Etablierung und Anwendung einer auf der Restriktionsenzym-Analyse basierenden Cluster-Technik und einer Datenbank des bovinen Herpesvirus Typ 1 für molekularepidemiologische Untersuchungen:
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| adam_text | Titel: Etablierung und Anwendung einer auf der Restriktionsenzym-Analyse basierenden Cluster-Technik und ei
Autor: Wyss, Sandra Katja
Jahr: 2001
Verzeichnisse
Inhaltsverzeichnis
1. Einleitung und Problemstellung 1
1.1 Bovines Herpesvirus Typ 1 1
1.2 Situation in der Schweiz 2
1.3 Situation und Bekämpfung
im Ausland 5
1.4 Problemstellung und Arbeit 6
2. Material 7
2.1 Virusstämme 7
2.2 Medien und Gebrauchslösungen 21
2.2.1 Medien zur Zellvermehrung 21
2.2.2 Medienzusätze 21
2.2.3 Gebrauchslösungen 21
2.3 Hersteller und Bezugsquellen 22
2.3.1 Gerätschaften 22
2.3.2 Medien, Zusätze für Zellkulturen 23
2.3.3 DNA-Restriktion und Agarosegele 23
2.3.4 Enzyme 23
2.3.5 Chemikalien 24
2.3.6 Medikamente 24
2.3.7 Zellen 24
2.3.8 Computerprogramme 24
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3. Methoden
3.1 Zellvermehrung
3.2 Isolation von BHV-1 aus Rindern mit positivem
IBR-Serumtiter
3.3 Virusvermehrung
3.3.1 Stockproduktion
3.3.2 Virusproduktion zur DNA-Gewinnung
3.4 Virusreinigung
3.4.1 Phenolextraktion
3.5 Quantitative Bestimmung der DNA
3.6 Transfektion
3.7 DNA Restriktion
3.7.1 Hpa
3.7.2 Hindlll
3.7.3 Sfi
3.7.4 PsS
3.7.5 Ausführung der DNA Restriktion
3.8 Agarose Gelelektrophorese
3.9 DNA-Längenstandard
3.10 Auswertung der Agarose Gele
Verzeichnisse
4. Resultate 29
4.1 Typisierung aufgrund der REA mit vier Enzymen 29
4.1.1 Muster von Hpa 29
4.1.2 Muster von tf/ndlll 31
4.1.3 Was ist ein Cluster 36
4.1.4 Warum braucht es Cluster 37
4.1.5 Muster von Sffl 37
4.1.6 Muster von Pstt 40
4.2 Aussagen zu der Stabilität von BHV-1 in vitro und in vivo 43
4.3 Vergleich der Isolate aus dem Kanton Jura 44
4.3.1 IsolatJura 44
4.3.2 Isolate Grandfontaine und Fahy 47
5. Diskussion 48
49
49
50
50
51
51
52
53
6. Zusammenfassung 55
7. Literaturverzeichnis 56
8. Danksagung 61
9. Lebenslauf 62
10. Anhang 63
Resultattabelle 63
5.1 Cluster Technik
5.2 Hpa)
5.3 H/ndlll
5.4 stn
5.5 Psti
5.6 Stabilität in vitro und in vivo
5.7 Isolate aus dem Kanton Jura
5.8 Verwendung der Datenbank und Ausblick
Verzeichnisse
Abbildungsverzeichnis
Abbildung 1: Einteilung des Hpa Musters in
Bandengruppen 29
Abbildung 2: Hpal Muster 30
Abbildung 3: Verteilung der Hpal Muster 31
Abbildung 4: Einteilung des H/ndlll Musters in
Bandengruppen 32
Abbildung 5: H/ndlll Muster von BHV-1.1 33
Abbildung 6: H/ndlll Muster von BHV-1.1 mit Unterschieden
in der zweiten Bandengruppe 34
Abbildung 7: H/ndlll Muster von BHV-1.2a und BHV-1.2b 35
Abbildung 8: Verteilung der H/ndlll Muster 35
Abbildung 9: Einteilung des Sffl Musters in 6 Bandengruppen 38
Abbildung 10: Clustering von Sffl Gelen 39
Abbildung 11: Verteilung der verschiedenen SfA Cluster 40
Abbildung 12: Einteilung des Pst Musters in
6 Bandengruppen 41
Abbildung 13: Clustering von Pst Gelen 42
Abbildung 14: Verteilung der verschiedenen Psft Cluster 43
Abbildung 15: Photo des Sffl Gels mit Isolat Jura 45
Abbildung 16: Photos von zwei Pst Gelen mit Isolat Jura 46
Verzeichnisse
IV
Tabellenverzeichnis
Tabelle 1: Anzahl Fälle von IBR in den
Jahren 1987 bis 1999
Tabelle 2: Virusstämme
Tabelle 3: Übersicht der gefundenen H/ndlll Muster von BHV-1
Tabelle 4: Isolate mit denselben Zuordnungen wie Isolat Jura
Tabelle 5: Isolate mit denselben Zuordnungen wie
die Isolate Grandfontaine
Tabelle 6: Isolate mit denselben Zuordnungen wie Isolat Fahy
Tabelle 7: Tabelle mit allen typisierten BHV-1 Isolaten
4
7
36
44
47
47
63
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