Screening nach neuen Siderophoren und die Charakterisierung eines hochaffinen Eisenaufnahmesystems bei Staphylococcus aureus:
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1993
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INHALTSVERZEICHNIS
I.
EINLEITUNG
.
1
1.
SCREENING
NACH
NEUEN
SLDEROPHOREN
UND
DIE
CHARAK
TERISIERUNG
EINES
HOCHAFFINEN
EISENAUFNAHME
SYSTEMS
BEI
STAPHYLOCOCCUS
AUREUS
.
6
2.
ZUFUETTERUNG
VON
VORSTUFEN
DER
STAPHYLOFERRIN-B
BLOSYNTHESE
.
9
II.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
10
1.
CHEMIKALIEN
.
10
2.
NAEHRMEDIEN
.
12
2.1
MEDIEN
.
12
3.
MIKROORGANISMEN
.
16
3.1
STAPHYLOKOKKEN
-
STAEMME
.
17
4.
KULTURBEDINGUNGEN
FUER
STAPHYLOKOKKEN
.
17
4.1
STAMMAUFBEWAHRUNG
.
17
4.2
STAMMANZUCHT
.
17
4.3
SCHUETTELKOLBENKULTUREN
.
17
4.4
FERMENTATION
.
-18
4.4.1
PRODUKTION
VON
STAPHYLOFERRIN
B
.
18
4.4.2
PRODUKTION
VON
STAPHYLOFERRIN
C
.
18
4.4.3
FERMENTATION
IM
2-KOMPARTIMENT-DIALYSEFERMENTER
.
19
4.5
ARBEITEN
UNTER
EISENFREIEN
BEDINGUNGEN
.
19
4.5.1
REINIGUNG
VON
EDDA
.
19
4.5.2
BEHANDLUNG
DER
GLASWAREN
.
20
INHALTSVERZEICHNIS
4.5.3
HERSTELLUNG
VON
EISENFREIEM
MEDIUM
.
20
5.
ANALYTISCHE
METHODEN
.
20
5.1
BESTIMMUNG
DER
BIOMASSE
.
20
5.2
TEST
NACH
S
CHWYNN
&
N
EILANDS
(1987)
.
20
5.3
PLATTENDIFFUSIONSTEST
.
21
5.4
HOCHLEISTUNGSFLUESSIGKEITSCHROMATOGRAPHIE
(HPLC)
.
21
5.4.1
NACHWEIS
VON
STAPHYLOFERRIN
A
UND
B
.
21
5.4.2
NACHWEIS
VON
STAPHYLOFERRIN
C
.
22
5.4.3
NACHWEIS
VON
RHIZOFERRIN
.
23
5.4.4
NACHWEIS
VON
KOMPONENTE
X1
.
24
5.5
BINDUNGSSTUDIEN
MIT
55
FE
.
24
5.6
UV/VIS-SPEKTREN
.
24
5.7
CITRATBESTIMMUNG
.
25
6.
ZUFUETTERUNG
VON
VORSTUFEN
DER
STAPHYLOFERRIN-B
BIOSYNTHESE
.25
7.
SCREENING
NACH
SERUM-NEGATIVEN
STAPHYLOCCCUS
AUREUS-STAEMMEN
.25
8.
HPLC-SCREENING
.
26
9.
KOMPLEMENTATIONSVERSUCHE
MIT
STAPHYLOCOCCUS
AUREUS
981
.
26
10.
ISOLIERUNG
DER
STAPHYLOFERRINE
.
26
10.1
ISOLIERUNG
VON
STAPHYLOFERRIN
B
.
26
10.2
ISOLIERUNG
VON
STAPHYLOFERRIN
C
.
27
10.2.1
ADSORPTIONSCHROMATOGRAPHIE
AN
AMBERLITE
XAD-16
.
27
10.2.2
ETHANOLFAELLUNG
.
27
INHALTSVERZEICHNIS
10.2.3
AUSSCHLUSSCHROMATOGRAPHIE
MIT
BIOGEL
P2
.
27
10.2.4
PRAEPARATIVE
HPLC
(PHPLC)
.
28
11.
GELELEKTROPHORESE
.
28
11.1
NATRIUMDODECYLSULFAT-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE
.
(SDS-PAGE)
.
28
11.2
HAMSTOFF-GELELEKTROPHORESE
.
29
12.
PROTEINFAERBUNG
IN
POLYACRYLAMIDGELEN
.
30
12.1
KOLLOIDALE
COOMASSIE
FAERBUNG
NACH
N
EUHOFF
ET
AL
(1985).
30
12.2
SILBERFAERBUNG
VERAENDERT
NACH
B
LUM
ET
AL
.
(1987)
.
30
13.
INKUBATIONSEXPERIMENTE
MIT
HOLOTRANSFERRIN
.
31
\
13.1
INKUBATION
VON
STAPHYLOFERRIN
A
MIT
HOLOTRANSFERRIN
.
31
13.2
INKUBATION
VON
KULTURFILTRATEN
MIT
HOLOTRANSFERRIN
.
31
///.
ERGEBNISSE
.
32
1.
UNTERSUCHUNGEN
DES
HOCHAFFINENEN
EISENAUF
NAHMESYSTEMS
BEI
STAPHYLOCOCCUS
AUREUS
STAEMMEN
.
32
1.1
SCREENING
.
32
1.1.1
ENTWICKLUNG
EINES
SERUMMEDIUMS
.
33
1.1.2
TEST
DES
SERUM-MEDIUMS
MIT
DREI
VERSCHIEDENEN
STAPHYLOKOKKEN
SPEZIES
.
37
1.1.3
SCREENING
NACH
SERUM-NEGATIVEN
STAPHYLOCOCCUS
AUREUS-STAEMMEN
.
39
1.1.4
HPLC-SCREENING
NACH
EISENREGULIERTEN
KOMPONENTEN
.
41
1.1.5
BESTIMMUNG
DES
CITRATGEHALTS
IN
KULTURFILTRATEN
.
44
1.2
KOMPLEMENTATIONSVERSUCHE
MIT
STAPHYLOCOCCUS
AUREUS
981.
46
1.2.1
PLATTENDIFFUSIONSTEST
.
46
1.2.2
KOMPLEMENTATIONSVERSUCHE
IN
FLUESSIGMEDIUM
.
46
INHALTSVERZEICHNIS
1.3
FERMENTATION
IM
2-KOMPARTIMENT-DIALYSEFERMENTER
.
47
1.4
GELELEKTROPHORETISCHE
UNTERSUCHUNG
VON
TRANSFERRIN
NACH
INKUBATION
MIT
STAPHYLOKOKKEN
.
50
1.4.1
SDS-GELELEKTROPHORESE
.
50
1.4.2
HAMSTOFF-GELELEKTROPHORESE
.
50
1.4.2.1
INKUBATION
VON
KULTURUEBERSTAENDEN
MIT
HOLOTRANSFERRIN
.
51
1.4.2.2
INKUBATION
VON
STAPHYLOFERRIN
A
MIT
HOLOTRANSFERRIN
.
52
2.
UNTERSUCHUNG
EISENREGULIERTER
KOMPONENTEN
AUS
DEM
KULTURFILTRAT
VON
STAPHYLOCOCCUS
AUREUS
NT
259
.
53
2.1
OPTIMIERUNG
DES
HPLC-SYSTEMS
.
53
2.1.1
HPLC-SYSTEM
FUER
KOMPONENTE
X1
.
54
2.1.2
HPLC-SYSTEM
FUER
STAPHYLOFERRIN
C
.
54
2.2
BINDUNGSSTUDIEN
MIT
S5
FE
.
55
2.2.1
BINDUNG
VON
55
FE
AN
KOMPONENTE
X1
.
55
2.2.2
BINDUNG
VON
55
FE
AN
STAPHYLOFERRIN
C
.
56
2.3
PRODUKTION
VON
STAPHYLOFERRIN
C
IM
BIOREAKTOR
.
58
2.4
ISOLIERUNG
VON
STAPHYLOFERRIN
C
.
58
2.5
UVA/IS-SPEKTRUM
VON
STAPHYLOFERRIN
C
.
61
3.
ZUFUETTERUNG
VON
VORSTUFEN
DER
STAPHYLOFERRIN
B
.
BIOSYNTHESE
.
62
IV
DISKUSSION
.66
1.
UNTERSUCHUNG
DER
HOCHAFFINEN
EISENAUFNAHME
BEI
STAPHYLOCOCCUS
AUREUS
.
66
1.1
SCREENINGSYSTEME
.
66
1.1.1
ENTWICKLUNG
EINES
SERUMMEDIUMS
.
67
INHALTSVERZEICHNIS
1.1.2
SCREENING
NACH
SERUM-NEGATIVEN
STAPHYLOCOCCUS
AUREUS-STAEMMEN
.
70
1.1.3
HPLC-SCREENING
NACH
EISENREGULIERTEN
KOMPONENTEN
.
71
1.2
FERMENTATION
IM
2-KOMPARTIMENT-DIALYSEFERMENTER
.
72
1.3
GELELEKTROPHORETISCHE
AUFTRENNUNG
VON
TRANSFERRIN
.
73
1.3.1
SDS-GELELEKTROPHORESE
.
73
1.3.2
HAMSTOFFGELELEKTROPHORESE
.
74
1.4
ISOLIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
NEUER
EISENREGULIERTER
KOMPONENTEN
.
75
1.4.1
BINDUNGSSTUDIEN
MIT
55
FE
.
75
1.4.2
PRODUKTION
VON
STAPHYLOFERRIN
C
IM
BIOREAKTOR
.
76
1.4.3
ISOLIERUNG
VON
STAPHYLOFERRIN
C
.
77
2.
ZUFUETTERUNG
VON
VORSTUFEN
DER
STAPHYLOFERRIN-B
BLOSYNTHESE
.
78
V.
ZUSAMMENFASSUNG
.80
VI.
LITERATUR.
.
81 |
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