Reparatur von DNA-Doppelstrangbrüchen mittels illegitimer Rekombinationsmechanismen in der Spalthefe Schizosaccharomyces pombe:
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INHALSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
3
2.
MATERIALIEN
UND
METHODEN
9
2.1.
MATERIALIEN
9
2.1.1.
CHEMIKALIEN
9
2.1.2.
ENZYME
9
2.1.3.
RADIOCHEMIKALIEN
9
2.1.4.
FEINCHEMIKALIEN
9
2.1.5.
CHEMIKALIEN
FUER
DIE
ELEKTROPHORESE
9
2.1.6.
MEMBRANEN
10
2.1.7.
CHEMIKALIEN
UND
SUBSTANZEN
ZUR
HERSTELLUNG
VON
MEDIEN
10
2.1.8.
MEDIEN
10
2.1.9.
BAKTERIEN
UND
HEFESTAEMME
10
2.2.
VERWENDETE
LOESUNGEN
11
2.2.1.
PUFFER
ZUR
HANDHABUNG
ODER
AUFARBEITUNG
VON
E.
COLI
11
2.2.2.
PUFFER
ZUR
HANDHABUNG
ODER
AUFARBEITUNG
VON
S.
POMBE
11
2.2.3.
ELEKTROPHORESEPUFFER
UND
MARKER
11
2.2.4.
REAKTIONSPUFFER
12
2.2.5.
UEBRIGE
LOESUNGEN
12
2.3.
METHODEN
13
2.3.1.
KONTROLLE
DER
SPALTHEFEZELLEN
13
2.3.2.
TRANSFORMATION
VON
SPALTHEFEN
14
2.3.3.
KONSTRUKTION
VON
TESTVEKTOREN
UND
SUBSTRATHERSTELLUNG
14
2.3.4.
OLIGONUKLEOTIDSYNTHESE
15
2.3.5.
POLYMERASEKETTENREAKTION
PCR
16
2.3.6.
VORBEREITUNG
DER
PCR
-
DNA
ZUR
SEQUENZANALYSE
17
2.3.7.
SEQUENZIERUNG
17
3.
ERGEBNISSE
18
3.1.
HERSTELLUNG
DER
TRANSFONNATIONSSUBSTRATE
18
3.2.
TRANSFORMATIONSASSAY
18
3.3.
EFFIZIENZ
NEJ
-
AKTIVITAET
IN
POMBE
23
3.4.
SEGREGATIONSSTUDIEN
24
3.5.
SEQUENZIERUNG
DER
VERKNUEPFUNGSSTELLEN
24
3.6.
ANALYSE
DER
NEJ
-
JUNCTIONS'
IN
EINER
MATRIZENDARSTELLUNG
29
3.7.
VERTEILUNG
DER
BRACHPUNKTE
37
3.7.1.
DIE
STABILITAET
VON
DNA
ENDEN
IN
S.
POMBE
38
3.7.2.
VERKNUEPFUNGSSTELLEN
DIE
NICHT
IN
BEREICHEN
VON
'PATCH'
-
HOMOLOGIEN
LIEGEN.
40
3.7.3.
VERKNUEPFUNGSSTELLEN,
DIE
UNTER
BETEILIGUNG
VON
'PATCH'
-
HOMOLOGIEN
41
GEBILDET
WERDEN.
YY3.7.4.
VERKNUEPFUNGSSTELLEN,
DIE
ZUSAETZLICHE
NUKLEOTIDE
BESITZEN,
DIE
NICHT
VON
DER
46
SEQUENZ
DES
ORIGINAL
TERMINUS
STAMMEN
3.8.
EINFLUSS
VON
AUSGEDEHNTEN
SEQUENZHOMOLOGIEN
AUF
DIE
'JOINING'
AKTIVITAET
IN
S.
47
POMBE
3.8.1.
HOMOLOGE
UND
NICHT
HOMOLOGE
DSB
REPARATUR
47
3.8.2.
PCR
ANALYSE L294
-
ZELLEN
NACH
TRANSFORMATION
MIT
PE114I2
52
3.8.3.
SEQUENZANALYSE
DER'JUNCTIONS'DER
PE114I2'JOINING'KLONE
53
3.8.4.
SEGREGATIONSSTUDIEN
54
4.
DISKUSSION
55
4.1.
DAS
NEJ
-
MODELL
FUER
S.
POMBE
55
4.1.1.
INTERAKTIONEN
UNTER
BETEILIGUNG
VON
'BLUNT'
ENDEN
55
4.1.2.
DIREKTE
INTERAKTION
VON
EINZELSTRANGENDEN,
(SS
-
TYP)
'JUNCTIONS'
58
4.
I.2.0.1.
VERKNUEPFUNGEN
UNTER
BETEILIGUNG
VON
DOPPELSTRAENGIGER
DNA
(SD
-
UND
61
DD
-
TYP)
'JUNCTIONS'.
4.I.2.O.2.
SS
-
TYP
UND
DS
-
TYP'JUNCTIONS'VON
TES
ENTGEGENGESTEZTER
POLARITAET
62
4.1.2.0.3.
EIN
MINIMALMODELL
ZUM
NICHT
HOMOLOGEN
DNA
END
'JOINING'
IN
S.
POMBE
65
4.2.
VERGLEICH
MIT
ANDEREN
'JOINING'
SYSTEMEN
68
4.3.
EINFLUSS
VON HOMOLOGEN
DNA
ABSCHNITTEN
69
4.4.
BEDEUTUNG
NEJ REKOMBINATIONSVORGAENGE
70
5.
ZUSAMMENFASSUNG
72
6.
ABKUERZUNGEN
80
7.
GLOSSAR
81
8.
LITERATUR
82 |
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