Molekulare Klonierung und Charakterisierung von NLR: ein neuer G-Protein-gekoppelter Rezeptor mit spezifischer Verteilung in neuronalem und lymphatischem Gewebe
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
.
1
2.
MATERIAL
.7
2.1.
2.2.
2.3.
2.4.
2.5.
2.6.
2.7.
CHEMIKALIEN
.
7
ENZYME
.
8
NUKLEINSAEUREN
.
8
BAKTERIENSTAEMME
.
9
GENBANKEN
.
9
ZELLINIEN
.
9
MEDIEN,
PUFFER,
LOESUNGEN
.
10
3.
3.1.
3.2.
3.3.
3.3.1.
3.3.1.1.
3.3.I.2.
3.3.1.3.
3.3.2.
3.3.2.I.
3.3.2.2.
3.3.2.3.
3.3.3.
3.3.4.
3.3.5.
3.3.6.
3.3.7.
3.4.
3.5.
3.5.1.
3.5.2.
3.5.3.
3.6.
3.6.1.
3.6.2
3.6.2.
3.7.
3.8.
3.9.
3.10.
3.10.1
3.10.2.
3.10.3.
BAKTERIENKULTUR
.
13
KULTUR
EUKARYONTISCHER
ZELLEN
.
13
DNA-METHODEN
.
13
DNA-ISOLIERUNG
.
13
PLASMID-ISOLIERUNG
.
13
ISOLIERUNG
VON
PHAGEN-DNA
.
YY.
.
14
ISOLIERUNG
GENOMISCHER
DNA
.
14
METHODEN
ZUR
IN-VITRO-REKOMBINATION
VON
DNA
.
14
ENZYMATISCHE
REAKTIONEN
.
14
HERSTELLUNG
VON
KOMPETENTEN
BAKTERIEN
UND
TRANSFORMATION
.
14
DNA-FRAGMENT-ISOLIERUNG
.
15
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
DNA
.
15
GENBANK-YYSCREENING
"
.
.YY
.
15
YYSOUTHEM-BLOT
"
-HYBRIDISIERUNG
.
16
KOLONIE-HYBRIDISIERUNG
.
16
DNA-SEQUENZIERUNG
.
16
OLIGONUKLEOTID-SYNTHESE
.
16
POLYMERASE-KETTEN-REAKTION
(PCR)
.
17
CDNA-SYNTHESE
.
17
PCR-ANSATZ
.
17
REINIGUNG
DER
PCR-PRODUKTE
UND
KLONIERUNG
.
18
RNA-METHODEN
.
18
RNA-ISOLIERUNG
.
18
HERSTELLUNG
VON
RNA-SONDEN
.
19
YYNORTHERN-BLOT
"
HYBRIDISIERUNG
.
19
IN-SITU-HYBRIDISIERUNG
.
19
COMPUTERUNTERSTUETZTE
DATENANALYSE
.
20
STABILE
EXPRESSION
VON
FREMD-DNA
IN
EUKARYONTISCHEN
ZELLEN
.
20
REZEPTOR-MESSMETHODEN
.
20
BINDUNGSTEST
.
20
CAMP-MESSUNG
.
21
KALZIUM-MESSUNG
.
21
INHALTSVERZEICHNIS
4.
ERGEBNISSE
.22
4.1.
KLONIERUNGSSTRATEGIE
.
22
4.2.
KLONIERUNG
VON
REZEPTOR-PARTIALSEQUENZEN
.
22
4.3.
ISOLIERUNG
EINES
VOLLSTAENDIGEN
REZEPTORS
MIT
DER
NG-48
SONDE
.
25
4.4.
GENOMISCHE
ORGANISATION
VON
NLR
.
32
4.5.
GEWEBESPEZIFISCHE
EXPRESSION
VON
NLR
.
34
4.5.1.
YYNORTHEM-BLOT
"
-ANALYSE
.
35
4.5.2.
RNA-PCR
.
38
4.5.3.
IN
SITU
HYBRIDISIERUNG
.
39
4.6.
STABILE
EXPRESSION
DES
NLR-GENS
IN
CHO/KL-ZELLEN
.
43
4.6.1.
RNA-ANALYSE
VON
G-418
RESISTENTEN
NLR-CHO-KLONEN
.
43
4.6.2.
BINDUNGSTEST
MIT
RADIOAKTIVEN
NEUROPEPTIDEN
.
45
4.6.3.
BESTIMMUNG
VON
CAMP
.
45
4.6.4
BESTIMMUNG
DER
INTRAZELLULAEREN
KALZIUM-KONZENTRATION
.
47
4.7.
HOMOLOGIE
VON
NLR
ZU
G-PROTEIN-GEKOPPELTEN
REZEPTOREN
.
50
4.8.
HOMOLOGIE
VON
NLR
ZU
BLR1
.
56
5.
DISKUSSION
.57
5.1.
DIE
GEWEBESPEZIFISCHE
EXPRESSION
DES
NLR-REZEPTORS
.
57
5.1.1.
NEUROPEPTIDE
ALS
MOEGLICHE
LIGANDEN
FUER
NLR
.
57
5.1.2.
CHEMOTAKTISCHE
ZYTOKINE
ALS
NLR-LIGANDEN
.
59
5.2.
DAS
NLR-GEN
.
62
5.3.
DIE
SUPERFAMILIE
DER
G-PROTEIN-GEKOPPELTEN
REZEPTOREN:
NLR
ALS
VERTRETER
DER
INTERKRIN-REZEPTOR-SUBFAMILIE
.
63
5.4.
STRUKTUR-FUNKTIONSBEZIEHUNGEN
DES
NLR-REZEPTOR
.
65
5.5.
AUSBLICK
.
69
,YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY
7.
LITERATURVERZEICHNIS.
74
8.
ANHANG
.87
8.1.
ABKUERZUNGEN
.
87
8.2.
AMINOSAEUREN
UND
IHRE
SYMBOLE
.
88 |
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