Immunchemische Untersuchungen von membranassoziierten Antigenen aus menschlichen Fetalorganen, Plazenta und Tumoren: Biochemische Methoden u. Ergebnisse
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EITE
1 .
EINLEITUNG
9
2. ABKUERZUNGEN
1 2
3. MATERIAL
1 5
3.1
SUBSTANZEN UND REAGENZIEN
1 5
3.2.
ENZYME
16
3.3 DETERGENT IEN
16
3.4 . PUFFER
16
3.5. GERAETE
17
3.6.
ANTIKOERPER
18
3.7 .
ORGANGEWEBE
19
3.8.
TUMORGEWEBE
19
4 .
METHODEN
21
4.1.
BIOCHEMISCHE METHODEN (R. JACOB)
21
4.1.1
PLASMAMEMBRANFRAKTIONIERUNG
21
4.1.2
PROTEINBESTIMMUNGEN
23
4.1.3
ENZYMBESTIMMUNGEN
25
4 . 1 . 3 . 1
ALLGEMEINER TEIL
25
4.1.3.2
SPEZIELLER TEIL
25
4.1.3.2.1
ALKALISCHE PHOSPHATASE
26
4.1.3.2.2
ALANINAMINOPET P T IDASE
27
4 .1 . 3.2.3
4.1.4
GAMMAGLU TAMYLTRANSPEPT IDASE
SOLUBILISATION DER PLASMAMEMBRAN-
FRAKTIONEN
27
28
4.1 .4 .1 BEHANDLUNG MIT PROTEASEN
28
4.1 .4.1 .1
BEHANDLUNG MIT PAPAIN (E.C.3.4.4.
10) 28
4.1 .4 . 1 .2
BEHANDLUNG MIT BROMELAIN (E.C.3.4
.4 .24)29
4.1 .4.2
BEHANDLUNG MIT DETERGENTIEN
30
4
.1.4.2.1 BEHANDLUNG MIT TWEEN 20 30
4 .1 .4 .2 .2 BEHANDLUNG MIT TRITON-X 100 30
4.1.5 POLYACRYLAMID DISC ELEKTROPHORESE 31
4.2 IMMUNOLOGISCHE METHODEN (ST.GRUENWALD) 32
4.2.1 IMMUNISIERUNGEN 32
4.2.2 . IMMUNDOPPELDIFFUSION NACH OUCHTERLONY 33
4.2.3 ABSORPTION DER IMMUNSEREN GEGEN
SERUMPROTEINE 34
4.2.4 ABSORPTION DER ANTISEREN MIT H ILFE VON
PLASMA-SEPHAROSE IM BATCH-VERFAHREN 35
4.2.5 AMMONIUMSULFATFAELLUNG 36
4.2.6 QUANTITATIVE ELEKTROIMMUNDIFFUSION 36
4.2.6.1 EINDIMENSIONALE TECHNIK 36
4.2.6.2 ZWEIDIMENSIONALE TECHNIK 37
4 .2.6.3 TANDEM TECHNIK 38
4.2.7 IMMUNFLUORESZENZMIKROSKOPIE 38
4.2.8 ANFAERBUNG DER IMMUNPRAEZIP I T A TE 39
4.2.8.1 UENSPEZI F ISCHE PROTEINFAERBUNG 39
4.2.8.2 ENZYMSPEZIFISCHE FAERBUNGEN 40
4.2.8.2.1 ALANINAMINOPEPTIDASE 40
4.2.8.2.2 GAMMAGLUTAMYLTRANSPEPTIDASE 40
4 .2.8.2.3 ALKALISCHE PHOPHATASE 41
5. ERGEBNISSE 42
5.1 BIOCHEMISCHER TEIL (R. JACOB) 42
5.1.1 ISOLIERUNG VON PLASMAMEMBRANEN 42
5.1.2 LEITENZYME DER FETAL-LEBER PM 42
5.1.2.1 FETAL-LEBER PM NACH PROTEASENBEHANDLUNG42
5.1.2.1.1 BROMELAIN 43
5.1.2.1 .2 PAPAIN 44
S
.. 1 . 2.2
FETAL-LEBER PM NACH
DETERGENTIENBEHANDLUNG
44
5.1.2.2.1
TRITON-X-100
44
5.1.2.2.2 TWEEN 20
45
5.1.2.3 ABSOLUTE UND SPEZIFISCHE ENZYMAKTIVI-
TAET DER FETAL-LEBER PM (TABELLE)
45
5.1.3
LEITENZYME DER FETAL-NIERE PM
46
5.1.3.1
FETAL-NIEREN PM NACH PROTEASENBE-
HANDLUNG
46
5.1.3.1 .1
BROMELAIN
46
5.1.3.1 .2
PAPAIN
47
5.1.3.2
FETAL-NIEREN PM NACH DETERGENTIEN-
BEHANDLUNG
47
5.1 .3.2.1
TRITON-X-100
47
5.1.3.2.2 TWEEN-20
47A
5.1.3.3 ABSOLUTE UND SPEZIFISCHE ENZYMAKTIVI-
TAET DER FETAL-NIERE PM (TABELLE)
47A
5.1.4
LEITENZYME DER PM DES FETAL-DARMS
48
5.1 .4.1 FETAL-DARM PM NACH BEHANDLUNG MIT
DER PROTEASE PAPAIN
48
5.1.4.2
FETAL-DARM PM NACH BEHANDLUNG MIT
DER PROTEASE PAPAIN
48
5.1 .4.2
FETAL-DARM PM NACH BEHANDLUNG MIT
DEM DETERGENS TWEEN 20
48
5.1 .4.3
ABSOLUTE UND SPEZIFISCHE ENZYMAKTI-
VITAET DER FETAL-DARM PM (TABELLE)
49
5.1.5
LEITENZYME DER MATUREN PLAZENTA PM
24. - 30. WOCHE 50
5.1.5.1
PLAZENTA PM NACH PROTEASENBEHANDLUNG
50
5.1.5.1 .1
BROMELAIN
50
5.1.5.1 .2 PAPA IN
50
5.1.5.2
PLAZENTA PM NACH DETERGENTIEN-
BEHANDLUNG
51
5.1.5.2.1
TRITON-X-100
51
5
.1.5.2.2 TWEEN 20 51
5.1.5.3 ABSOLUTE UND SPEZIFISCHE EINZMYAKTI-
V ITAE T DER MATUREN PLAZENTA PM ( TABELLE) 52
5.1.6 PLASMAMEMBRANLEITENZYME DES RECTUM-
CARCINOM-POOL 53
5.1.6.1 REETUM-CARCINOM-POOL PM NACH BEHAND-
LUNG MIT PROTEASEN 53
5.1.6.1.1 BROMELAIN 53
5.1.6.1.2 PAPAIN 54
5.1.6.2 REETUM-CARCINOM-POOL PM NACH BEHAND-
LUNG MIT DETERGENTIEN 54
5.1.6.2.1 TRITON-X-100 54
5.1.6.3 ABSOLUTE UND SPEZIFISCHE ENZYMAKTIVI-
TAETEN DER RECTUM-CARCINOM-POOL PM
(TABELLE) 55
5.1.7 ENZYMVERHALTEN DER NORMALEN ADULTEN
REETUMSCHIEIMHAUT PM 55
5.1.7.1 ABSOLUTE UND SPEZIFISCHE ENZYMAKTI-
V ITAE T DER NORMALEN ADULTEN RECTUM-
SCHLEIMHAUT PM (TABELLE) 56
5.1.8 LEITENZYMVERHALTEN DER PLASMAMEMBRAN
BEIM BRONCHIALCAREINOM-POOL 56
5.1.8.1 BRONCHIALCARE INOM-POOL PM NACH
PROTEASENBEHANDLUNG 56
5.1.8.1.1 BROMELAIN 56
5.1.8.1.2 PAPAIN 57
5.1.8.2. BRONCHIALCA REINOM-POOL PM NACH
BEHANDLUNG MIT DETERGENTIEN 57
5.1.8.2.1 TRITON-X-100 57
5.1.8.3 ABSOLUTE UND SPEZIFISCHE ENZYMAK-
TIV I TAE T DER BRONCHI ALEARE INOM -
POOL PM
58
5
.1.9 LEITENZYME DER MAGENEARC INOM-POOL PM 58 -
5.1.9.1 MAGENCARCINOM-POOL PM NACH BEHAND-
LUNG MIT PROTEASEN 59
5.1.9.1.1 BROMELAIN 59
5.1.9.1.2 PAPAIN 59
5.1.9.2 MAGENCARCINOM-POOL PM NACH BEHAND-
LUNG MIT DETERGENT IEN 60
5.1.9.2.1 TRITON-X-100 60
5.1.9.3 ABSOLUTE UND SPEZIFISCHE ENZYMAKTI-
V ITAE T DER MAGENCARCINOM-POOL PM
(TABELLE) 61
5.1.10 POLYARCRYLAMID DISC ELEKTROPHORESE 61
5.1.10.1 AUFTRENNUNG DER MIT PAPAIN BEHANDEL-
TEN PM-FRAKTIONEN 61
5.1.10.2 AUFTRENNUNG DER MIT TWEEN 20 BEHAN-
DELTEN PM-FRAKTIONEN 64
5.1.10.3 AUFTRENNUNG DER MIT BROMELAIN BEHAN-
DELTEN PM-FRAKTIONEN 67
5.2 IMMUNOLOGISCHER TEIL (ST. GRUENWALD) 68
5.2.1 IMMUNOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG DER
PLASMAMEMBRAN VON FETAL-ORGANEN 68
5.2.1.1 IMMUNOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN L OE S L I -
CHER MEMBRANANTIGENE DER FETAL-LEBER
MIT AK GEGEN F ETA L-LEBER PM 68
5.2.1.1.1 PROTEOLYTISCH BEHANDELTE FETAL-LEBER
PM (PAPAIN, BROMELAIN) 68
5.2.1.1.2 MIT DETERGENTIEN BEHANDELTE FETAL-
LEBER PM (TRITON-X-100) 71
5.2.1.2 IMMUNOLOGISCHE UNTERSUCHUNG L OE S L I -
CHER MEMBRANANTIGENE DER PLAZENTA MIT
AK GEGEN PLAZENTA-PM 73
5.2.1 .2.1 PROTEOLYTISCH BEHANDELTE PLAZENTA-PM
(PAPAIN, BROMELAIN) 73
5
.2.1.2.2 MIT DETERGENT IEN BEHANDEL TE PLAZENTA-PM
-FRAKTION (TRITON-X-100) 75
5.2.1.3 IMMUNOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN LOE SLICH E R
MEMBRANANTIGENE DER FETAL-NIERE MIT AK
GEGEN F ETA L-NIEREN-PM 76
5.2.1.3.1 PROTEOLYTISCH BEHANDELTE FETAL-NIEREN-PM
(PAPAIN, BROMELAIN) 77
5.2.1.3.2 MIT DETERGENT IEN BEHANDELTE FETAL-NIEREN-PM
(TRITON-X-100) 78
5.2.2 UNTERSUCHUNGEN ZUR ANTIGENVERWANDTSCHAFT
VON PLASMAMEMBRANANTIGENEN AUS PLAZENTA,
FETAL-LEBER UND FETAL-NIERE 79
5.2.2.1.1 ANALYSE VON ANTIGENVERWANDTSCHAFT ZWISCHEN
PLAZENTA-PM BROM. 0 UND F E TA L-LEBER-PM
BROM. 0 MIT ANTIKOERPERN GEGEN F E TA L-
LEBER-PM . 79
5.2.2.1.2 ANALYSE VON ANTIGENVERWANDTSCHAFT
ZWISCHEN FETAL-LEBER-PM T R I . UE UND
FETAL-NIERE-PM T RI. UE MIT ANTIKOERPERN
GEGEN FETAL-LEBER-PM 79
5.2.2.2.1 ANALYSE VON ANTIGENVERWANDTSCHAFT
ZWISCHEN FETAL-LEBER-PM BROM. 0 UND
FETAL-NIERE-PM BROM. 0 MIT ANTIKOERPERN
GEGEN FETAL-NIEREN-PM 81
5.2.2.2.2 ANALYSE VON ANTIGENVERWANDTSCHAFT
ZWISCHEN FETAL-NIEREN-PM T R I . 0 UND
PLAZENTA-PM T RI. UE MIT ANTIKOERPERN
GEGEN FETAL-NIEREN-PM 82
5.2.2.3.1 ANALYSE VON ANTIGENVERWANDTSCHAFT
ZWISCHEN FETAL-LEBER T R I. UE UND PLAZENTA-PM
TRI. UE MIT ANTIKOERPERN GEGEN PLAZENTA-PM 84
5.2.2.3.2I ANALYSE VON ANTIGENVERWANDTSCHAFT
ZWISCHEN FETAL-NIEREN-PM TRI. UE UND PLAZEN-
TA-PM T RI. UE MIT ANTIKOERPERN GEGEN
PLAZENTA-PM
5
.2.3 IMMUNOLOGISCHE KREUZREAKTIONEN VON
TUMORANT IGENEN 87
5.2.3.1 TABELLE ZU KREUZREAGIERENDEN ANTIGENEN
AUS PLASMAMEMBRANEN VON FETAL-ORGANEN,
PLAZENTA, ADULTEM GEWEBE UND CARCINOMEN 96
5.2.4 IMMUNFLUORESZENZMIKROSKOPIE 98
6. DISKUSSION 99
7. ZUSAMMENFASSUNG 121
8. LITERATURVERZEICHNIS 125
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