Praxis der elektrophoretischen Trennmethoden: mit 42 Tabellen
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Berlin [u.a.]
Springer
1989
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| Series: | Anleitungen für die chemische Laboratoriumspraxis
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| adam_text | HORST WAGNER-EWALD BLASIUS (HRSG.) PRAXIS DER ELEKTROPHORETISCHEN
TRENNMETHODEN MIT 141 ABBILDUNGEN UND 42 TABELLEN SPRINGER-VERLAG BERLIN
HEIDELBERG NEWYORK LONDON PARIS TOYKO INHALTSVERZEICHNIS THEORIE DER
ELEKTRISCHEN WANDERUNG (H. WAGNER, R. KUHN, S. HOFFSTETTER) 1 EINLEITUNG
1 2 GRUNDLAGEN 1 3 EINFLUESSE AUF DIE WANDERUNGSGESCHWINDIGKEIT 2 3.1
EIGENSCHAFTEN DES GELADENEN TEILCHENS 3 3.2 EIGENSCHAFTEN DES MEDIUMS 5
3.2.1 EINFLUSS DER IONENSTAERKE 5 3.2.2 EINFLUSS DES PH-WERTES 6 3.2.3
EINFLUSS DER KOMPLEXBILDNERKONZENTRATION 8 3.2.4 EINFLUSS DER TEMPERATUR 8
3.2.5 EINFLUSS DES ELEKTRISCHEN FELDES 9 3.2.6 EINFLUSS DES
TRAEGERMATERIALS . 10 3.2.6.1 IONENWANDERUNG IM TRAEGER 10 3.2.6.2
ELEKTROOSMOSE 11 3.2.6.3 SOGSTROEMUNG 11 4 PRINZIPIEN ELEKTROPHORETISCHER
TRENNMETHODEN 11 4.1 ZONENELEKTROPHORESE 11 4.2 METHODE DER WANDERNDEN
GRENZFLAECHEN 12 4.3 ISOTACHOPHORESE 14 4.4 ISOELEKTRISCHE FOKUSSIERUNG
17 LITERATUR 19 PRAXIS DER EINDIMENSIONALEN GELELEKTROPHORESE (G. M.
ROTHE) 1 ALLGEMEINES ZUR ARBEITSTECHNIK 21 2 ELEKTROPHORESEAPPARATUREN
22 2.1 GERAETE FUER DIE HORIZONTALE ELEKTROPHORESE 22 2.2 GERAETE FUER DIE
VERTIKALE ELEKTROPHORESE 24 X INHALTSVERZEICHNIS 3 DIE EINZELNEN
ELEKTROPHORESEVERFAHREN 25 3.1 DIE CELLOGEL- UND
ZELLULOSEACETAT-ELEKTROPHORESE 25 3.1.1 DIE CELLOGEL-ELEKTROPHORESE 25
3.1.1.1 ANWENDUNGSBEISPIELE 29 3.1.1.1.1 LIPOPROTEIN-MUSTER IM ZUGE
VONHYPERLIPAEMIEN 29 3.1.1.1.2 LDH-MUSTER 30 3.1.2 DIE
ZELLULOSEACETAT-ELEKTROPHORESE 30 3.1.2.1 VORBEREITUNG DER MEMBRANEN UND
EINSATZ IN DER ELEKTROPHORESEAPPARATUR 30 3.1.2.2 ANWENDUNGSBEISPIELE 33
3.1.2.2.1 ADENYLAT KINASE 33 3.2 DIE AGAR- UND AGAROSE-ELEKTROPHORESE 34
3.2.1 EIGENSCHAFTEN VON AGAR UND AGAROSE 34 3.2.2 ALLGEMEINES ZUR
AGAROSE-ELEKTROPHORESE 35 3.2.3 HERSTELLUNG VON AGAROSE FLACHGELEN ZUR
TRENNUNG VON DNA-MOLEKUELEN NACH SCHAFFNER 36 3.2.4 AUFBAU EINER
FLACHGELELEKTROPHORESE-APPARATUR ZUR TRENNUNG VON DNA-MOLEKUELEN 38 3.2.5
PROBENAUFTRAG 38 3.2.6 ANFAERBEN AUF DNA 39 3.2.7 BESTIMMUNG DER MOLMASSE
VON DNA-BRUCHSTUECKEN 40 3.2.8 ELUTION DER DNA AUS AGAROSEGELEN 42 3.2.9
ANWENDUNGSBEISPIEL 43 3.3 DIE STAERKEGEL-ELEKTROPHORESE 43 3.3.1
HERSTELLUNG VON STAERKEGELEN 44 3.3.2 APPARATIVE AUSRUESTUNG 45 3.3.3
ANWENDUNGSBEISPIELE 45 3.4 DIE POLYACRYLAMIDGEL-ELEKTROPHORESE 47 3.4.1
ALLGEMEINES ZUR TECHNIK 47 3.4.2 HOMOGENE GELE 48 3.4.2.1 BESTIMMUNG DER
GROESSE VON DNA-BRUCH- STUECKEN 1 KILOBASEN 48 3.4.2.1.1 ABHAENGIGKEIT DES
FRAKTIONIERBEREICHES VON DER POLYACRYLAMID KONZENTRATION 48 3.4.2.1.2
HERSTELLUNG HOMOGENER FLACHGELE 48 3.4.2.1.3 ELEKTROPHORESEBEDINGUNGEN
49 3.4.2.1.4 ELUTION VON DNA AUS POLYACRYLAMIDGELEN 50 3.4.2.1.5
HERSTELLUNG DUENNER FLACHGELE 51 3.4.2.2 DIE BESTIMMUNG VERSCHIEDENER
ISOZYM-TYPEN 52 3.4.2.2.1 DEFINITION DES BEGRIFFS ISOZYM 52 3.4.2.2.2
HERSTELLEN DER GEL- UND ELEKTRODENLOESUNGEN .. 53 3.4.2.2.3
EICHBEZIEHUNGEN ZUR ERMITTLUNG VON LADUNGS- BZW. MOLMASSENISOMEREN
ISOZYMEN ... 53 3.4.2.3 MOLMASSENBESTIMMUNG IN HOMOGENEN SDS-GELEN 54
3.4.2.3.1 ALLGEMEINES ZUR TECHNIK 54 3.4.2.3.2 DIE VERWENDUNG HOMOGENER
GELE 55 INHALTSVERZEICHNIS XI 3.4.3 GRADIENTENGEL-ELEKTROPHORESE 62
3.4.3.1 ALLGEMEINES ZUR TECHNIK 62 3.4.3.2 DAS HERSTELLEN LINEARER
GRADIENTENGELE 63 3.4.3.2.1 DIE HERSTELLUNG VON GLASKASSETTEN 63
3.4.3.2.2 DAS GIESSEN LINEARER GELGRADIENTEN 65 3.4.3.3 DIE BESTIMMUNG
DER MOLEKULAREN GROESSE NATIVER PROTEINE 67 3.4.3.3.1 DIE BESTIMMUNG DER
MAXIMALEN WANDERUNGS- STRECKE VON PROTEINEN 68 3.4.3.3.2 DAS
TRENNVERHALTEN LADUNGSISOMERER PROTEINE .. 74 3.4.3.3.3 DAS
TRENNVERHALTEN MOLMASSENISOMERER PROTEINE 74 3.4.3.3.4 DIE ERMITTLUNG
DES STOKES-RADIUS NATIVER PROTEINE 77 3.4.3.3.5 DIE BESTIMMUNG DER
MOLMASSE NATIVER PROTEINE 78 3.4.3.3.6 DIE BESTIMMUNG DER MOLMASSE SDS-
DENATURIERTER PROTEINE 80 3.4.4 ELUTION VON PROTEINEN AUS
POLYACRYLAMIDGELEN 85 3.4.5 AFFINITAETS-ELEKTROPHORESE 87 3.4.5.1
ANWENDUNGSBEISPIELE 89 LITERATUR 89 PRAXIS DER PAPIER-, DUENNSCHICHT-
BZW. SAEULENELEKTROPHORESE UND ANWENDUNGSBEISPIELE AUS DEM BEREICH DER
ANORGANISCHEN CHEMIE (K. ZIEGLER) 1 ALLGEMEINE GESICHTSPUNKTE ZUR
ARBEITSTECHNIK 94 1.1 TRAEGERMATERIALIEN 94 1.1.1 PAPIERE 95 1.1.2
TRAEGERMATERIALIEN FUER DIE DUENNSCHICHTELEKTROPHORESE 96 1.1.3
TRAEGERMATERIALIEN FUER DIE SAEULENELEKTROPHORESE 96 1.2 GRUNDELEKTROLYT 98
1.3 AUFTRAGUNG DER PROBE 99 1.4 AUSWERTUNG DER PHEROGRAMME 100 1.4.1
PAPIER- BZW. DUENNSCHICHTELEKTROPHORESE 100 1.4.1.1 QUALITATIVE
AUSWERTUNG 100 1.4.1.2 QUANTITATIVE AUSWERTUNG 100 1.4.1.2.1
DIREKTBESTIMMUNGSMETHODEN 101 1.4.1.2.2 ELUTIONSMETHODEN 101 1.4.2
SAEULENELEKTROPHORESE 101 2 APPARATUREN 102 2.1 PAPIER- BZW.
DUENNSCHICHTELEKTROPHORESE 102 2.2 SAEULENELEKTROPHORESE 105 XII
INHALTSVERZEICHNIS 3 ANWENDUNGSBEISPIELE AUS DEM BEREICH DER
ANORGANISCHEN CHEMIE 110 3.1 POLYANIONEN 110 3.1.1 POLYSULFANDISULFONATE
111 3.1.2 35 S UND 75 SE MARKIERTE POLYSELENANDISULFONATE UND
POLYSULFAN- SELENANDISULFONATE 111 3.1.3 POLYSULFANDIPHOSPHONATE UND
-PHOSPHONSULFONATE 112 3.1.4 HALOGENOHYDROBORATE 114 3.2 CHEMISCH
AEHNLICHE ANIONEN 115 3.2.1 CLOF, C1O 4 BRO 3 , IO 3 UND 10; 115 3.2.2
CARBONSAEURE- BZW. SULFONSAEUREANIONEN 116 3.2.3 ANIONEN AUS RADIOAKTIVEN
ABFALLOESUNGEN 118 3.3 METALLKOMPLEXE 119 3.3.1 GEMISCHTLIGANDKOMPLEXE
VON PT-ELEMENTEN 120 3.3.1.1 CHLORO-AQUO-RHODIUM (III)-KOMPLEXE 120
3.3.1.2 CHLORO-BROMO-IRIDATE (IV) 122 3.3.2 GEMISCHTLIGANDKOMPLEXE DES
CR(III) 123 3.3.2.1 CYANATO-ETHYLENDIAMIN-CHROM(III) 125 3.3.2.2
THIOCYANATO-8-HYDROXYCHINOLINO-CHROM(III)-KOMPLEXE . 126 3.4
RUTHENIUMKOMPLEXE IN RADIOAKTIVEN ABFALLOESUNGEN 127 3.4.1 KATIONISCHE
RUTHENIUMNITROSYLNITRATO-KOMPLEXE 127 3.4.2 UMWANDLUNG DER
RUTHENIUMNITROSYLNITRATO-KOMPLEXE 130 3.4.2.1 GLEICHGEWICHTSEINSTELLUNG
EINER FRISCH HERGESTELLTEN SALPETERSAUREN
RUTHENIUMNITROSYLNITRATOKOMPLEXLOESUNG BEI ZIMMERTEMPERATUR 131 3.4.2.2
UMWANDLUNG EINZELNER ISOLIERTER KOMPLEXE IN ABHAENGIGKEIT VON DER
LAGERZEIT UND DER TEMPERATUR 132 3.4.2.3 VERHALTEN BEI GEFRIERTROCKNUNG
134 3.4.2.4 VERHALTEN BEIM EINDAMPFEN UND CALCINIEREN 134 LITERATUR 137
PRAXIS DER ULTRADUENNSCHICHT-ISOELEKTRISCHEN FOKUSSIERUNG MIT
IRAEGERAMPHOLYTEN UND IMMOBILISIERTEN PH-GRADIENTEN (A. GOERG, W. POSTEL,
S. GUENTHER, R. WESTERMEIER) 1 ALLGEMEINE GESICHTSPUNKTE ZUR
ARBEITSTECHNIK 139 1.1 APPARATUREN 141 1.1.1 STROMVERSORGUNG 141 1.1.2
TRENNKAMMERN 141 1.1.3 KUEHLUNG 142 1.2 HERSTELLUNG ULTRADUENNER GELE FUER
DIE IEF MIT TRAEGERAMPHOLYTEN 142 1.3 HERSTELLUNG DUENNER FLACHGELE FUER
DIE IEF IN IMMOBILISIERTEN PH-GRADIENTEN 145 INHALTSVERZEICHNIS XIII 2
ISOELEKTRISCHE FOKUSSIERUNG 146 2.1 IEF MIT TRAEGERAMPHOLYTEN 146 2.1.1
EIGENSCHAFTEN DER TRAEGERAMPHOLYTE 146 2.1.2 WAHL DES PH-GRADIENTEN .
148 2.1.3 GEL-ZUSAMMENSETZUNG 149 2.1.4 PROBENVORBEREITUNG UND
-APPLIKATION 152 2.1.5 TRENNBEDINGUNGEN 154 2.1.6 TITRATIONSKURVEN 155
2.2 IEF MIT IMMOBILISIERTEN PH-GRADIENTEN 156 2.2.1 EIGENSCHAFTEN DER
IMMOBILINE 156 2.2.2 WAHL DES PH-GRADIENTEN 159 2.2.3
GEL-ZUSAMMENSETZUNG 161 2.2.4 PROBENVORBEREITUNG UND -APPLIKATION 166
2.2.5 TRENNBEDINGUNGEN 166 2.3 BESTIMMUNG DER PL-WERTE 167 2.3.1
EINFLUSSFAKTOREN AUF DEN PL-WERT 167 2.3.2 PI-MESSUNG 169 2.4
VISUALISIERUNGSMETHODEN 170 2.4.1 PROTEINE 170 2.4.2 GLYKOPROTEIN- UND
LIPOPROTEINANFAERBUNG 171 2.4.3 PEPTIDANFAERBUNG 172 2.4.4 ENZYMANFAERBUNG
172 2.4.5 PRINT-TECHNIKEN 173 2.4.6 IMMUNOFIXATION UND IMMUNOPRINT 174
2.4.7 AUTORADIOGRAPHIE 174 2.5 AUFBEWAHRUNG UND DOKUMENTATION 175 2.5.1
TROCKNUNG DER GELE 175 2.5.2 DENSITOMETRIE 175 2.5.3 PHOTOGRAPHIE 175 3
WEITERE HORIZONTALE ULTRADUENNSCHICHT-ELEKTROPHORESE-VERFAHREN 175 3.1
POLYACRYLAMIDGEL-ELEKTROPHORESE 176 3.2 DISK-ELEKTROPHORESE 178 3.3
GRADIENTENGEL-ELEKTROPHORESE 178 3.4 SDS-ELEKTROPHORESE 179 3.5
ZWEIDIMENSIONALE ELEKTROPHORESE 180 4 VERSUCHE ZUR ISOELEKTRISCHEN
FOKUSSIERUNG 182 4.1 IEF MIT TRAEGERAMPHOLYTEN 182 4.2 IEF IM
IMMOBILISIERTEN PH-GRADIENTEN 186 4.2.1 IEF IM ULTRAENGEN
IMMOBILISIERTEN PH-GRADIENTEN 186 4.2.2 IEF MIT IMMOBILINE-FERTIGGELEN
(DRYPLATES) 188 4.2.3 IEF IM IMMOBILISIERTEN PH-GRADIENTEN FUER DIE
HOCHAUFLOESENDE 2D-ELEKTROPHORESE VON BOHNENSAMENPROTEINEN 191 LITERATUR
195 XIV INHALTSVERZEICHNIS PRAXIS DER ZWEI-DIMENSIONALEN ELEKTROPHORESE
VON PROTEINEN (J. KLOSE, M. SCHMID) 1 EINLEITUNG 198 2 ARBEITSTECHNIK
201 2.1 CHARAKTERISIERUNG DER ZWEI-DIMENSIONALEN ELEKTROPHORESE 201 2.2
APPARATUREN 206 2.2.1 GERAET FUER DIE ISOELEKTRISCHE FOKUSSIERUNG 206
2.2.2 GERAETE FUER DIE ELEKTROPHORESE 206 2.2.3 STROMGERAETE 207 2.2.4
GERAETE ZUR GELTROCKNUNG 207 2.2.5 GERAETE ZUR AUSWERTUNG 207 2.3 GELE UND
LOESUNGEN 209 2.3.1 GELE UND LOESUNGEN FUER DIE ISOELEKTRISCHE FOKUSSIERUNG
209 2.3.2 GELE UND LOESUNGEN FUER DIE ELEKTROPHORESE 209 2.3.3 LOESUNGEN
FUER DIE FAERBUNG 212 2.3.4 LOESUNGEN FUER DIE FLUOROGRAPHIE 212 3
VERSUCHSDURCHFUEHRUNG 212 3.1 VERSUCH 1: 2DE IN KLEINEN GELEN
(SG-TECHNIK) 212 3.1.1 PROBENHERSTELLUNG 212 3.1.2 ISOELEKTRISCHE
FOKUSSIERUNG 213 3.1.3 ELEKTROPHORESE 214 3.1.4 FAERBUNG 214 3.1.5
AUSWERTUNG DER PROTEINMUSTER 215 3.2 VERSUCH 2: 2DE IN MITTELGROSSEN
GELEN (MG-TECHNIK) 217 3.2.1 PROBENHERSTELLUNG 217 3.2.2 ISOELEKTRISCHE
FOKUSSIERUNG 218 3.2.3 ELEKTROPHORESE 218 3.2.4 FLUOROGRAPHIE 219 3.2.5
AUSWERTUNG DER PROTEINMUSTER 219 LITERATUR 220 PRAXIS DER PRAEPARATIVEN
FREE-FLOW-ELEKTROPHORESE (H. WAGNER, R. KUHN, S. HOFFSTETTER) 1
EINLEITUNG UND GESCHICHTLICHE ENTWICKLUNG 223 2 TRENNAPPARATUR 224 2.1
EINLEITUNG 224 2.2 BESCHREIBUNG DER APPARATUR ELPHOR VAP 22 224 2.3 DAS
DETEKTIONSSYSTEM 226 2.4 STROEMUNGSPROFILE 228 INHALTSVERZEICHNIS XV 3
TRENNMETHODEN 230 3.1 ZONENELEKTROPHORESE 231 3.1.1 PRINZIP 231 3.1.2
ANWENDUNG 232 3.1.3 BEISPIEL 234 3.2 ISOTACHOPHORESE 235 3.2.1 PRINZIP
235 3.2.2 ANWENDUNG 236 3.2.3 BEISPIELE 237 3.3 ISOELEKTRISCHE
FOKUSSIERUNG 238 3.3.1 ISOELEKTRISCHE FOKUSSIERUNG IM LINEAREN
PH-GRADIENTEN 239 3.3.1.1 PRINZIP 240 3.3.1.2 ANWENDUNG 242 3.3.1.3
BEISPIEL 242 3.3.2 ISOELEKTRISCHE FOKUSSIERUNG IM STUFENFOERMIGEN
PH-GRADIENTEN 243 3.3.2.1 PRINZIP 243 3.3.2.2 ANWENDUNG 244 3.3.2.3
BEISPIELE 246 3.4 FELDSPRUNGELEKTROPHORESE 247 3.4.1 PRINZIP 248 3.4.2
ANWENDUNG 252 3.4.3 BEISPIELE 253 4 SPEZIELLE TRENNAPPARATUREN 258 4.1
EINLEITUNG 258 4.2 BIOSTREAM-APPARATUR 258 4.3 RIEF-APPARATUR 258 5
ANHANG 261 5.1 TABELLEN 261 5.2 ANWENDUNGEN DER FREE-FLOW-ELEKTROPHORESE
266 LITERATUR 268 SACHVERZEICHNIS 279
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