Die Rolle von Chlorid- und Kationenkanälen für die Erregbarkeit des Muskels: eine Analyse der Myotonie mittels intrazellulärer Ableitungen und Einzelkanalmessungen an Membranfraktionen
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ZUAMMENFASSUNG
1.
EINLEITUNG
1.1
ERBLICHE
MUSKELKRANKHEITEN
DES
MENSCHEN
5
1.2
TIERMODELLE
FUER
ERBLICHE
MUSKELKRANKHEITEN
8
13
BEEINFLUSSUNG
DER
MEMBRANERREGBARKEIT
DURCH
"SECOND
MESSENGER"
9
1.4
KALIUMKANAELE
UND
MYOTONIE
11
1.5
CHLORIDKANAELE
UND
MYOTONIE
12
2.
MATERIAL
UND
METHODE
2.1
BIOLOGISCHES
MATERIAL
15
2.1.1
KANINCHEN
15
2.1.2
NORMALE
UND
MYOTONE
MAEUSE
15
2.13
TOCAINIDBEHANDELTE
MAEUSE
15
2.2
MUSKELPRAEPARATION
16
2.2.1
M.
STEMOCOSTALIS
16
2.2.1.1
PRAEPARATION
16
2.2.2
M.
INTEROSSEUS
16
2.2.2.1
PRAEPARATION
16
2.2.2.2
HERSTELLEN
DER
EINZELFASEM
17
2.2.23
SARCOLEMMABLAESCHEN
("BLEBS")
AUS
DISSOZIIERTEN
17
EINZELFASEM
2.3.
MYOBAELLE
18
23.1
TRYPSINBEHANDLUNG
DER
MYOTUBEN
18
2.4
MEMBRAN/LIPIDVESIKEL
19
2.4.1
MEMBRANPRAEPARATION
19
2.4.2
HERSTELLUNG
DER
LIPOSOMEN
20
2.4.3
BEHANDLUNG
DER
SARCOLEMMA-FRAKTION
20
2.4.4
MEMBRANVESIKEL
FUER
DIE
PATCH-CLAMP
ANALYSE
20
2.5
INTRAZELLULAERE
ABLEITUNGEN
21
2.5.1
ABLEITELEKTRODEN
21
2.5.2
REFERENZELEKTRODEN
21
2.5.3
CHLORIERUNG
DES
ELEKTRODENDRAHTS
22
2.5.4
MESSAPPARATUREN
22
2.6
VERSORGUNG
DES
PRAEPARATES
UND
OPTISCHE
EINRICHTUNG
23
2.7
"PATCH-CLAMP"
UND
"WHOLE-CELL"-MESSUNGEN
24
2.7.1
GLASELEKTRODEN
(PATCH-CLAMP)
24
2.7.2
GLASELEKTRODEN
(WHOLE-CELL)
24
2.7.3
MESSAPPARATUREN
25
2.8
PRAEPARATIONS
UND
MESSLOESUNGEN
27
2.8.1
LOESUNGEN
FUER
INTRAZELLULAERE
ABLEITUNGEN
27
2.8.2
DISSOZIATIONSLOESUNG
FUER
EINZELFASEM
27
2.8.3
LOESUNG
MIT
CHLORIDGRADIENTEN
27
2.8.4
LOESUNG
FUER
WHOLE-CELL-MESSUNGEN
28
2.9
PHARMAKA
UND
TOXINE
28
3.
ERGEBNISSE
3.1
BEEINFLUSSUNG
DER
MEMBRANERREGBARKEIT
DES
SKELETTMUSKELS
29
3.1.1
WIRKUNG
DES
NEUROPEPTIDS
PROCTOLINS
29
3.1.2
BETEILIGUNG
DER
PROTEINKINASE
C
AN
DER
PROCTOLINWIRKUNG
30
3.1.3
CHLORIDLEITFAEHIGKEIT
NACH
PROCTOLINZUGABE
32
3.1.4
WIRKUNG
DES
NEUROTENSINS
34
3.1.5
WIRKUNG
DES
CHLORIDKANALBLOCKERS
IAA-94
35
3.1.6
BETEILIGUNG
VON
KALIUMKANAELEN
36
3.1.7
WIRKUNG
VON
DOG
36
3.2
EINZELKANALUNTERSUCHUNGEN
AN
DISSOZIIERTEN
INTEROSSEUSFASEM
38
3.2.1
KALIUMKANAELE
VOM
TYP
"DELAYED
RECTIFIER"
38
3.2.2
CA^
+
-AKTIVIERTE
KALIUMKANAELE
41
3.2.2.1
CA^
4
-AKTIVIERTE
KALIUMKANAELE
IN
INTAKTEN
DISSOZIIERTEN
MUSKELFASERN
41
3.2.2.2
CA^
+
-AKTIVIERTE
KALIUMKANAELE
IN
SARCOLEMMALEN
MEMBRANBLAESCHEN
43
("BLEBS")
3.2.3
CHLORIDKANAELE
46
3.2.3.1
CHLORIDKANAELE
AUS
NATIVEN
MEMBRANEN
46
3.2.3.1.1
60
PS-CHLORIDKANAL
48
3.2.3.2
CHLORID
UND
KALIUMKANAELE
AUS
FRAKTIONIERTEN
MEMBRANPROTEINEN
IN
51
LIPIDVESIKELN
3.2.3.2.1
CHLORIDKANAELE
MIT
LINEAREN
STROM-SPANNUNGSKENNLINIEN
56
3.2.3.2.1.1
35-PS
KANAL
(CIC-A)
56
3.2.3.2.1.2
150-PS
KANAL
(CIC-C)
57
3.2.3.2.1.3
200-PS
KANAL
(CIC-D)
58
3.2.3.2.2
PARTIELL
GLEICHRICHTENDE
CHLORIDKANAELE
60
3.2.3.2.2.160-PS
KANAL
(CIC-B)
60
3.2.3.2.2.2
CHLORIDKANAL
MIT
SCHNELLER
KINETIK
UND
GROSSER
LEITFAEHIGKEIT
(CIC-E)
62
3.2.3.2.2.2.1
STROM-SPANNUNGSKENNLINIE
DES
CIC-E
64
3.2.3.2.2.2.2
LONENSELEKTIVITAET
DES
CIC-E
65
3.2.3.2.2.2.3
AKTIVITAET
DES
CIC-E
AM
RUHEPOTENTIAL
69
3.2.3.2.2.2.4
KINETIK
DES
CIC-E
70
3.23.2.2.2.5
WIRKUNG
VON
IAA-94
AUF
DEN
CIC-E
72
3.2.3.2.2.2.6
WIRKUNG
VON
9-AC
AUF
DEN
CIC-E
73
3.2.3.2.2.3
LEITFAEHIGKEITEN
DER
PARTIELL
GLEICHRICHTENDEN
CHLORIDKANAELE
75
3.23.2.3
CHLORIDKANAELE
IN
REKONSTITUIERTEN
VESIKELN
76
3.233
CHLORIDKANAELE
DER
SR-FRAKTION
IN
LIPIDVESIKELN
78
3.2.4.
CHLORIDKANALAKTIVITAETEN
IM
WILDTYP,
ADR-MUTANTE
79
UND
TOCAINIDBEHANDELTER
ADR-MUTANTE
DER
MAUS
3.2.5
CHLORIDSTROEME
IN
MYOBAELLEN
83
3.2.5.1
EINZELNE
CHLORIDKANAELE
IN
MYOBAELLEN
83
3.2.5.2
WHOLE-CELL-CHLORIDSTROEME
85
4.
DISKUSSION
4.1
MODELLE
FUER
MYOTONES
VERHALTEN
VON
MUSKELZELLEN
88
4.2
KALIUMKANAELE
91
4.2.1
"DELAYED
RECTIFYING"
KALIUMKANAELE
91
4.2.2
CA^+AKTIVIERTE
KALIUMKANAELE
92
4.3
CHLORIDKANAELE
93
4.3.1
CHLORIDKANAELE
IN
NATIVEN
MEMBRANEN
93
.
4.3.2
CHLORIDKANAELE
IN
SL/LIPIDVESIKELN
95
4.4
AUSBLICK
99
5.
LITERATUR
100
6.
LISTE
DER
VERWENDETEN
ABKUERZUNGEN
114 |
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