Einfluß differentiell exprimierter Gene auf das tumorigene, Interleukin-2-unabhängige Wachstum von murinen zytotoxischen T-Lymphozyten:
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Datensatz im Suchindex
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG
_F
1.1 TUMORIGENESE
_F
1.2 DAS IMMUNSYSTEM
_F
1.2.1 DIE LYMPHOZYTEN
_1
1.3 LYMPHATISCHE LEUKAEMIEN
_, 2
1.4 SIGNALTRANSDUKTION IN T-LYMPHOZYTEN
_2
1.4.1 MEMBRANSTAENDIGE KOMPONENTEN VON SIGNAL 1
_
3
1.4.1.1 DER T-ZELLREZEPTORKOMPLEX
_
3
1.4.1.2 DIE KOREZEPTOREN CD4 UND CD8
_4
1.4.1.3 MIT DEM T-ZELLREZEPTOR ASSOZIIERTE TYROSINKINASEN
_6
1.4.1.3.1 KINASEN AUS DER SRC-FAMILIE
_
6
1.4.1.3.1.1 FYN-KINASE
_6
1.4.1.3.1.2 LCK-KINASE
_7
1.4.1.3.2 KINASEN AUS DER SYK-FAMILISS
_ 7
1.4.1.3.2.1 SYK-KINASE _
_7
1.4.1.3.2.2 ZAP-KINASE
_
8
1.4.1.4 CD45-PHOSPHATASE
_8
1.4.2 SIGNAL 1: DAS KONZERT
_
9
1.4.3 KOMPONENTEN, DIE AN SIGNAL 2 BETEILIGT SIND
_
10
1.4.3.1 DER LNTERIEUKIN-2 REZEPTOR
_
10
1.4.3.1.1 SRC-KINASEN
_FF
1.4.3.1.2 SYK-KINASEN
_
12
1.4.4 DIE ROLLE VON C-MYC IN SIGNALTRANSDUKTION UND ZELLTEILUNG
_
13
1.S AUFGABENSTELLUNG
_
15
2. MATERIAL UND METHODEN
_
18
2.1 MATERIAL
_
18
2.1.1 HERKUNFT HAEUFIG VERWENDETER REAGENTIEN UND MATERIALIEN
_
18
2.1.1.1 ZELLKULTUR
_
18
2.1.1.2 MOLEKULARBIOLOGISCHE ARBEITEN
_
18
2.1.1.3 RADIOISOTOPE
_
20
2.1.1.4 ENZYME
_
20
2.1.1.5 PLASMIDE
_
20
2.1.1.6 HYBRIDISIERUNGSSONDEN
_
20
2.1.1
.7
OLIGONUKLEOTIDE
_
21
2.1.1.8 MONOKLONALE ANTIKOERPER
_
21
2.1.1.9 BAKTERIENSTAEMME
_
21
2.1.1.10 GROESSENMARKER
_
21
2.1.1.11 EUKARYOTISCHE ZELLEN
_
21
2.1.2 HAEUFIG VERWENDETE MEDIEN, PUFFERUND LOESUNGEN
_22
2.2 METHODEN
_22
2.2
.1 ZELLKULTURTECHNIKEN
_22
2.2.
1.1 KULTURBEDINGUNGEN FUER T-LYMPHOZYTEN
_22
2.2.
1.2 BESTIMMUNG DER ZELLZAHL UND ZELLVITALITAET IM TRYPANBLAUAUSSCHLUSSTEST
_
23
2.2.1.3 BESTIMMUNG DER DNA-SYNTHESE DURCH
3H-THYMIDININKORPORATION
_
23
2.2.1.4 ERZEUGUNG VON RATTEN-CONA-UEBERSTAND
_
23
2.2.1.5 BESTIMMUNG DER SELEKTIONSBEDINGUNGEN FUERTRANSFIZIERTE ZELLEN
_24
I
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
HTTP://D-NB.INFO/950645079
INHALTSVERZEICHNIS
2.2.1.6 TRANSAKTION VON T-ZELLEN MITTELS ELEKTROPORATION
_
24
2.2.1.7DURCHFLUSSZYTOMETRIE (FACS-ANALYSE)
_
24
2.2.1.8 KULTUR VON E. COLI
_
24
2.2.1.9 HERSTELLUNG KOMPETENTER BAKTERIEN
_
25
2.2.1.10 TRANSFORMATION KOMPETENTER BAKTERIEN
_
26
2.2.2 PROTEIN-CHEMISCHE METHODEN
_
26
2.2.2.1 LOKALISATION VON LCK
R IN E. COLI
_
26
2.2.2 2 REINIGUNG VON LEK, AUS E. COLI UNTER DENATURIERENDEN BEDINGUNGEN
_
26
2.2.2.3 REINIGUNG VON LEK, UNTER NATIVEN BEDINGUNGEN
_27
2.2.2.4
UMPUFFEM VON LEK,
_27
2.2 2.5 KOPPLUNG VON LEK, AN EINE PRAEAKTIVIERTE NHS-SAEULE
_27
2.2.2.6 REINIGUNG VON ANTIKOERPERN _
_ 27
2.2.2.7
LCK-ELISA
_ 27
2.2 2.8 SDS-PAGE
_
28
2.2.2 9 WESTERN BLOT
_
29
2.2.2.10 IMMUNODEDEKTION TRANSFERIERTER PROTEINE
_
30
2.2.2.111MMUNPRAEZIPITATION
_
30
2.2.2.12 TYROSINKINASE-ASSAY
_
31
2.2.2.13 MEMBRANPRAEPARATION
_-_
31
2.2.2.14 PROTEINBESTIMMUNG
_L_
31
2.2.2.15 BESTIMMUNG DER CHLORAMPHENICOLTRANSFERASE AKTIVITAET
_
31
2.2.2.16 BESTIMMUNG DER SS-GALAKTOSIDASE AKTIVITAET
_
32
2.2.3 MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN
_
32
2.2.3.1 BESTIMMUNG DER NUKLEINSAEUREKONZENTRATION
_
32
2.2.3 2 PHENOL/CHLOROFORM-EXTRAKTION EINER NUKLEINSAEURELOESUNG_
32
2.2.3.3 FAELLUNG VON NUKLEINSAEUREN
_
32
2.2.3A RESTRIKTIONSVERDAU
_
32
2.2.3.5 AUFFQLLEN VON 5'-0BERHAENGEN
_
32
2.2.3 6 DEPHOSPHORYLIERUNG VON DNA-FRAGMENTEN
_
33
2.2.3.7 ISOLIERUNG VON DNA AUS AGAMSEGELEN_
_
33
2.2.3.8 LIGATION
_
33
2.2.3.8.1 LIGATION IN WAESSRIGER LOESUNG
_
33
2.2.3 8.2 LIGATION IM AGAROSEGEL
_
33
2.2.3.9 DNA ISOLIEMNG AUS PROKARYOTISCHEN ZELLEN_
34
2.2.3.9.1 MINIPRAEPARATION
_
34
2.2.39.2 MAXIPRAEPARATION
_
34
2.2.3.10 DNA-ISOLIERUNG AUS EUKARYOTISCHEN ZELLEN
_
34
2.2.3.11 RNA-ISOLIEMNG NACH WACH ET AL., (1991)
_
35
2.2.3.12 RNA-ISOLIEMNG NACH XIE UND ROTHBLUM (1991)
_
35
2.2.3.13 ELEKTROPHORETISCHE AUFTRENNUNG VON DNA UND SOUTHERN BLOT
_
35
2.2.3.14 ELEKTROPHORETISCHE AUFTRENNUNG VON RNA UND NORTHERN BLOT
_
36
2.2.3.15 RADIOAKTIVE MARKIEMNG VON CDNA-SONDEN
_
36
2.2.3.16 HYBRIDISIEMNG VON NORTHERN UND SOUTHERN BLOTS
_
37
2.2.3.17 POLYMERASEKETTENREAKTION (PCR)
_
37
3. ERGEBNISSE
_
39
3.1 EIGENSCHAFTEN VERWENDETER ZELLLNLEN
_
39
3.2 HERSTELLUNG POLYKLONALER ANTIKOERPER GEGEN MURINE LEK
_
40
3.2.1 KONSTRUKTION DES EXPRESSIONSVEKTORS
_
41
3.2.1.1 KLONIERUNGSSTRATEGIE
_42
3.2.1.2 ELIMINATION DER C-TERMINALEN STOPKODONE
_42
3.2.2 EXPRESSION VON REKOMBINANTER LEK IN E. COLI
_43
3.2.2.1 ZEITABHAENGIGKEIT DER EXPRESSION
_44
II
INHALTSVERZEICHNIS
3.2.2.2 LOKALISATION VON LCK
R IN E. COLI
_
45
3.2.3 REINIGUNG VON LCKR UEBER EINE NICKEL-CHELAT-SAEULE
_
46
3.2.4 IMMUNISIEMNG VON KANINCHEN MIT LCKR
_
47
3.2.5 REINIGUNG DER LCKRANTIKOERPER
_
47
3.2.5.1 SPEZIFITAETSNACHWEIS IM ELISA
_
47
3.2.5.2 SPEZIFITAETSNACHWEIS IM WESTERN BLOT
_
49
3.2 5.3 UEBERFUEHRUNG DER LCKR IN EINEN HAMSTOFFFREIEN PUFFER
_
51
3.2.5.4 HERSTELLUNG EINER LCK-AFFINITAETS-SAEULE
_
51
3.2.5.5 ANREICHERUNG DER LEK SPEZIFISCHEN ANTIKOERPER AN DER
LCK-NHS-AFFLNITAETS-
SAEULE
_*_
52
3.3
REKONSTITUTION VON CD8A IN K1 UND UEBEREXPRESSION IN SN
_
54
3.3.1 EIGENSCHAFTEN DES CD8A-EXPRESSIONSVEKTORS
_57
3.3.2 ETABLIEMNG DER SELEKTIONSBEDINGUNGEN
_57
3.3.3 TRANSFEKTION VON CD8A IN SN UND K1
_
58
3.3.4 NACHWEIS DES CD8 -PROTEINS AUF DER ZELLOBERFIAECHE
_
61
3.3.5 EINFLUSS DER CD8A-EXPRESSION AUF C-MYC UND IL-2RA IN K1
_
63
3.3.6 REASSOZIATION VON LEK MIT CD8A IN K1
_
64
3.3.7 VERGLEICH DER LCK-MENGE, DIE AN IL-2RSS GEBUNDEN IST
_
65
3.3.8 IL-2-ABHAENGIGKEIT DER CD8A-TRANSFEKTANTEN
_
66
3.4 PROMOTORSTUDIEN IN SN UND K1
_
68
3.4.1 GENOMISCHE ANALYSE DERCD8A-TRANSFEKTANTEN
_
68
3.4.2 VERGLEICH DER PROMOTORAKTIVITAET IN SN UND K1
_
69
3.4.2.1 KONSTRUKTION DER CAT-VEKTOREN
_
70
3.4.2.2 CAT-ASSAY
_
71
3.5 EXPRESSION VON V-MYC IN SN
_
72
3.5.1 EIGENSCHAFTEN DES V-MYC EXPRESSIONSVEKTORS
_72
3.5.2 NACHWEIS DER V-MYC-MRNA IN DEN SN-TRANSFEKTANTEN
_
73
3.5.3 EINFLUSS DER V-MYC-EXPRESSION AUF DIE TRANSKRIPTION VON CD8A, C-MYC
UND IL-2RA74
3.5.4 EINFLUSS DER V-MYC EXPRESSION AUF DIE ZELLZYKLUSABHAENGIGE
TRANSKRIPTION VON C-
MYC
_75
3.5.5 IL-2-ABHAENGIGKEIT DERV-MYC-TRANSFEKTANTEN
_75
4. DISKUSSION
_77
4.1 HERSTELLUNG POLYKLONALER ANTIKOERPER GEGEN LEK
_77
4.1.1 WAHL DES ANTIGENS UND DES EXPRESSIONSSYSTEMS
_77
4.1.2 EXPRESSION VON LEK IM QIA-EXPRESSIONSSYSTEM
_
79
4.1.3 ANTI-LCK ANTIKOERPER
_
80
4.2 URSACHEN DER IL-2-UNABHAENGLGEN PROLIFERATION ZYTOTOXISCHER T-ZELLEN
_
81
4.2.1 STUDIEN ZUR VERTEILUNG VON LEK ZWISCHEN CD8A UND IL-2RSS
_
81
4.2.2 EINFLUSS VON MYC AUF DIE IL-2-UNABHAENGIGKEIT
_
83
4.3 PROMOTORBEDINGTE UNTERSCHIEDE DER CD8A-EXPRESSLON IN SN UND K1
_
85
5. ZUSAMMENFASSUNG
_
86
6. LITERATURVERZEICHNIS
_
88
LLL |
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| spelling | Zgaga-Griesz, Andrea Verfasser aut Einfluß differentiell exprimierter Gene auf das tumorigene, Interleukin-2-unabhängige Wachstum von murinen zytotoxischen T-Lymphozyten vorgelegt von Andrea Zgaga-Griesz 1996 IV, 99 Bl. Ill., graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Freiburg (Breisgau), Univ., Diss. Differentielle Genexpression (DE-588)4201894-8 gnd rswk-swf Killerzelle (DE-588)4163776-8 gnd rswk-swf Zellwachstum (DE-588)4190674-3 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Killerzelle (DE-588)4163776-8 s Zellwachstum (DE-588)4190674-3 s Differentielle Genexpression (DE-588)4201894-8 s DE-604 DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=007717882&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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