Entwicklung von Methoden zum Studium der natürlichen Transformation in Pseudomonas stutzeri sowie die Untersuchung von "Supra-Operonic-Clustern" in Acinetobacter calcoaceticus:
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| Main Author: | |
|---|---|
| Format: | Thesis Book |
| Language: | German |
| Published: |
1993
|
| Subjects: | |
| Online Access: | Inhaltsverzeichnis |
| Physical Description: | X, 161 S. Ill., graph. Darst. |
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
ABKUERZUNGEN
.
VNI
1.
EINLEITUNG
.
1
1.1.
BIOLOGIE
DER
NATUERLICHEN
TRANSFORMATION
.
1
1.2.
OEKOLOGISCHE
ASPEKTE
DER
NATUERLICHEN
TRANSFORMATION
.
6
1.3.
NATUERLICHE
TRANSFORMATION
ALS
MITTEL
ZUR
UNTERSUCHUNG
VON
"SUPRA-OPERONIC-CLUSTEM"
.
11
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
14
2.1.
MIKROORGANISMEN
.
14
2.2
PLASMIDE
UND
TRANSPOSONS.
.
16
2.3.
NAEHRMEDIEN
.
18
2.3.1.
LB-MEDIUM
(SAMBROOK
ET
AL.,
1989;
MODIFIZIERT)
.
18
2.3.2.
LB-MEDIUM
ZUR
INDUKTION
DER
KOMPETENZ
IN
P.
STUTZEN
STAEMMEN
(CARLSON
ET
AL.,
1983.)
.
19
2.3.3.
M9-GRUNDMEDIUM
(SAMBROOK
ET
AL
,
1989;
MODIFIZIERT)
.
19
2.3.4.
MINIMALMEDIUM
ZUR
ANZUCHT
VON
E
COLI
STAEMMEN
.
19
2.3.5.
MINIMALMEDIUM
ZUR
ANZUCHT
VON
PSEUDOMONADEN
.
20
2.3.6.
MINIMALMEDIUM
ZUR
ANZUCHT
VON
A.
CALCOACETICUS
.
21
2.4.
ANTIBIOTIKA
UND
SONSTIGE
ZUSAETZE
.
22
2.5.
WACHSTUMSBEDINGUNGEN
.
23
2.6.
TRUEBUNGSMESSUNG
.
23
2.7.
KONSERVIERUNG
DER
BAKTERIENSTAEMME
.
23
2.8
DNA-STANDARDTECHNIKEN
.
24
2.8.1
BEHANDLUNG
VON
GERAETEN
UND
LOESUNGEN
.
24
2.8.2.
DNA-AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
.
24
2.8.3.
DNA-GROESSENSTANDARDS
.
25
2.8.4.
BESTIMMUNG
DER
DNA-KONZENTRATION
.
26
II
INHALTIVERZEICIMI
2.8
5.
PHENOLEXTRAKTION
.
,
.
26
2.8.6.
FAELLUNG
VON
DNA
.
27
2.8.6.1.
FAELLUNG
MIT
NATRIUMACETAT
.
27
2.8.6
2.
FAELLUNG
MIT
AMMONIUMACETAT
.
27
.
2.8.7.
DIALYSE
VON
DNA-LOESUNGEN
.
27
2.8.8.
ISOLIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
AUS
AGAROSE-GELEN
.
28
2.8.8.I.
ELEKTROELUTION
VON
DNA-FRAGMENTEN
AUS
EINEM
GELSTUECK
.
28
2.8.8
2.
ISOLIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
DURCH
ADSORPTION
AN
GLASMILCH
.
28
2.9.
ISOLIERUNG
VON
DNA
.
29
2.9.1.
ISOLIERUNG
VON
CHROMOSOMALER
DNA
.
29
2.9.1.1.
MINIPRAEPARATION
VON
CHROMOSOMALER
DNA
(STANLEY
ET
AL.,
1987,
MODIFIZIERT)
.
29
2.9.1.2.
QUANTITATIVE
PRAEPARATION
VON
CHROMOSOMALER
DNA
UEBER
CSCL-DICHTEGRADIENTENZENTRIFUGATION
.
30
2.9.1.3.
SCHNELLE
ISOLIERUNG
VON
DNA
AUS
A.
CALCOACETICUS
(NEIDLE
UND
ORNSTON,
1986.)
.
31
2.9.2.
ISOLIERUNG
VON
PLASMID-DNA
.
32
2.9.2.1.
MINIPRAEPARATION
VON
PLASMID-DNA
(BIRNBOIM
UND
DOLY,
1979;
MODIFIZIERT)
.
32
2.9.2.2.
MINIPRAEPARATION
VON
PLASMID-DNA
AUS
A.
CALCOACETICUS
(HOLMES
UND
QUIGLEY,
1981;
MODIFIZIERT)
.
33
2.9.2.3.
PRAEPARATION
VON
HOCH
AUFGEREINIGTER
PLASMID-DNA
UEBER
EINE
CSCL-DICHTEGRADIENTENZENTRIFUGATION
(SAMBROOK
ET
AL.,
1989;
MODIFIZIERT)
.
34
2.9.3.
ISOLIERUNG
VON
DNA
AUS
DEM
CHROMOSOM
VON
A.
CALCOACETICUS
MITTELS
LUECKENREPARATURMETHODE
("GAP-REPAIR-METHOD")
(GREGG-JOLLY
UND
ORNSTON,
1990.)
.
36
2.10.
ENZYMATISCHE
MODIFIKATIONEN
VON
DNA
.
38
2.10.1.
VERDAU
VON
DNA
DURCH
RESTRIKTIONSENDONUKLEASEN
.
38
2.10.2.
DEPHOSPHORYLIERUNG
VON
DNA-FRAGMENT-ENDEN
MIT
LAIMRITAVMAIAIMIS
III
ALKALISCHER
PHOSPHATASE
.
.?
.
38
2.10.3.
HERSTELLUNG
VON
"BLUNT-END"
FRAGMENTEN
(SAMBROOK
ET
AL.,
1989}
.
,39
2.10.4.
LIGIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEO.
.
.
.
.,
.
40
2.11.
DNA-DNA
HYBRIDISIERUNG
.
40
2.11.1.
SOUTHERN
TRANSFER
(SOUTHERN,
1975;
MODIFIZIERT}
.
'.-.'40
2.11.2.
HYBRIDISIERUNG
UND
IMMUNOLOGISCHE
DETEKTION.
.
41
2.12.
EINFUEHRUNG
VON
PLASMID-DNA
IN
.
COLI
DURCH
TRANSFORMATION
(PROMEGA
BIOTECH}
.
.43
2.12.1.
HERSTELLUNG
KOMPETENTER
E.
COLI-ZEUEEA
.
.YY
.
,.
.43
2.12.2.
TRANSFORMATION
DER
KOMPETENTEN
E.
CO/I-ZELLEN
.
.
.
44
2.13.
TRANSFER
VON
PLASMID-DNA
DURCH
KONJUGATION
.
_
.
44
2.13.1.
KONJUGATION
ZWISCHEN
E.
COLI
UND
PSEUDOMONADEN
.
44
2.13.2.
KONJUGATION
ZWISCHEN
E.
COLI
UND
4.
CAICOACETICUS.
.
.
.
4?
2.14.
BESTIMMUNG
DER
LYSISEFFIZIENZ
IN
DEN
GRAM-NEGATIVEN
WIRTSBAKTERIEN
.
.46
2.15.
DIE
ISOLIERUNG
VON
ANTIBIOTIKAMUTANTEN
VON
P.STUTZEN
JM300
MITTELS
SPONTANER
MUTAGENESE
.
,46
2,16.
NATUERLICHE
TRANSFORMATION
VON
P.
STUETZEN
JM300
.
47
2.16.1.
NATUERLICHE
TRANSFORMATION
VON
P.
STUETZEN
JM300
MIT
AUFGEREINIGTER
DNA
(CARLSON
ET
AL.,
1983;
MODIFIZIERT)
.
47
2.16.2.
NATUERLICHE
TRANSFORMATION
VON
P.
STUTZEN
DK304
MIT
DNA,
FREIGESETZT
AUS
P.
STUETZEN
DK301
(PDKL02)
IN
AN
UND
ABWESENHEIT
DES
INDUKTORS
IPTG
.
47
2.16.3.
NATUERLICHE
TRANSFORMATION
VON
P.
STUTZEN
DK304
NACH
ZEITLICH
BEGRENZTER
ZELL-LYSIS
VON
P.
STUTZEN
DK301
(PDKLQ2)
.
48
2.17.
NATUERLICHE
TRANSFORMATION
VON
A.
CAICOACETICUS
(JUNI,
1972;
MODIFIZIERT)
.
.49
2.18.
ISOLIERUNG
VON
A.
CAICOACETICUS
MANGELMUTANTEN
IM
SS-KETOADIPAT
ABBAUWEG
.
49
2.18.1.
ISOLIERUNG
VON
A.
CAICOACETICUS
DOPPELMUTANTEN,
DIE
EINE
IV
FAK
MUTATION
IM
GEN
PCAHG
UND
IN
DER
REGION
FUI
AUFWEISEN
.
50
2.18.2.
ISOLIERUNG
VON
A.
CALCOACETICUS
DREIFACHMUTANTEN
MIT
EINEM
DEFEKT
IN
DEN
GENEN
PCAHG,
POBR
UND
IN
DER
.
REGIONAL.
.
.50
2183
ISOLIERUNG
VON
A.
CALCOACETICUS
DOPPELMUTANTEN
MIT
EINEM
DEFEKT
IN
DEN
GENEN
PCAHG.
UND
POBR
.
31
2.18.4.
YY
ISOLIERUNG
VON
A.
CALCOACETICUS
DOPPELMUTANTEN,
DIE
:
EINEN
DEFEKT
IN
DEN
GENEN
CATA
UND
POBR
AUFWEISEN
.
.
52
2:19.
BESTIMMUNG
DER
AKTIVITAET
DER
P-HYDROXYBENZOAT-HYDROXYLASE
(EC
1.14.33-2.)
.
.52
2:20.
CHEMIKALIEN
UND
BIOCHEMIKAIIEN.
.
X
.
.53
3.
EXPERIMENTE
UND
ERGEBNISSE
.
56
3.1.
VERSUCHE
ZUR
ENTWICKLUNG
VON
ZELL-LYSISSYSTEMEN
.
56
3.1.1.
KONSTRUKTION
VON
LYSISPLASMIDEN
.
56
3.1.1.1.
KONSTRUKTION
DES
LYSISPLASMIDES
PDKLO.1
.
.
56
3.1.1.2.
KONSTRUKTION
DES
LYSISPLASMIDES
PDKLOL
.
'59
3.1.1.3.
KONSTRUKTION
DES
LYSISPLASMIDES
PDKLL.L
.
.'.
.
61
3.1.2.
VERSUCHE
ZUM
WIRTSSPEKTRUM
DER
KONSTRUIERTEN
LYSISPLASMIDE
.
66
3.1.3.
BESTIMMUNG
DER
EFFIZIENZ
DER
INDUZIERTEN
LYSISPLASMIDE
IN
DEN
GRAM
NEGATIVEN
WIRTSBAKTERIEN
.
68
3.1.3.1.
BESTIMMUNG
DER
LYSISEFFIZIENZ
DER
VERSCHIEDENEN
LYSISPLASMIDE
PDKLOL,
PDKL
11
UND
PDKL02
IN
E.COLI
.
:
.
.'
.
69
3.1.3.2.
BESTIMMUNG
DER
LYSISEFFIZIENZ
VON
PDKLOL
IN
P.
PUTIDA
KT2442,
VON
PDKLLL
IN
P.
TESTOSTERONI
DSM50244
UND
VON
PDKLLL
IN
A.
CALCOACETICUS
ADP249::ZR306.
.
72
3.1.3.3.
BESTIMMUNG
DER
LYSISEFFIZIENZ
VON
PDKLOL
UND
PDKL02
IN
P.
STUETZEN
DK301
.
75
3.1.4.
BESTIMMUNG
DER
LYSISEFFIZIENZ
VON
PDKLOL
UND
PDKL02
IN
P.
STUTZEN
DK301
IN
ABHAENGIGKEIT
VON
DER
INDUKTORKONZENTRATION.
.
'
.
.
79
WNM
MAK
V
3.1.5.
BESTIMMUNG
DER
LYSISEFFIZIENZ
VON
PDKLOL
UND
PDKL02
IN
P.
STUETZEN
DK301
IN
ABHAENGIGKEIT
VON
DER
TEMPERATUR
.
81
3.1.6.
PLASMIDSTABILITAET
VON
PDKLOL
UND
PDKL02
IN
P.
STUTZEN
DK3OJ.
82
3.2.
VERSUCHE
ZUR
NATUERLICHEN
TRANSFORMATION
VON
P.
STUTZEN
JM300
UND
SEINEN
ANTIBIOTIKARESISTENTEN
DERIVATEN
.
.
.
83
3.2.1.
VERSUCHE
ZUR
BESTIMMUNG
DER
OPTIMALEN
KOMPETENZ
VON
P.
STUTZERI
JM3OO
.
83
3.2.2.
BESTIMMUNG
DER
ZEITDAUER
DER
DNA-AUFNAHME,
DNA-REKOMBINATION
UND
DNA-EXPRESSION
IN
P.
STUTZERI
JM3OUE
.
.
.
.,.,.35
3.2.3.
EINFLUSS
DER
DNA-KONZENTRATION
AUF
DIE
TRANSFONNATIONSFREQUENZ
VON
P.
STUTZERI
JM3Q0
.
.36
3.2.4.
EINFLUSS
CHROMOSOMALER
DNA
VERSCHIEDENER
HERKUNFT
AUF
DIE
TRANSFORMATIONSFREQUENZ
VON
P.
STUTZERI
JM300
.
87
3,2.5.
VERSUCHE
ZUR
NATUERLICHEN
TRANSFORMATION
VON
P.
STUTZERI
DK304
MIT
HOMOLOGER
DNA
AUS
P.
STUTZERI
DK3JQL
.
.88
3.2.6.
NATUERLICHE
TRANSFORMATION
VON
P.
STUTZERI
DK304
MIT
DURCH
LYSIS
FREIGESETZTE
DNA.
.
,89
3.2.6.1.
NATUERLICHE
TRANSFORMATION
VON
P.
STUTZERI
DK304
MIT
FREIGESETZTER
DNA
AUS
P.
STUTZERI
DK301
(PDKLOL)
UNTER
INDUZIERENDEN
UND
NICHT
INDUZIERENDEN
BEDINGUNGEN
.
89
3.2.6.2.
EINFLUSS
DER
LYSATE
AUF
DAS
WACHSTUM
VON
P.
STUTZERI
JM3Q0
.
;
.
,.
.
91
32-6.3.
NATUERLICHE
TRANSFORMATION
VON
P.
STUTZERI
DK304
MIT
FREIGESETZTER
DNA
AUS
P.
STUTZERI
DK301
(PDKL02)
UNTER
INDUZIERENDEN
UND
NICHT
INDUZIERENDEN
BEDINGUNGEN
.
92
3.2.7.
VERSUCHE
ZUR
OPTIMIERUNG
DES
ISOGENETISCHEN
MODELLSYSTEMS
ZUM
STUDIUM
DER
NATUERLICHEN
TRANSFORMATION
BEI
P.
STUTZERI
.
95
3.3.
STUDIEN
DER
"LINKAGE"
VON
BAKTERIELLEN
GENEN
AM
MODELL
VON
A.
CALCOACETICUS
ADPI
.
98
3,3.1.
"LINKAGESTUDIEN"
DER
IM
"SUPRA-OPERONIC-CLUSTER"
ANGEORDNETEN
GENE
PCAHG
UND
POBR
.
100
3.3.1.1.
ENTWICKLUNG
VON
MUTANTEN
IN
DEN
GENEN
PCAHG
UND
VI
LAHAMNENCTCTEI
POBR
IN
A.
CALCOACETICUS.:I:.
.
J-A.
.
100
3.3.1.2.
BESTIMMUNG
DER
KOTRANSFORMATIONSRATE
VON
''YY
A.
CALCOACETICUS
ADP4021
MIT
WILDTYP-DNA
.
.
101
3.3.1.3.
EINFLUSS
DER
DISTANZ
ZWISCHEN
DEN
GENEN
PCAHG
UND
POBR
IN
DER
DONOR-DNA
AUF
DIE
"LINKAGE"
DER
GENE
IN
A.
CALCOACETICUS
ADP4021
.
102
3.3.1.4.
ENTWICKLUNG
EINER
DREIFACHMUTANTE
IN
DEN
GENEN
PCAHG,
POBR
UND
DER
QUINATREGION
IN
A.
CALCOACETICUS
.
104
3.3.1.5.
NATUERLICHE
TRANSFORMATION
VON
A.
CALCOACETICUS
ADP699
MIT
WILDTYP-DNA
.
105
5.3.1.6.
BESTIMMUNG
DES
EINFLUSSES
DER
DISTANZ
ZWISCHEN
DEN
PCAHG
UND
POB-GMEN
IN
DER
DONOR-DNA
AUF
DIE
"LINKAGE"
DER
IHUTIERTEN
GENE
IN
A.
CALCOACETICUS
ADP699.
.
106
3.3.2.
UNTERSUCHUNG
DER
"LINKAGE"
VON
ZWEI
VERMUTLICH
NICHT
IM
"SUPRA
OPERONIC-CLUSTER"
ANGEORDNETEN
GENEN
.
10T
3.3.2.1.
ENTWICKLUNG
VON
DOPPELMUTANTEN
IN
DEM
GEN
CATA
UND
DEM
GEN
POBR.
.
109
3.3.2.2.
ENTWICKLUNG
EINES
HYBRIDPLASMIDES,
WELCHES
DIE
GENE
CATA
UND
POBATPOBR
ENTHUELL
.
110
3.3.2.3.
TRANSFORMATION
VON
A.
CALCOACETICUS
ADP4023
UND
A.
CALCOACETICUS
ADP4024
MIT
WILDTYP-DNA
UND
DEM
HYBRIDPLASMID
PZR.439.
.
.
112
4.
DISKUSSION
.
.
116
4.1.
CHARAKTERISIERUNG
DER
KONSTRUIERTEN
ZELL-LYSISSYSTEME
.
116
4.2.
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
NATUERLICHEN
TRANSFORMATION
MIT
UNBEHANDELTER
DNA
.
124
4.3.
NATUERLICHE
TRANSFORMATION
ALS
MITTEL
ZUR
AUFKLAERUNG
VON
"SUPRA
OPERONIC-CLUSTEM"
.
131
4.3.1.
GEZIELTE
ENTWICKLUNG
VON
STOFFWECHSELMUTANTEN
.
132
4.3.2.
"LINKAGE"
VON
BAKTERIELLEN
GENEN
.
135
HIHLTR'CTRIRIUIL
VII
5.
ZUSAMMENFASSUNG
.
141
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LITERATURVERZEICHNIS
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| spelling | Kloos, Dorothee-Ursula Verfasser aut Entwicklung von Methoden zum Studium der natürlichen Transformation in Pseudomonas stutzeri sowie die Untersuchung von "Supra-Operonic-Clustern" in Acinetobacter calcoaceticus von Dorothee-Ursula Kloos 1993 X, 161 S. Ill., graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Braunschweig, Techn. Univ., Diss., 1993 Operon (DE-588)4210146-3 gnd rswk-swf Transformation Genetik (DE-588)4268828-0 gnd rswk-swf Gencluster (DE-588)4355303-5 gnd rswk-swf Acinetobacter calcoaceticus (DE-588)4297528-1 gnd rswk-swf Pseudomonas stutzeri (DE-588)4220565-7 gnd rswk-swf Abstand (DE-588)4228463-6 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Pseudomonas stutzeri (DE-588)4220565-7 s Transformation Genetik (DE-588)4268828-0 s DE-604 Acinetobacter calcoaceticus (DE-588)4297528-1 s Gencluster (DE-588)4355303-5 s Operon (DE-588)4210146-3 s Abstand (DE-588)4228463-6 s DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=006186440&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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