Hypertrophie-Induktion an adulten Herzmuskelzellen durch beta-adrenerge Agonisten in Langzeitkulturen:
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1995
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INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGEN.1
1 EINLEITUNG.3
2 MATERIAL.7
2.1 CHEMIKALIEN.^.7
2.2 GERAETE.9
3 METHODEN.11
3.1 ISOLIERUNG VON HCRZMUSKCLZELLEN.11
3.1.1 VERSUCHSTIERE.11
3.1.2 ISOLIERUNG DER HERZMUSKELZELLEN.11
3.2 ZELLKULTUR.12
3.2.1 MEDIUM.12
3.2.2 AUSPLATTIERUNG.RR.:.12
3.2.3 KURZZEIT- UND LANGZEITKULTUR.1.13
3.3 FAERBEMETHODEN.13
3.3.1 TRYPANBLAU-FAERBUNG.13
3.3.2 F-AKTIN-FAERBUNG (TRITC GEKOPPELT).13
3.4 ZELLAUFSCHLUSS SOWIE ZELLERNTC FUER KRCATINKINASC UND
LAKTATDEHYDROGENASC.14
3.4.1 ZELLAUFSCHLUSS UND PROBENVORBEREITUNG.14
3.4.2 AUFTRENNUNG DER KREATINKINASE-ISOFORMEN.15
3.4.3 BESTIMMUNG DER KREATINKINASE-AKTIVITAET.15
3.4.4 BESTIMMUNG DER LAKTATDCHYDROGCNASC-AKTIVITAET.16
3.4.5 BESTIMMUNG DES PROTEINGEHALTES.17
3.5 BESTIMMUNG DER INKORPORATION VON [14C]-PHENYIALANIN.17
3.5.1 HERSTELLEN DER PROBEN.17
3.5.2 BESTIMMUNG DER INKORPORATION VON [L4C]-PHENYIALANIN IN
SAEUREPRAEZIPITIERBARES MATERIAL.18
3.5.3 BESTIMMUNG DES DNA-GEHALTES.18
3:5.4 BESTIMMUNG DES RNA-GCHALTCS.18
3.6 BESTIMMUNG DER INKORPORATION DER [14C]-PHENYLALANIN IN DIE FRAKTION
DER
SCHWEREN MYOSINKETTEN.19
3.6.1 HERSTELLUNG DER SCHWEREN MYOSINKETTEN PROBEN.19
3.6.2 BESTIMMUNG DER INKORPORATION VON [,4C]-PHCNYLALANIN IN SCHWERE
MYOSINKETTEN.19
3.6.3 ELEKTROPHORESE DER SCHWEREN MYOSINKETTEN.19
3.7 BESTIMMUNG DES CAMP-GEHALTES.20
3.7.1 INDUKTION DER ZELLEN UND HERSTELLUNG DER PROBEN.20
3.7.2 BESTIMMUNG DES CAMP-GEHALTES.21
3.8 BESTIMMUNG DES ATP-GEHALTES.21
3.8.1 HERSTELLUNG DER PROBEN.21
3.8.2 ATP-BESTIMMUNG.22
3.9 BEHANDLUNG DES SERUMS.23
3.9.1 HITZEDENATURIERUNG DES SERUMS.23
3.9.2 DIALYSE DES SERUMS.23
3.10 TRANSFORMING-GROWTH-FACTOR SS REAKTION.23
3.10.1 IMMUNPRAEZIPITATION.23
3.10.2 WESTERN-BLOT.24
3.10.3 DOT-BLOT.27
3.11 STATISTIK.27
I
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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4 ERGEBNISSE
28
4.1 MORPHOLOGISCHE CHARAKTERISTIKA DER KURZZEIT- UND LANGZEITKULTUR.28
4.2 HYPERTROPHIE-INDUKTION DER KURZZCITKULTUREN.28
4.3 HYPERTROPHIE-INDUKTION DER LANGZEITKULTUREN.32
4.3.1 A- UND SS-ADRENERGE AGONISTEN STIMULIERTE PROTEINSYNTHESE.32
4.3.2 KINETIK DER DURCH PHENYLEPHRIN BZW. ISOPRENALIN-INDUZIERTEN [
L4C]-
PHENYLALANIN-INKORPORATION.32
4.3.3 KREATINKINASE- UND LAKTATDQHYDROGENASE-AKTIVITAET.36
4.3.4 DOSISWIRKUNG VON PHENYEPHRIN UND ISOPRCNALIN FUER DIE INDUKTION DER
PROTEINSYNTHESE.36
4.3.5 [
L4C]-PHCNYLAIANIN-INKORPORATION IN SCHWERE MYOSINKETTEN (MHC).36
4.4 BEDINGUNG FUER SS-ADRENERG VERMITTELTE HYPERTROPHIE-INDUKTION IN
LANGZEITKULTUREN.40
4.4.1 ABHAENGIGKEIT VON DER VORINKUBATIONSZEIT.40
4.4.2 ABHAENGIGKEIT VON DER SERUMKONZENTRATION.40
4.5 CHARAKTERISIERUNG DER SERUMFRAKTION DER SS-ADRENERG VERMITTELTEN
HYPERTROPHIE.42
4.5.1 HITZEINAKTIVIERUNG DES SERUMS.42
4.5.2 GROESSENFRAKTIONIERUNG DES SERUMS.43
4.6 DIE ROLLE VON TGF-SS, BEI DER INDUKTION DERJJ-ADRENERG VERMITTELTEN
HYPERTROPHIE IN LANGZEITKULTUREN.TTT.44
4.6.1 WIRKUNG NEUTRALISIERENDER ANTIKOERPER GEGEN TGF-SS, UND DER ZUGABE
VON TGF-SS, 2 WAEHREND DER VORINKUBATION IN LANGZCITKULTURCN.44
4.6.2 TGF-SS,-GEHALT IM KULTURMEDIUM VON LANGZEITKULTUREN.44
4.7 CHARAKTERISIERUNG DER AN DER HYPERTROPHIE-INDUKTION IN
LANGZEITKULTUREN
BETEILIGTEN SS-ADRENERGEN REZEPTORSUBTYPEN.48
4.7.1 SS-ADRENERGE STIMULATION IN GEGENWART SPEZIFISCHER ANTAGONISTEN.48
4.7.2 EINFLUSS EINES SPEZIFISCHEN SS2-ADRENERGEN AGONISTEN AUF DIE
HYPERTROPHIE-INDUKTION.48
4.7.3 WIRKUNG DER SS,- UND SS
2-ADRENERGEN ANTAGONISTEN AUF SS-ADRENERG
VERMITTELTE HYPERTROPHIE.48
4.8 VERGLEICH SS-ADRENERGEN REZEPTORSTIMULATION AUF DIE AKKUMULATION VON
CAMP IN
KURZZEIT- UND LANGZEITKULTURCN.50
4.8.1 ISOPRENALIN-INDUZIERTE CAMP-AKKUMULATION IN KURZZEIT- UND
LANGZEITKULTUREN.50
4.SS.2 PROCATEROL-INDUZIERTE CAMP-AKKUMULATION IN KURZZEIT- UND
LANGZEITKULTUREN.50
4.8.3 WIRKUNG SS-ADRENERGEN ANTAGONISTEN AUF DIE CAMP-AKKUMULATION.50
4.9 DIE ROLLE DES CAMP ALS SECOND MESSENGER BEI DER INDUKTION DER
SS-ADRENERG
VERMITTELTEN HYPERTROPHIE.52
4.9.1 ADENYLATZYKIASE-AKTIVATOR INDUZIERT CAMP-AKKUMULATION UND
HYPERTROPHIE-EFFEKT.52
4.9.2 DIE ROLLE DER PHOSPHODIESTERASE BEI DER CAMP-SPIEGEL-ERHOEHUNG IN
KURZZEIT- UND LANGZEITKULTUREN.52
4.9.3 KORRELATION VON CAMP-AKKUMULATION UND PROTEINSYNTHESE.57
5 DISKUSSION.58
ZUSAMMENFASSUNG.66
LITERATUR. 67 |
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