Enzymkinetische Charakterisierung der Chloroplasten-H+-ATPase mittels der deltapH-clamp-Technik:
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
1
1.1
ATP-SYNTHESE
IN
CHLOROPLASTEN
1
1.2
STRUKTUR
UND
FUNKTION
DER
CFPCFJ-ATPASE
3
1.3
REGULATION
DER
CHLOROPLASTEN-ATPASE
9
1.4
DER
KATALYTISCHE
MECHANISMUS
10
1.5
KINETISCHE
UNTERSUCHUNGEN
AM
CF
Q
CF
J
14
1.6
ZIELSETZUNG
16
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
18
2.1
MATERIAL
18
2.1.1
BIOLOGISCHES
MATERIAL
18
2.1.2
CHEMIKALIEN
UND
ENZYME
18
2.1.3
DIE
APH-CLAMP-APPARATUR
18
2.2
METHODEN
21
2.2.1
ISOLATION
VON
THYLAKOIDEN
UND
CHLOROPHYLLBESTIMMUNG
21
2.2.2
BESTIMMUNG
DER
NUKLEOTIDKONZENTRATION
21
2.2.3
PHOSPHATBESTIMMUNG
22
2.2.4
QUANTIFIZIERUNG
DES
APH
22
2.2.5
REAKTIONSBEDINGUNGEN
UND
DURCHFUEHRUNG
DER
MESSUNGEN
24
2.2.6
BESTIMMUNG
DES
DURCH
SYNTHESE
GEBILDETEN
Y-[^^P]-ATP
27
2.2.7
BESTIMMUNG
DES
DURCH
HYDROLYSE
FREIGESETZTEN
[^P]-PHOSPHATS
27
3.
ERGEBNISSE
28
3.1
UNTERSUCHUNGEN
DER
ATP-SYNTHESE
28
3.1.1
EINFLUSS
DES
APH
AUF
K
M
UND
V
MAX
28
3.1.2
DIE
BINDESEQUENZ
VON
ADP
UND
PJ
31
3.1.3
HEMMUNG
DER
ATP-SYNTHESE
DURCH
ATP
40
3.1.4
EINFLUSS
DES
APH
AUF
DIE
DISSOZIATIONSKONSTANTEN
47
3.1.5
VERSCHIEBUNG
DES
EXTERNEN
PH-WERTES
AUF
7.5
58
3.1.5.1
KALIBRIERUNG
DER
MESSMETHODE
58
3.1.5.2
BESTIMMUNG
VON
K^^^,
K^DP
UND
V
MAX
59
3.2
UNTERSUCHUNGEN
DER
ATP-HYDROLYSE
63
3.2.1
HEMMUNG
DURCH
ADP
63
3.2.2
HEMMUNG
DURCH
PHOSPHAT
72
ENZYMKINETISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DER
CHLOROPLASTEN-H
-ATPASE
4.
DISKUSSION
78
S.
ZUSAMMENFASSUNG
101
6.
LITERATURVERZEICHNIS
103
7.
ANHANG
111
7.1
ABLEITUNG
DER
GESCHWINDIGKEITSGLEICHUNGEN
111
7.1.1
'RAPID
EQUILIBRIUM'-SYSTEM
MIT
GEORDNETER
BINDESEQUENZ
111
7.1.2
'RAPID
EQUILIBRIUM'-SYSTEM
MIT
ZUFAELLIGER
BINDESEQUENZ
113
7.1.3
MISCHTYP-HEMMUNG
116
7.2
VERZEICHNIS
DER
ABKUERZUNGEN
118 |
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