Identifizierung und Charakterisierung cis-aktiver Kontrollelemente des lichtregulierten Chalkonsynthase-Gens in Petersilie:
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| Sprache: | German |
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1989
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| adam_text | IF-5AI - ^51 A IDENTIFIZIERUNG UND CHARAKTERISIERUNG DS-AKTIVER
KONTROLLELEMENTE DES LICHTREGULIERTEN CHALKONSYNTHASE-GENS IN PETERSILIE
INAUGURAL-DISSERTATION ZUR ERLANGUNG DES DOKTORGRADES DER
MATHEMATISCH-NATURWISSENSCHAFTLICHEN FAKULTAET DER UNIVERSITAET ZU KOELN
VORGELEGT VON PAUL SCHULZE-LEFERT AUS ALTENBERGE HUNDT DRUCK GMBH, KOELN
1989 INHALTSVERZEICHNIS SEITE 1 EINLEITUNG 1 2 MATERIAL UND METHODEN 11
2.1 CHEMIKALIEN, ENZYME UND RADIOISOTOPE 11 2.2 HAEUFIG VERWENDETE MEDIEN
UND PUFFER 11 2.3 BAKTERIENSTAEMME, BAKTERIOPHAGEN, DNA-VEKTOREN 12 2.4
ZELLKULTUREN 13 2.5 REINIGUNG VON NUKLEINSAEUREN 13 2.5.1 ISOLIERUNG
GENOMISCHER DNA AUS ZELLKULTUREN 13 FUER FOOTPRINT-ANALYSEN 2.5.2
SCHNELLE PLASMID-PRAEPARATION FUER QUALITATIVE 14 * ANALYSEN 2.5.3
QUANTITATIVE PLASMID-PRAEPARATION 14 2.5.4 PRAEPARATION VON
EINZELSTRANG-DNA 14 2.5.5 ISOTACHOPHORESE * 15 2.5.6 ISOLIERUNG VON
RNA AUS ZELLKULTUREN 16 2.6 NUKLEINSAEURE-HYBRIDISIERUNGEN 16 2.6.1
SOUTHERN-HYBRIDISIERUNGEN 16 2.6.2 HYBRIDISIERUNGEN VON IN VIVO
FOOTPRINT- 16 MEMBRANFILTERN 2.6.3 RNA BLOT-HYBRIDISIERUNGEN 17 2.7
DESOXYOLGONUKLEOTIDE 17 2.8 DNA-SEQUENZIERUNG 18 2.9 TRENNUNG VON
DNA-FRAGMENTEN 18 2.9.1 AUFTRENNUNG VON DNA-FRAGMENTEN IN AGAROSE- 18
GELEN 2.9.2 AUFTRENNUNG VON DNA-FRAGMENTEN IN HARNSTOFF/ 19
POLYACRYLAMID-GELEN 2.9.3 TRENNUNG VON DNA-FRAGMENTEN IN SUCROSE- 20
GRADIENTEN 2.10 FIXIERUNG VON DNA-FRAGMENTEN AUF MEMBRAN- 20 FILTER MIT
UV-LICHT 2.11 ELEKTROTRANSFER VON DNA-FRAGMENTEN IN POLY- 20
ACRYLAMID-GELEN AUF MEMBRANFILTER 2.12 HERSTELLUNG SPEZIFISCHER PROBEN
FUER DIE 21 HYBRIDISIERUNG FILTERGEBUNDENER DNA 2.12.1 32 P-MARKIERUNG
MIT DEM MULTIPRIME-SYSTEM 21 2.12.2 HERSTELLUNG EINZELSTRANGSPEZIFISCHER
PROBEN 21 2.13 PROTOPLASTEN-PRAEPARATION AUS ZELLKULTUREN DER 22
PETERSILIE 2.14 TRANSFORMATION VON PROTOPLASTEN AUS ZELLKUL- 23 TUREN
DER PETERSILIE 2.15 SS-GLUCURONIDASE AKTIVITAETSBESTIMMUNG IN 23
PROTOPLASTEN 2.16 ORTSGERICHTETE MUTAGENESE MIT DEN PMA/C- 24 VEKTOREN
2.17 CHIMAERE CHS-GENKONSTRUKTIONEN * 26 2.18 IN SITU HYBRIDISIERUNG 30 3
ERGEBNISSE 31 3.1 AUSARBEITUNG EINER IN VIVO FOOTPRINT- 31 TECHNIK IN
ZELLKULTUREN VON PFLANZEN 3.1.1 IN VIVO METHYLIERUNG IN SUSPENSIONSKUL-
31 TUREN DER PTERSILIE 3.1.2 ISOLIERUNG UND ANREICHERUNG GENOMISCHER 34
PROMOTORFRAGMENTE UEBER SUCROSEGRADIENTEN 3.1.3 SYNTHESE 32 P-MARKIERTER
EINZELSTRANG-DNA 37 IN REKOMBINANTEN M13-KLONEN 3.1.4 FIXIERUNG VON DNA
AUF MEMBRANFILTER MIT 40 UV-LICHT 3.2 IN VIVO FOOTPRINTING I:
KONSTITUTIVE FOOT- 42 PRINTS IN TATA-PROXIMALEN 4CL-PROMOTORSEQUENZEN
3.2.1 IN SITU UNTERSUCHUNGEN ZUR GENAKTIVIERUNG 47 DES 4CL-GENS IN
KULTIVIERTEN PETERSIELIEZELLEN 3.3 IN VIVO FOOTPRINTING II:
LICHTABHAENGIGE FOOT- 49 PRINTS IM CHS-PROMOTOR 3.3.1 LICHTABHAENGIGE
FOOTPRINTS IN TATA-PROXIMALEN 50 CHS 8 -PROMOTORSEQUENZEN 3.3.2
FOOTPRINTING ZU VERSCHIEDENEN ZEITPUNKTEN IM 55 VERLAUF DER
TRANSKRIPTIONELLEN AKTIVIERUNG 3.3.3 UV-B LICHTBEHANDLUNG DER ZELLKULTUR
IST AUS- 60 REICHEND, IN VIVO FOOTPRINTS ZU INDUZIEREN 3.4
FUNKTIONSANALYSE VON SEQUENZBEREICHEN MIT 64 LICHTINDUZIERTEN FOOTPRINTS
IM CHS-PROMOTOR 3.4.1 DER CHS-PROMOTOR VERMITTELT EINE LICHTREGULIERTE
65 GENEXPRESSION NACH TRANSFORMATION VON REPORTER- GEN-KONSTRUKTIONEN IN
PETERSILIE-PROTOPLASTEN 3.4.2 DELETIONS-ANALYSE DES CHS -PROMOTORS 68
3.4.3 ORTSGERICHTETE MUTAGENESE DER MOTIVE I UND II 70 3.4.4 DER
MINIMAL-PROMOTOR DES CHS-GENS 73 3.5 ZWEI KONTROLLREGIONEN, DIE GETRENNT
VONEINANDER 74 EINE LICHTGESTEUERTE EXPRESSION VERMITTELN KOENNEN 3.5.1
KOMPENSATION VON MUTATIONEN IN DEN MOTIVEN 74 I UND II 3.5.2 EIN 49 BP
FRAGMENT, DAS DIE MOTIVE III UND IV 76 ENTHAELT, IST FUER DIE VERMITTLUNG
DER LICHTRE- GULIERTEN GENEXPRESSION DURCH DIE TATA-DISTALE
KONTROLLREGION NOTWENDIG 3.6 CIS-AKTIVE ELEMENTE, DIE VOM
TRANSKRIPTIONSSTART 79 WEIT ENTFERNT LIEGEN 3.7 DER IN VIVO FOOTPRINT II
DEFINIERT EIN EIS- 81 ELEMENT, DAS IM VERLAUF DER EVOLUTION IN PFLANZEN
KONSERVIERT WURDE 4 DISKUSSION 84 4.1 IN VIVO FOOTPRINTING 85 4.2
INDUZIERTE UND KONSTITUTIVE PROTEIN/DNA-INTERAK- 89 TIONEN IM VERLAUF
DER TRANSKRIPTIONSAKTIVIERUNG 4.3 FUNKTIONSANALYSE DES CHS A -PROMOTORS
95 4.4 DER CHS-MINIMALPROMOTOR 98 4.5 ZWEI TRENNBARE KONTROLLREGIONEN,
DIE JEWEILS EINE 101 LICHTREGULIERTE EXPRESSION VERMITTELN KOENNEN 4.6
SYNERGISTISCHE EFFEKTE IM CHS-PROMOTOR 105 4.7 EIN IN DER EVOLUTION
KONSERVIERTES KONTROLLELEMENT, 108 DAS AN DER TRANSDUKTION VERSCHIEDENER
EXTERNER SIGNALE BETEILIGT IST? 4.8 GENAKTIVIERUNG DURCH KOMBINATIONEN
VON EIS- 111 ELEMENTEN 113 4.9 AUSBLICK 5 ZUSAMMENFASSUNG 114 6
LITERATUR 116
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