Untersuchungen zur Markierung und Identifizierung des Blaulichtphotorezeptorsystems von Fusarium aquaeductuum und Neurospora crassa:
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| adam_text | 3 UNTERSUCHUNGEN ZUR MARKIERUNG UND IDENTIFIZIERUNG DES
BLAULICHTPHOTOREZEPTORSVSTEMS VON FUSARIUM AAUAEDUCTUUM UND NEUROSNORA
CRASSA INAUGURAL-DISSERTATION ZUR ERLANGUNG DES DOKTORGRADES DES
FACHBEREICHS BIOLOGIE DER LUDWIG-MAXI MILIANS-UNIVERSITAET MUENCHEN
VORGELEGT VON DIPLOM-BIOLOGE HANS HUEBSCHMANN JUNI 1993 -
INHALTSVERZEICHNIS - SEITE: I. EINLEITUNG 1 N. MATERIAL UND ALLGEMEINE
METHODEN 8 N.L. PILZMATERIAL UND ANZUCHTBEDINGUNGEN 8 A. NEUROSPORA
CRASSA B. FUSARIUM AQUAEDUAUUM UE.2. INDUKTION DER CAROTINOIDSYNTHESE BEI
NEUROSPORA 9 N.2.1. BELICHTUNGSBEDINGUNGEN 9 UE.2.2. BESTIMMUNG DES
CAROTINOIDGEHALTS 10 UE.3. NACHWEIS VON PROTEINEN IN ELEKTROPHORESEGELEN
10 H.3.1. FAERBUNG DER IEF GELE 10 H.3.2. FAERBUNG DER 2-D
POLYACRYLAMIDGELE MIT VIOLETT 17 11 UE.3.2.1. DOKUMENTATION UND
AUSWERTUNG DER 2-D GELE 12 UE.3.2.2. FLUOROGRAPHIE GEFAERBTER 2-D GELE 14
N.3.2.3. VORTEILE DER VIOLETT 17 FAERBUNG 15 H.3.3. AUTORADIOGRAPHIE DER
2-D GELE 16 11.4. PI-BESTIMMUNG MITTELS CARBAMYLYTEN UND PH-MESSUNG 17
11.5. MOLEKULARGEWICHTSBESTIMMUNG IN SDS-GELEN 17 UE.6.
RADIOAKTIVITAETSBESTIMMUNG MITTELS SZINTILLATIONS-SPEKTROMETRIE 17
11.6.1. EINFLUSS UNTERSCHIEDLICHER PROTEINKONZENTRATIONEN 17 11.6.2.
MESSUNG DER AKTIVITAETEN 18 UE.7. PROTEINBESTIMMUNG 18 M.
FARBMARIUEERUNGSEXPERIMENTE AN FUSARIUM AQUAEDUAUUM 19 III. 1. GEWINNUNG
DER PROTEINFRAKTIONEN 19 IN. 1.1. HERSTELLUNG DES ROHHOMOGENATS 19
NI.1.2. DIFFERENTIELLE ZENTRIFUGATION 20 IN. 1.3. SOLUBILISIERUNG UND
SOLUBILISIERUNGSRATE 21 HI.2. AUFTRENNUNG DER PROTEINFRAKTION DURCH
GELFILTRATION 21 III.2.2. MOLEKULARGEWICHTSBESTIMMUNG 22 NI.2.3.
KONZENTRIERUNG UND AUFTRENNUNG DER MEMBRANPROTEINFRAKTION 24 III.2.4.
KONZENTRIERUNG UND AUFTRENNUNG DER LOESLICHEN PROTEINFRAKTION 25 HI.3.
VORAUSWAHL UND BEDINGUNGEN FUER FARBSTOFFE 25 NI.3.1. PHOTOMETRISCHE
DETEKTION UND AUSWEITUNGSMODUS 27 III.3.2. UEBERPRUEFUNG DES
PHOTOMETRISCHEN NACHWEISES 28 111.4. FARBMARKIENINGSEXPERIMENTE 31
111.4.1. ERGEBNISSE BEI DEN MEMBRANPROTEINEN 31 111.4.2. ERGEBNISSE BEI
DEN LOESLICHEN PROTEINEN 32 111.5. DISKUSSION DER
FARBMARKIENINGSEXPERIMENTE 33 - II - IV. VORVERSUCHE ZUR U
C-RIBOFLAVINMARKIERUNG 36 IV. 1. UNTERSUCHUNGEN ZUM L4
C-RIBOFLAVIN-EINBAU BEI DEN EINZELNEN 36 STAEMMEN VON NEUROSPORA UN D BEI
FUSARIUM IV. 1.1. ERGEBNISSE ZUM M C-RIBOFLAVIN-EINBAU 36 A. NEUROSPORA
CRASSA B. FUSARIUM AQUAEDUAUUM IV.2. VERSUCHE ZUM RIBOFLAVINBEDARF DER
MUTANTE RIB-2 VON 37 NEUROSPORA CRASSA TV.2. 1. RIBOFLAVINBEDARF IN
BEZUG AUF DAS WACHSTUM 37 IV.2.2. RIBOFLAVINBEDARF IN BEZUG AUF DIE
CAROTINOIDSYNTHESE 39 IV.3. DISKUSSION DER ERGEBNISSE ZUM
RIBOFLAVINBEDARF 41 V. AUSARBEITUNG GEEIGNETER METHODEN ZUR
HOCHAUFLOESENDEN 43 TRENNUNG DER PROTEINE VON NEUROSPORA CRASSA V.L.
NATIVE PROTEINTRENNUNGEN 43 V. 1.1. ERMITTLUNG DER OPTIMALEN BEDINGUNGEN
FUER EINE NATIVE 43 ISOELEKTRISCHE FOKUSSIERUNG V. 1.1.1. ABWANDLUNGEN
BEI DER PROBENVORBEREITUNG 43 V. 1.1.2. OPTIMIERUNGEN BEI DER
FOKUSSIERUNG 45 V.1.2. OPTIMIERUNGEN BEI DER NATIVEN 2-D PAGE 48 V.L.3.
ERGEBNISSE DER NATIVEN 2-D AUFTRENNUNGEN 50 V.1.4.
SAEULENCHROMATOGRAPHISCHE TRENNUNG 14 C-MARKIERTER PROTEINE 52 DER
RIB-2-MUTANTE V.2. DENATURIERENDE PROTEINTRENNUNGEN 54 V.2.1.
VORVERSUCHE, METHODEN UND OPTIMIERUNGEN 54 V.2.1.1. UEBERPRUEFUNG DER
STABILITAET DER BINDUNG RIBOFLAVIN/PROTEIN 54 V.2.1.2. PROBENVORBEREITUNG
FUER DIE IEF 58 V.2.1.3. ISOELEKTRISCHE FOKUSSIERUNG 59 V.2.1.4.
AEQUILIBRIERUNG DER FOKUSSIERGELE 60 V.2.1.5. SDS-PAGE 60 V.2.2.
VERGLEICH DER PROTEINMUSTER DER VERSCHIEDENEN STAEMME 62 VON NEUROSPORA
NACH 2-D ELEKTROPHORESE V.2.3. VERGLEICH DER PROTEINMUSTER DER
RIB-2-MUTANTE 64 UNTER VERAENDERTEN ANZUCHTBEDINGUNGEN V.2.3.1.
VERAENDERUNGEN DES PROTEINMUSTERS DER RIB-2-MUTANTE 64 WAEHREND DER
KOMPETENZENTSTEHUNG V.2.3.2. VERAENDERUNGEN DES PROTEINMUSTERS DER
RIB-2-MUTANTE 67 BEI DER AKKOMODATION VI. 14 C-RIBOF1AVINMARKIERUNG DER
FLAVOPROTEINE VON NEUROSPORA CRASSA 69 VI. 1. VERSUCHE UND ERGEBNISSE
ZUM NATIVEN 2-D FLAVOPROTEINMUSTER 69 DER RIB-2-MUTANTE VI.2. DAS
FLAVOPROTEINMUSTER DER RIB-2-MUTANTE NACH DENATURIERENDER 71 2-D
ELEKTROPHORESE VI.2.1. KURZEITEFFEKTE NACH BLAUBELICHTUNG 71 A. IN DER
MEMBRANPROTEINFRAKTION B. IN DER LOESLICHEN FRAKTION - III - VI.2.2.
VERSUCHE ZUM RIBOFLAVINBEDARF 75 VI.2.3. VERSUCHE ZUR
KOMPETENZENTSTEHUNG 76 VL.2.4. VERSUCHE ZUR AKKOMODATION 77 V1.3. DAS
FLAVOPROTEINMUSTER DES WILDSTAMMS UND DER BEIDEN MUTANTEN 77 WC-1 UND
WC-2 NACH DENATURIERENDER 2-D ELEKTROPHORESE V1.4. VERSUCHE ZUR
CHARAKTERISIERUNG EINES MOEGLICHEN 79 CRYPTOCHROM-KANDIDATEN VI.4.1.
VERSUCHE ZUM NACHWEIS DES FLAVINCHARAKTERS 79 VL4.2.1. FLUOROGRAPHISCHER
NACHWEIS IM GEL 79 VI.4.2.2. FLUOROGRAPHISCHER NACHWEIS NACH
GELFILTRATION 80 VI.4.2. PL-WERT UND MOLEKULARGEWICHT 82 VI.4.3.
AUSSCHLUSS DER NITRATREDUKTASE 83 VI.5. DISKUSSION DER
MARKIERUNGSEXPERIMENTE MIT U C-RIBOFIAVIN 84 VE. ZUSAMMENFASSUNG 89 VM.
LITERATURVERZEICHNIS 92
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