Neue molekulare Konzepte zur Senkung der Transplantatabstoßung: Grundlage und klinische Bedeutung löslicher MHC-Klasse-I-Moleküle und postmortale Gewebetypisierung
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| Format: | Book |
| Language: | German |
| Published: |
Lengerich u.a.
Pabst
1994
|
| Series: | Beiträge zur Transplantationsmedizin
18 |
| Subjects: | |
| Online Access: | Inhaltsverzeichnis |
| Item Description: | Zugl: Kiel, Univ., Habil.-Schr., 1992 |
| Physical Description: | 122 S. Ill., graph. Darst. |
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INHALTSVERZEICHNIS
I.
EINLEITUNG
.
11
1.
CHARAKTERISIERUNG
VON
LOESLICHEN
MHC-KLASSE-I-ANTIGENEN
UND
IHRE
INTERAKTION
MIT
ALLOREAKTIVEN
CTL
.
11
2.
POSTMORTALE
GEWEBETYPISIERUNG
.
13
II.
FRAGESTELLUNG
.
15
1.
CHARAKTERISIERUNG
VON
LOESLICHEN
MHC-KLASSE-I-MOLEKUELEN
UND
IHRE
INTERAKTION
MIT
ALLOREAKTIVEN
CTL
.
15
1.1.
BIOCHEMISCHE
ISOLIERUNG
UND
ANALYSE
DER
LOESLICHEN
HLA-ANTIGENE
AUS
MENSCHLICHEM
SERUM,
SCHWEISS
UND
SOLUBILISIERTEN
ZELL-LYSATEN.
15
1.2.
ISOLIERUNG
UND
BIOCHEMISCHE
ANALYSE
VON
HLA-SPALTPRODUKTEN
.
16
2.
POSTMORTALE
GEWEBETYPISIERUNG
.
16
III.
METHODEN
UND
MATERIAL
.
17
1.
GEWINNUNG
VON
MENSCHLICHEM
SERUM
UND
SCHWEISS
.
17
2.
ZELLEN
.
17
2.1.
TUMORZELL-LINIEN
.
17
2.2.
PERIPHERE
BLUTLYMPHOZYTEN
(PBL)
.
17
2.3.
EBV-TRANSFORMIERTE
MILZZELLEN
.
18
3.
MONOKLONALE
ANTIKOERPER
.
18
3.1.
HYBRIDOM-KULTUREN
.
18
3.2.
REINIGUNG
VON
ANTIKOERPERN
.
18
3.3.
BESTIMMUNG
DER
KONZENTRATION
UND
DER
BIOLOGISCHEN
AKTIVITAET
DER
ANTIKOERPER
.
20
3.4.
FLUORESCEINISOTHIOCYANAT-KOPPLUNG
.
20
4.
LOESLICHE
HLA-KLASSE-I-MOLEKUELE
.
21
4.1.
PRAEPARATION
VON
HLA-KLASSE-I-MOLEKIILEN
.
21
4.2.
HERSTELLUNG
VON
HLA-SPALTPRODUKTEN
.
21
4.3.
IMMUNOPRAEZIPITATION
VON
LOESLICHEN
HLA-MOLEKUELEN
.
23
4.4.
HISTOLOGIE
UND
IMMUNHISTOLOGIE
.
23
5.
SDS-PAGE-ANALYSE
UND
WESTEM-BLOTTING
.
23
5.1.
SDS-PAGE
.
23
5.2.
WESTERN-BLOTTING
.
25
5.3.
2-DIMENSIONALE
ANALYSE
VON
GEREINIGTEN
HLA-MOLEKUELEN
.
25
6.
QUANTITATIVE
HLA-KLASSE-I-BESTIMMUNG
.
26
6.1.
INDIREKTER
KOMPETITIVER
ELISA
.
26
6.2.
DIREKTER
ELISA
ZUR
BESTIMMUNG
SPENDERSPEZIFISCHER
ANTIGENE
.
27
6.3.
ZYTOTOXIZITAETSTEST
.
27
6.4.
KINETIK
DER
LOESLICHEN
HLA-EXPRESSION
KULTIVIERTER
TUMOR-ZELL-LINIEN
.
27
7.
UNTERSUCHUNGEN
DER
INTERAKTION
VON
ALLOREAKTIVEN
ZYTOTOXISCHEN
T-LYMPHOZYTEN
(CTL)
MIT
LOESLICHEN
HLA-KLASSE-I-MOLEKUELEN
UND
MONOKLONALEN
ANTIKOERPERN
.
28
7.1.
HERSTELLUNG
VON
ALLOREAKTIVEN
T-ZELLEN
.
28
7.2.
UNTERSUCHUNG
DER
ZYTOTOXIZITAET
DER
CTL
.
29
7.3.
CHARAKTERISIERUNG
DURCH
ANALYSE
DER
CTL-ZELLMARKER
IM
FLUORESCENCE
ACTIVATED
CELL
SORTER
(FACS)
.
30
7.4.
BLOCKIERUNG
VON
CTL
UND
TARGETZELLEN
MIT
MONOKLONALEN
ANTIKOERPERN
.
30
7.5.
INTERAKTION
VON
CTL
MIT
LOESLICHEN
KLASSE-I-MOLEKUELEN
UND
HLA-SPALTPRODUKTEN
.
30
7.6.
MESSUNG
DER
CTL-AKTIVIERUNG
.
31
8.
POSTMORTALE
GEWEBETYPISIERUNG
.
32
8.1.
PRAEPARATION
UND
KULTIVIERUNG
VON
RETINALEN
PIGMENTEPITHELZELLEN
(RPE)
.
32
8.2.
STIMULATION
DER
KULTIVIERTEN
RPE
UND
INDIREKTE
IMMUNFLUORESZENZ
.
32
8.3.
IMMUNHISTOCHEMISCHE
UNTERSUCHUNGEN
.
33
8.4.
RASTERELEKTRONENMIKROSKOPISCHE
UNTERSUCHUNG
.
33
6
8.5.
SEROLOGISCHE
TYPISIERUNG
DER
RETINALEN
PIGMENTEPITHELZELLEN
.
34
8.6.
BIOCHEMISCHE
TYPISIERUNG
MITTELS
ID-ISOELEKTRISCHER
FOKUSSIERUNG
(IEF)
.
34
IV.
ERGEBNISSE
.
36
1.
BIOCHEMISCHE
CHARAKTERISIERUNG
VON
SERUM-HLA-KLASSE-I-MOLEKUELEN
UND
HLA-SPALTPRODUKTEN
.
36
1.1.
SDS-PAGE
ANALYSE
UND
WESTERN
BLOTTING
DER
GEREINIGTEN
HLA-MOLEKUELE
UND
HLA-SPALTPRODUKTE
.
36
1.2.
ANALYSE
DER
HLA-MOLEKUELE
DURCH
DIE
2-DIMENSIONALE
TRENNUNG
.
38
1.3.
BIOCHEMISCHE
ANALYSE
DER
HLA-MOLEKUELE
AUS
DEM
SCHWEISS
.
40
2.
HLA-KLASSE-I-KONZENTRATIONEN
IM
SERUM
.
42
2.1.
QUANTITATIVER
ENZYM
LINKED
IMMUNO
SORBENT
ASSAY
(ELISA)
.
42
2.2.
SERUM
HLA-KONZENTRATIONEN
BEI
GESUNDEN
.
43
2.3.
ABGABE
VON
LOESLICHEN
HLA
DURCH
KULTIVIERTE
TUEMOR-ZELL-LINIEN
.
45
2.4.
EXPRESSION
VON
SERUM-HLA
BEI
TRANSPLANTATEMPFAENGERN
.
46
3.
WIRKUNG
LOESLICHER
HLA-KLASSE-I-MOLEKUELE
AUF
ALLOREAKTIVE
CTL
.
53
3.1.
CHARAKTERISIERUNG
DER
ZYTOTOXISCHEN
T-LYMPHOZYTEN.
53
3.2.
CHARAKTERISTISCHE
ZELLMARKER
DER
CTL
.
57
3.3.
BLOCKIERUNG
DER
CTL
DURCH
MONOKLONALE
ANTIKOERPER
.
62
3.4.
INHIBITION
DER
ZYTOTOXIZITAET
DURCH
INTAKTE
HLA-KLASSE-I-MOLEKUELE
.
64
3.5.
CTL-INHIBITION
DURCH
HLA-SPALTPRODUKTE.
68
4.
WIRKUNG
IMMOBILISIERTER
HLA-KLASSE-I-MOLEKUELE
AUF
ALLOREAKTIVE
CTL
.
69
4.1.
AKTIVIERUNG
DURCH
INTAKTE
HLA-MOLEKUELE
.
69
4.2.
AKTIVIERUNG
DER
CTL
DURCH
INTAKTE
HLA-KLASSE-I-SPALTPRODUKTE
.
69
5.
CTL-AKTIVIERUNG
DURCH
MONOKLONALE
ANTIKOERPER.
71
5.1.
AKTIVIERUNG
DURCH
IMMOBILISIERTE
ANTIKOERPER
.
71
5.2.
AKTIVIERUNG
DURCH
LOESLICHEN
OKT3
.
71
6.
HEMMUNG
DER
CTL-AKTIVIERUNG
.
73
6.1.
HEMMUNG
DURCH
LOESLICHE
HLA
.
73
6.2.
HEMMUNG
DURCH
LOESLICHEN
OKT3
.
73
7
7.
POSTMORTALE
GEWEBETYPISIERUNG
.
74
7.1.
ZELLKULTUR
UND
MORPHOLOGIE
DER
RPE-ZELLEN
.
74
7.2.
DARSTELLUNG
DER
MHC-EXPRESSION
AUF
RPE-ZELLEN
.
79
7.3.
GEWEBETYPISIERUNG
AN
RPE-ZELLEN
.
84
V.
DISKUSSION
.
87
1.
BIOCHEMIE
DER
SERUM-HLA-KLASSE-I-MOIEKUELE.
87
2.
LOESLICHE
HLA-KONZENTRATIONEN
BEI
GESUNDEN
.
89
3.
HLA-KONZENTRATIONEN
UND
HLA-ANTIKOERPER
BEI
ORGANEMPFANGERN
.
91
4.
ALLOREAKTIVE
ZYTOTOXISCHE
T-ZELLEN
.
94
5.
INHIBITION
DER
CTL-FUNKTION
DURCH
LOESLICHE
HLA-KLASSE-I-
MOLEKUELE
.
96
6.
INHIBITION
DER
CTL-FUNKTION
DURCH
MONOKLONALE
ANTIKOERPER
.
98
7.
CTL-AKTIVIERUNG
.
99
8.
POSTMORTALE
GEWEBETYPISIERUNG
.
100
8.1.
RPE
ZELLKULTUR
.
100
8.2.
SEROLOGISCHE
UND
BIOCHEMISCHE
GEWEBETYPISIERUNG
.
101
VI.
ZUSAMMENFASSUNG
.
103
SUMMARY
.
107
VII.
LITERATURVERZEICHNIS
.
110
8 |
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