAZELLULAERE
AMINOSAEUREN
UNTER
N-MANGEL
.
46
3.7.
PRAEPARATIVE
IN
VITRO-SYNTHESE
VON
PPGPP
.
49
3.8
HOCHLEISTUNGS-FLUESSIGKEITS-CHROMATOGRAPHIE
VON
NUKLEOTIDEN
.
51
3.8.1.
LONENPAAR-REVERSED-PHASE-HPLC
.
51
3.8.2.
ANIONENAUSTAUSCH-HPLC
.
54
4.
DISKUSSION
.
56
4.1.
DIE
STRINGENTE
KONTROLLE
VON
STREPTOMYCES
TENDAE
TUE
901
/8C
.
56
INHALTSVERZEICHNIS
4.2
EINFLUSS
VON
PPGPP
UND
DER
WACHSTUMSRATE
AUF
DIE
SEKUNDAERMETABOLIT
BILDUNG
BEI
STREPTOMYCES
TENDAE
TU
901/8C
.
58
4.3.
INTRAZELLULAERE
AMINOSAEUREN
.
61
4.4.
UNTERSUCHUNGEN
DES
C-STOFFWECHSELS
VON
STREPTOMYCES
TENDAE
TU
901
/8C
.
65
4
5.
GENETISCHE
INSTABILITAET
VON
STREPTOMYCES
TENDAE
TUE
901/8C
.
67
4.6.
INDUKTION
DES
SEKUNDAERSTOFFWECHSELS
BEI
STREPTOMYCES
TENDAE
TUE
901/8C
.
70
4
7.
HPLC-ANALYTIK
VON
NUKLEOTIDEN
.
74
S.
ZUSAMMENFASSUNG
.
77
6.
LITERATUR
.
79 |
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