UDP-Galactose: Ceramid-Galactosyltransferase des Nervensystems: Reinigung, biochemische und molekularbiologische Charakterisierung
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A.
EINLEITUNG
.
1
1.1.
DAS
MYELIN
.
1
1.2.
GLYKOSPHINGOLIPIDE
.
4
1.3
DIE
BIOSYNTHESE
VON
GALACTOSYLCERAMID
.
6
1.4
DIE
UDP-GALACTOSE:
CERAMID-GALACTOSYLTRANSFERASE
(EC
2.4.1.45)
.
9
B.
PROBLEMSTELLUNG
.
12
C.
ERGEBNISSE
.
13
1.
CHEMISCHE
SYNTHESEN
.
13
1.1
DARSTELLUNG
VON
CERAMID
UND
SPHINGOSIN
AUS
CEREBROSID
.
13
1.2
SYNTHESE
KURZKETTIGER
N-2-HYDROXYACYLSPHINGOSINE
.
15
1.3
PEPTIDSYNTHESE
.
17
2.
REINIGUNG
DER
UDP-GALACTOSE:
CERAMID
GALACTOSYLTRANSFERASE
AUS
RATTENGEHIRN
20
2.1
BESTIMMUNG
DER
UDP-GALACTOSE:
CERAMID
GALACTOSYLTRANSFERASE
AKTIVITAET
.
23
2.2
MEMBRANPRAEPARATION
UND
SOLUBILISIERUNG
DES
ENZYMS
.
24
2.3
CHROMATOGRAPHIE
AN
DIETHYLAMINOCELLULOSE
(DE-52)
.
25
2.4
CHROMATOGRAPHIE
AN
CIBACRON-BHIE
SEPHAROSE
.
25
2.5
CHROMATOGRAPHIE
AN
LENTIL
LEKTIN
SEPHAROSE
.
27
3.
CHARAKTERISIERUNG
DES
UDP-GALACTOSE:
CMUNID
GALACTOSYL-TRANSFERASE
PROTEINS.
31
3.1
DEGLYKOSYLIERUNG
MIT
ENDOGLYKOSIDASE
F
.
33
3.2
BESTIMMUNG
DER
ZUCKERSTRUKTUR
.
35
3.3
BESTIMMUNG
VON
PEPTIDSEQUENZEN
.
38
4.
MOLEKULARBIOLOGISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DER
UDP
GALACTOSE:
CERAMID-GALACTOSYLTRANSFERASE
.
42
4.1
IDENTIFIZIERUNG
EINES
PARTIELLEN
CDNA
FRAGMENTS
DER
UDP-GALACTOSE:
CERAMID-GALACTOSYLTRANSFERASE
MIT
HILFE
DER
PCR
TECHNIK
.
42
4.2
DIE
VOLLSTAENDIGE
CDNA
DER
UDP-GALACTOSE:
CERAMID
GALACTOSYLTRANSFERASE
.
45
4.3
HOMOLOGIEVERGLEICH
.
48
4.4
NORTHEM-BLOT
ANALYSEN
.
49
4.5
IN
SITU
HYBRIDISIERUNG
.
52
5.
IDENTIFIZIERUNG
EINES
GLUTAMAT/ASPARTAT
TRANSPORTERPROTEINS
.
55
5.1
KLONIERUNG
DER
CDNA
.
55
5.3
HOMOLOGIEVERGLEICH
.
59
5.4
NORTHEM-BLOT
ANALYSEN
.
60
5.5
IN
SITU
HYBRIDISIERUNG
.
61
6.
CHARAKTERISIERUNG
DES
GLUTAMAT/ASPARTAT
TRANSPORTERPROTEINS
.
63
6.1
VERSUCHE
ZUR
REKONSTITUTION
DES
GLUTAMAT/ASPARTAT
TRANSPORTERS
.
63
6.2
IMMUNOLOGISCHE
UNTERSUCHUNGEN
.
64
6.3
REINIGUNG
DER
HOEHERMOLEKULAREN
FORM
.
67
6.4
UNTERSUCHUNG
DER
ZUCKERSTRUKTUR
.
69
6.5
DIE
VERSCHIEDENEN
FORMEN
DES
GLUTAMAT/ASPARTAT
TRANSPORTERS
(GLAST)
.
72
D.
ANHANG
.
74
E.
ZUSAMMENFASSUNG
.
79
F.
DISKUSSION
.
80
G.
METHODENTEIL
.
86
H.
LITERATUR
.
105 |
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