Intron-kodierte Polypeptide aus Chloroplasten und Mitochondrien:
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|---|---|
| Format: | Thesis Book |
| Language: | German |
| Published: |
Berlin u.a.
Cramer
1993
|
| Series: | Bibliotheca mycologica
152 |
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| Physical Description: | 132 S. Ill., graph. Darst. |
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INTRON-KODIERTE
POLYPEPTIDE
AUS
CHLOROPLASTEN
UND
MITOCHONDRIEN
INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
I.
EINFUEHRUNG
1
1.
EINLEITUNG
1
2.
INTRON-KODIERTE
MATURASEN
SIND
WICHTIGE
KO-FAKTOREN
BEIM
RNA-SPLEISSEN
2
3.
INTRON-KODIERTE
ENDONUKLEASEN
VERURSACHEN
DIE
MOBILITAET
IHRES
EIGENEN
INTRONS
5
3.1
DAS
OMEGA
SYSTEM
5
3.2
INTRON-MOBILITAET
IST
EIN
MERKMAL
VIELER
GRUPPE
I
INTRONEN
6
3.3
DAS
INITIATIONSEREIGNIS
FUER
DEN
INTRON-TRANSFER
IST
EIN
DOPPELSTRANG-BRUCH
9
4.
INTRON-KODIERTE
POLYPEPTIDE
AUS
GRUPPE
II
INTRONEN
WEISEN
SEQUENZAEHNLICHKEITEN
ZU
REVERSEN
TRANSKRIPTASEN
AUF
11
4.1
MUTMASSLICHE
INTRON-KODIERTE
REVERSE
TRANSKRIPTASEN
VERURSACHEN
DIE
TRANSPOSITION
ODER
DELETION
VON
INTRONEN
13
4.2
REVERSE
TRANSKRIPTASE
KODIERENDE
INTRONEN
KOENNEN
ALS
FREI
REPLIZIERENDE
PLASMIDE
EXISTIEREN
14
5.
HYPOTHESEN
UEBER
DEN
EVOLUTIONAEREN
URSPRUNG
INTRON-KODIERTER
POLYPEPTIDE
17
5.1
MOBILE
GENETISCHE
ELEMENTE
SIND
DIE
VORFAHREN
VON
INTRONEN
17
5.2
PRAEEXISTIERENDE
INTRONEN
HABEN
OFFENE
LESERAHMEN
AUFGENOMMEN
19
5.2.1
DIE
EVOLUTION
STRUKTURELLER
UND
KODIERENDER
INTRON-REGIONEN
ERFOLGTE
UNABHAENGIG
VONEINANDER
19
5.2.2
ENDONUKLEASE
UND
REVERSE
TRANSKRIPTASE-LESERAHMEN
KOMMEN
AUCH
AUSSERHALB
VON
INTRONEN
VOR
20
5.2.3
INTRON-KODIERTE
ENDONUKLEASEN
UND
REVERSE
TRANSKRIPTASEN
HABEN
SICH
SEKUNDAER
ZU
MATURASEN
ENTWICKELT
22
6.
ZUSAMMENFASSUNG
UND
AUSBLICK
23
II.
PROBLEMSTELLUNG
24
DI.
MATERIAL
UND
METHODEN
28
1.
MATERIAL
28
1.1
STAEMME
28
1.2
NAEHRMEDIEN
28
1.3
CHEMIKALIEN
29
1.4
ENZYME
29
1.5
HAEUFIG
VERWENDETE
PUFFER
30
1.6
PLASMIDE
30
1.7
OLIGONUKLEOTIDE
32
2.
METHODEN
33
2.1
KULTURBEDINGUNGEN
33
2.2
ISOLIERUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
33
2.3
GELELEKTROPHORESE
34
2.4
TRANSFORMATIONEN
34
2.5
SOUTHEM-BLOTS
UND
DNA-DNA-HYBRIDISIERUNGEN
34
2.6
NORTHEM-BLOTS
UND
RNA-DNA
HYBRIDISIERUNGEN
34
2.7
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
DNA
35
2.8
POLYMERASE-KETTEN-REAKTION
-
PCR
35
2.9
IN
VITRO
REKOMBINATION
VON
DNA
35
2.9.1
KLONIERUNG
IN
PLASMIDE
35
2.9.2
KLONIERUNG
VON
PCR-FRAGMENTEN
IN
EXPRESSIONS-VEKTOREN
35
2.10
OLIGONUKLEOTIDSYNTHESE
35
2.11
DNA-SEQUENZIERUNG
35
2.12
GEN-UEBEREXPRESSION
IN
ESCHERICHIA
COLI
35
2.13
IN
VIVO
TEST
ZUR
UEBERPRUEFUNG
DER
ENDONUKLEASE-AKTIVITAET
INTRON-KODIERTER
POLYPEPTIDE
36
2.14
IN
VITRO
TRANSKRIPTION
36
2.15
IN
VITRO
TRANSLATION
36
2.16
IN
V/RRO-UEBERPRUEFUNG
VON
ENDONUKLEASE-AKTIVITAET
37
2.17
HETEROLOGE
GENEXPRESSION
IN
S.
CEREVISIAE
37
2.17.1
METHODISCHE
GRUNDLAGEN
ZUR
HETEROLOGEN
GENEXPRESSION
MIT
DEM
TY-SYSTEM
37
2.17.2
AUFREINIGUNG
VON
TY
VIRUS-AEHNLICHEN
PARTIKELN
(TYVLPS)
AUS
S.
CEREVISIAE
38
2.18
IDENTIFIZIERUNG
VON
PROTEINEN
DURCH
REAKTION
MIT
SPEZIFISCHEN
ANTIKOERPERN
39
2.19
REVERSE
TRANSKRIPTASE-MESSUNG
39
2.20
GELTEST
ZUR
DARSTELLUNG
DER
REVERSE
TRANSKRIPTASE-AKTIVITAET
39
2.21
SICHERHEITSMASSNAHMEN
39
IV.
ERGEBNISSE
40
A.
EXPRESSIONS
UND
FUNKTIONSANALYSEN
INTRON-KODIERTER
ENDONUKLEASEN
40
1.
NACHWEIS
DER
HETEROLOGEN
EXPRESSION
DES
INTRON-KODIERTEN
POLYPEPTIDS
AUS
CHLAMYDOMONAS
SMITHII
IN
E.
COLI
40
1.1
KONSTRUKTION
REKOMBINANTER
PT7-7
PLASMIDE
ZUR
UEBEREXPRESSION
DER
INTRON-KODIERTEN
ENDONUKLEASE
IN
E.
COLI
40
1.2
SPEZIFISCHE
PROTEIN-MARKIERUNG
42
2.
FUNKTIONSANALYSE
DES
INTRON-KODIERTEN
PROTEINS
AUS
DEM
MITOCHONDRIALEN
COB-GEN
VON
C.
SMITHII
43
2.1
KLONIERUNG
DER
ERKENNUNGSSEQUENZ
FUER
DIE
MUTMASSLICHE
INTRON-KODIERTE
ENDONUKLEASE
IN
DEN
VEKTOR
PGPL-2
44
2.2
EXPRESSION
DES
INTRON-KODIERTEN
PROTEINS
MIT
DEM
TABOR-SYSTEM
IN
ANWESENHEIT
DER
ERKENNUNGSSEQUENZ
44
2.3
FUNKTIONSANALYSE
DES
IN
VITRO
TRANSLATIERTEN
INTRON-KODIERTEN
PROTEINS
AUS
C.
SMITHII
46
2.3.1
IN
VITRO
TRANSLATION
DES
INTRON-KODIERTEN
POLYPEPTIDS
46
2.3.2
UEBERPRUEFUNG
DER
ENDONUKLEASE-AKTIVITAET
DER
IN
VITRO
TRANSLATIERTEN
INTRON-KODIERTEN
PROTEINE
47
2.4
EXPRESSION
DER
INTRON-KODIERTEN
ENDONUKLEASE
AUS
C.
SMITHII
UNTER
DER
TRANSKRIPTIONELLEN
KONTROLLE
DES
ZRC-PROMOTORS
49
2.5
IN
VIVO
NACHWEIS
DER
ENDONUKLEASE-AKTIVITAET
DES
INTRON-KODIERTEN
POLYPEPTIDS
AUS
C.
SMITHII
IN
E.
COLI
49
3.
ENDONUKLEASE-AKTIVITAET
DES
INTRON-KODIERTEN
POLYPEPTIDS
AUS
DEM
PLASTIDAEREN
Z,5I7RRAT4-INTRON
VON
C.
REINHARDTII
52
3.1
NACHWEIS
DER
ENDONUKLEASE-AKTIVITAET
VON
1-CREL
NACH
EXPRESSION
UNTER
DER
KONTROLLE
DES
TRC-PROMOTORS
52
3.2
DIE
AKTIVITAET
VON
1-CREL
KANN
DURCH
EXPRESSION
MIT
DEM
PUHE-SYSTEM
GESTEIGERT
WERDEN
55
B.
EXPRESSIONS
UND
FUNKTIONSANALYSEN
INTRON-KODIERTER
REVERSER
TRANSKRIPTASEN
57
1.
VERBREITUNG
DES
PLASTIDAEREN
PERD-INTRON-LESERAHMENS
IN
DER
ALGENGATTUNG
SCENEDESMUS
57
2.
EIN
INTRON-KODIERTES
POLYPEPTID
KANN
MIT
DEM
TY-EXPRESSIONSSYSTEM
IN
S.
CEREVISIAE
HETEROLOG
EXPRIMIERT
WERDEN
58
2.1
KONSTRUKTION
DER
IN
DEN
EXPRESSIONSVERSUCHEN
EINGESETZTEN
VEKTOREN
58
2.2
TRANSKRIPTANALYSE
DES
FUSIONSGENS
AUS
DEM
TYA-GEN
UND
DEM
INTRON-KODIERTEN
POLYPEPTID
IN
S.
CEREVISIAE
60
2.3
EXPRESSION
DES
INTRON-KODIERTEN
PROTEINS
AUS
S.
OBLIQUUS
ALS
TYA-FUSIONSPROTEIN
IN
5.
CEREVISIAE
61
3.
HETEROLOGE
EXPRESSION
PUTATIVER
REVERSER
TRANSKRIPTASEN
MIT
DEM
TY-EXPRESSIONSSYSTEM
IN
S.
CEREVISIAE
62
3.1.
KLONIERUNG
DER
MUTMASSLICHEN
REVERSEN
TRANSKRIPTASEN
IN
DEN
HEFEEXPRESSIONSVEKTOR
PFM2IIBGLII
62
3.1.1
KONSTRUKTION
DES
PLASMIDS
PSOB148
63
3.1.2
KONSTRUKTION
DER
PLASMIDE
PCRB9
UND
PCRBL
I
63
3.1.3
KONSTRUKTION
DES
PLASMIDS
PPA405
64
3.2
HETEROLOGE
EXPRESSION
DER
VERSCHIEDENEN
MUTMASSLICHEN
REVERSEN
TRANSKRIPTASEN
IN
5.
CEREVISIAE
64
4.
FUNKTIONSANALYSE
DER
MUTMASSLICHEN
REVERSEN
TRANSKRIPTASEN
66
4.1
MESSUNG
DER
REVERSE
TRANSKRIPTASE-AKTIVITAET
DER
UEBEREXPRIMIERTEN
POLYPEPTIDE
66
4.2
BIOCHEMISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DER
REVERSE
TRANSKRIPTASE-AKTIVITAET
DES
INTRON-KODIERTEN
POLYPEPTIDS
AUS
PODOSPORA
ANSERINA
71
4.2.1
AKTIVITAET
DES
INTRON-KODIERTEN
ENZYMS
UNTER
EINFLUSS
VON
N-ETHYLMALEIMID
71
4.2.2
EFFEKT
VON
DIDESOXYTHYMIDIN
TRIPHOSPHAT
AUF
DIE
REVERSE
TRANSKRIPTASE-AKTIVITAET
DES
INTRON-KODIERTEN
PROTEINS
72
4.2.3
EINFLUSS
VON
APHIDICOLIN
AUF
DIE
POLYMERASE-AKTIVITAET
DES
INTRON-KODIERTEN
PROTEINS
74
V.
DISKUSSION
76
A.
HETEROLOGE
EXPRESSION
UND
FUNKTIONSANALYSEN
INTRON-KODIERTER
ENDONUKLEASEN
76
1.
ANALYSE
DES
INTRON-KODIERTEN
POLYPEPTIDS
AUS
DEM
MITOCHONDRIALEN
COB-GEN
VON
C.
SMITHII
77
1.1
DIE
INTRON-KODIERTE
ENDONUKLEASE
AUS
DEM
CHONDRIOM
VON
C.
SMITHII
KANN
IN
E.
COLI
HETEROLOG
UEBEREXPRIMIERT
WERDEN
78
1.2
DIE
EXPRESSION
DES
INTRON-KODIERTEN
PROTEINS
MIT
DEM
T7-RNA-POLYMERASE-PROMOTORSYSTEM
IST
FUER
E.
COLI-ZELLEN
LETAL,
WENN
SIE
DIE
ERKENNUNGSSEQUENZ
DER
MUTMASSLICHEN
ENDONUKLEASE
ENTHALTEN
79
1.3
DAS
IN
VITRO
TRANSLATIERTE
INTRON-KODIERTE
POLYPEPTID
AUS
C.
SMITHII
BESITZT
EINE
SCHWACHE
ENDONUKLEASE-AKTIVITAET
82
1.4
DIE
HETEROLOG
EXPRIMIERTE
ENDONUKLEASE
I-CSML
HYDROLYSIERT
IN
VIVO
DAS
INTRONFREIE
COB-GEN
AUS
C.
REINHARDTII
83
2.
ANALYSE
DER
INTRON-KODIERTEN
ENDONUKLEASE
I-CREL
AUS
DEM
'
PLASTIDAEREN
LSURRNA-GEN
VON
C.
REINHARDTII
87
2.1
DIE
AKTIVITAET
DER
IN
E.
COLI
UEBEREXPRIMIERTEN
ENDONUKLEASE
I-CREL
IST
ABHAENGIG
VOM
EXPRESSIONSSYSTEM
87
2.2
DIE
ERKENNUNGSSEQUENZ
VON
I-CREL
UMFASST
MAXIMAL
31
BP
89
B.
HETEROLOGE
EXPRESSION
UND
FUNKTIONSANALYSE
INTRON-KODIERTER
REVERSER
TRANSKRIPTASEN
92
1.
DER
RTASE-AEHNLICHE
LESERAHMEN
DES
PE/D-INTRONS
KOMMT
IN
FUENF
VERSCHIEDENEN
SCENEDESMUS
OBLIQUUS-S&MMEN
VOR
92
2.
DAS
TY-SYSTEM
DER
BAECKERHEFE
EIGNET
SICH
ZUR
HETEROLOGEN
EXPRESSION
INTRON-KODIERTER
REVERSER-TRANSKRIPTASEN
93
2.1
DAS
FUSIONSGEN
AUS
DEM
TYA-GEN
UND
DEM
INTRON-KODIERTEN
POLYPEPTID
DER
ALGE
S.
OBLIQUUS
WIRD
IN
S.
CEREVISIAE
TRANSKRIBIERT
UND
TRANSLATIERT
94
2.1.1
TRANSKRIPTANALYSE
VON
HEFETRANSFORMANTEN
95
2.1.2
IMMUNOLOGISCHER
NACHWEIS
DES
ALS
TYA-FUSIONSPROTEIN
UEBEREXPRIMIERTEN
INTRON-KODIERTEN
PROTEINS
AUS
S.
OBLIQUUS
96
2.2
HETROLOGE
EXPRESSION
VERSCHIEDENER
PUTATIVER
REVERSER
TRANSKRIPTASEN
MIT
DEM
TY-SYSTEM
97
3.
BESTIMMUNG
DER
POLYMERASE-AKTIVITAET
DER
HETEROLOG
EXPRIMIERTEN
PUTATIVEN
REVERSEN
TRANSKRIPTASEN
100
3.1
DAS
INTRON-KODIERTE
POLYPEPTID
AUS
PODOSPORA
ANSERINA
BESITZT
EINE
REVERSE
TRANSKRIPTASE-AKTIVITAET
101
3.2
MOEGLICHE
URSACHEN
FUER
DIE
INAKTIVITAET
DER
PUTATIVEN
REVERSEN
TRANSKRIPTASEN
AUS
S.
OBLIQUUS
UND
C.
REINHARDTII
102
3.3
DAS
INTRON-KODIERTE
PROTEIN
AUS
P.
ANSERINA
WEIST
CHARAKTERISTIKA
EINER
REVERSEN
TRANSKRIPTASE
AUF
105
3.3.1
DIE
AKTIVITAET
DER
PLDNA-KODIERTEN
REVERSEN
TRANSKRIPTASE
WIRD
DURCH
MN
2+
-IONEN
INHIBIERT
105
3.3.2
N-ETHYLMALEIMID
HAT
EINE
STARKE
INHIBIERENDE
WIRKUNG
AUF
DIE
POLYMERASE-AKTIVITAET
DES
INTRON-KODIERTEN
ENZYMS
106
3.3.3
DIE
AKTIVITAET
DER
INTRON-KODIERTEN
REVERSEN
TRANSKRIPTASE
WIRD
DURCH
DIDESOXYTHYMIDIN
TRIPHOSPHAT
GEHEMMT
107
3.3.4
DIE
REVERSE
TRANSKRIPTASE
AUS
P.
ANSERINA
IST
GEGEN
APHIDICHOLIN
RESISTENT
107
C.
MOEGLICHE
BIOLOGISCHE
BEDEUTUNG
INTRON-KODIERTER
ENDONUKLEASEN
UND
REVERSER
TRANSKRIPTASEN
IN
CHLOROPLASTEN
UND
MITOCHONDRIEN
108
VI.
ZUSAMMENFASSUNG
111
VH.
LITERATUR
113
VIII.
ANHANG |
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