Genetische Veränderungen in fortgeschrittenen Mammakarzinomen nach Hochdosis-Chemotherapie und autologer Knochenmarktransplantation als Indikator für Therapieansprechen und Überlebensrate:
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2002
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INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
.
4
1,1
EPIDEMIOLOGIE
DES
MAMMAKARZINOMS
.
4
1.2
PATHOMORPHOLOGIE
DES
MAMMAKARZINOMS
.
6
1.2.1
HISTOLOGISCHE
KLASSIFIKATION
.
6
1.2.2
HISTOLOGISCHES
GRADING
.
8
1.2.3
PATHOLOGISCHES
STAGING
.
8
1.3
MOLEKULARE
PATHOGENESE
.
10
1,3.1
DAS
MAMMAKARZINOM
ALS
MOLEKULARGENETISCHE
ERKRANKUNG
.
10
1.3.1.1
ONKOGEN
HER-2/AEU.
11
1.3.1.2
TUMORSUPPRESSORGEN
(TSG)
P53
.12
1.3.2
GENETISCHE
INSTABILITAET
.13
1.3.2.1
MIKROSATELLITENINSTABILITAET
(MSI)
UND
MIKROSATELLITENANALYSE
(MA)
.13
1.3.2.2
LOESS
OF
HETEROZYGOSITY
(LOH)
UND
CHROMOSOMALE
INSTABILITAET
(CIN)
.
15
1.3.3
HEREDITAERES
MAMMAKARZINOM
.
16
1.4
STELLENWERT
DER
HOCHDOSIS-CHEMOTHERAPIE
(HDCT)
MIT
AUTOLOGER
STAMMZELLTRANSPLANTATION
(ASZT)
.
17
1.4.1
ADIUVANTE
THERAPIE
BEI
HOCHRISIKOPATIENTINNEN
.18
1.4.2
METASTASIERTES
MAMMAKARZINOM
.
19
1.5
FRAGESTELLUNG
UND
ZIELSETZUNG
.
22
2
MATERIAL
.
23
2.1
GEWEBEPROBEN
UND
KLINISCH-PATHOLOGISCHE
PATIENTENDAIEN.
.
23
2.2
CHEMIKALIEN,
ENZYME
UND
ANTIKOERPER
.
26
2.2.1
CHEMIKALIEN
.
26
2.2.2
ENZYME
.
26
2.2.3
ANTIKOERPER
.
27
2.3
PUFFER
UND
LOESUNGEN
.
2
7
2.3.1
LOESUNG
ZUR
METHYLENBLAU-FAERBUNG
VON
GEFRIER
UND
PARAFFINSCHNITTEN
.
27
2.3.2
LOESUNGEN
FUER
DIE
POLYMERASE-KETTENREAKTION
(PCR)
.
27
2.3.3
LOESUNGEN
FIIR
DIE
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
.
28
2.3.4
LOESUNGEN
FUER
DIE
POLVACRVLAMID-GELELEKTROPHORESE
.
28
2.3.5
LOESUNGEN
FIIR
DIE
SILBERFAERBUNG
.
29
2.3.6
LOESUNGEN
FUER
DIE
DNA-SEQUENZIERUNG
.
29
2.3.7
IMMUNHISTOLOGIE
.
29
2.3.7.1
REAGENZIEN
.
29
23.7.2
VECTASTAIN
ELITE
ABC
PEROXIDASE
UMVERSAL
KIT
(VECTOR
LABORATORIES,
INE.,
BURLINGAME,
CA,
USA)
.
30
2.4
OLIGONUKLEOTID-PRIMERFIIR
DIE
MIKROSATELLITEN-ANALYSE
.
30
2.5
P53
SEQUENZIERUNG
.
31
3
METHODEN
.
38
3.1
PRAEPARATION
VON
GEWEBESCHNITTEN
VOR
MIKRODISSEKTION.
.
38
3.1.1
ANFERTIGUNG
HISTOLOGISCHER
SCHNITTE
.
38
3.1.2
OBIEKTTRAEGERVORBEREITUNG
.
39
3.1.2.1
PARAFTMMATERIAL
AUF
GLASOBJEKTTRAEGER
.
39
3.1.2.2
GEFRIERGEWEBE
MIT
PEN-FOHE
.
39
3.1.2.3
PARAFFINMATENAL
MIT
PEN-FOLIE
.
40
3,2
DURCHFUEHRUNG
DER
MIKRODISSEKTION
.
40
3.2.1
MANUELLE
MIKRODISSEKTION
.
40
3.2.2
LASERMIKRODISSEKTION
.
41
3.2.3
MIKRODISSEKTION
ALTER
HE-ARCHIVSCHNITTE
.
45
3.2.4
ABKLATSCHPRAEOARATE
.
46
INHALTSVERZEICHNIS
3.2.5
DOKUMENTATION
.
46
5.5
ISOLIERUNG
GENOMISCHER
DNA
.
48
3.4
IMPROVED
PRIMER-EXTENSION-PREAMPLIFICATION
(I-PEP)-PCR
.
.
49
3.5
MIKROSATELLITEN-ANALYSE
(MA)
.
.
51
3.5.1
IN-VITRO-AMPLIFIKATION
GENOMISCHER
DNA
DURCH
POLVMERASE-KETTEN-REAKTION
(PCR)
.51
3.5.2
AUFTRENNUNG
VON
PCR-AMPLIFIKATEN
DURCH
POLVACRVLAMIDGEL-ELEKTROPHORESE
(PAGE)
.
52
3.5.3
SILBERFAERBUNE
VON
POLVACRVLAMIDGELEN
.
54
3.5.4
INTERPRETATION
DER
BANDENMUSTER
.
55
3.6
SEQUENZIERUNG
DESP53-GENS
.
55
3.6.1
VORBEREITUNG
DER
ZU
SEQUENZIERENDEN
PROBEN:
.
56
3.6.2
AMPLIFIZIERUNG
UND
REAKTIONSANSATZ
.
57
3.6.3
ETHANOLFALLUNG
ZUR
ENTFERNUNG
UEBERSCHUESSIGER
PRIMER
UND
(D)DNTPS
.
57
3.6.4
SEQUENZGELELEKTROOHORESE
.
57
5.7
IMMUNHISTOCHEMISCHE
FAERBUNGEN.
58
3.7.1
P53
UND
HER-2/NEU
.
.
58
3.7.2
HMLHL.
HMSH2
.
59
3.8
PROGNOSEBEWERTUNGSSKALA
NACH
POSSINGER.
.
6/
5.
9
STATISTISCHE
DATENAUSWERTUNG.
.
-
61
4
ERGEBNISSE
.
63
4.1
MAMMAKARZINOME
ALS
GENETISCH
INSTABILE
TUMOREN
.
.
63
4.1.1
METHODISCHE
ERFAHRUNGEN
.
63
4.1.2
MIKROSATELLITENINSTABILITAET
(MSI)
UND
CHROMOSOMALE
INSTABILITAET
(CIN)
BEIM
MAMMAKARZINOM
.
65
4.1.2.1
MSI
UND
CIN-FREQUENZ
PRO
PRIMER
.
65
4.1.2.2
MSI
UND
CIN-FREQUENZ
PRO
PNMAERTUMOR
.
66
4.1.2.3
ANALYSE
DER
MSI
IN
LYMPHKNOTENMETASTASEN
.
68
4.1
2.3.1
MSI
UND
CIN-FREQUENZ
PRO
PRIMER
.
68
4.1.2.3.2
MSI
UND
CIN-FREQUENZ
PRO
LYMPHKNOTENMETASTASE
.
69
4.1.3
WERT
DER
MIKRODISSEKTION
FUER
DIE
MA
.
69
4.1.4
TUMORHETEROGENITAET
.71
4.2
IMMUNHISTOCHEMIE
.
.
.
W.
72
4.3
P53-SEQUENZIERUNG.
.
74
4.4
POSSINGER-SCORE
.
76
4.5
HOCHDOSIS-CHEMOTHERAPIE
(HDCT)
UND
AUTOLOGE
STAMMZELLTRANSPLANTATION
(ASZT)
.
76
4.6
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
DER
DATEN
.
80
4.6.1
DESKRIPTIVE
DATENANALVSE
.
80
4.6.2
UNIVARIATE
ANALYSE
.
80
4.6.3
MULTIVARIATE
ANALYSE
BZGL.
GESAMTUEBERLEBEN
-
COX
REGRESSION
.
84
4.7
MSI
ALS
UNABHAENGIGER
NEGATIVER
PROGNOSEFAKTOR.
85
5
DISKUSSION
.
86
5.1
SPEZIFISCHE
GENETISCHE
ANALYSE
DURCH
MIKRODISSEKTION
.
.
86
5.2
BEDEUTUNG
DER
MIKROSATELLITEN-INSTABILITAET
(MSI)
FUER
DAS
MAMMAKARZINOM
.
89
5.2.1
INZIDENZ
DER
MSI
BEIM
MAMMAKARZINOM
.
89
5.2.2
GENETISCHE
INSTABILITAET
UND
TUMONGENESE
.
95
5.2
3
MSI
UND
KLINISCH-PATHOLOGISCHES
PROFIL
BEIM
MAMMAKARZINOM
.
98
5.2.3.1
MSI
UND
HISTOPATHOLOGISCHER
PHAENOTYP
.
98
5.2.3.2
ALTER
BEI
ERSTDIAGNOSE
.
99
5.2.3.3
TUMORGROESSE
(T)
UND
LYMPHKNOTENSTATUS
(N)
.
99
5.2.4
PROGNOSEFAKTOREN
BEIM
MAMMAKARZINOM
.
100
5.2.4.1
ETABLIERTE
PROGNOSEFAKTOREN
.
101
2
INHALTSVERZEICHNIS
S.2.4.2
MOLEKULARE
PROGNOSEFAKTOREN
.
103
5.2.4.2.
1
HER-2/NEU
.
103
5.2.4.2.2P53
.
104
5.2.4.2.3LOSS
OF
HETEROZYGOSITY
(LOH)
UND
CHROMOSOMALE
INSTABILITAET
(CIN)
.
105
5.2.4.2.4MSI
.
105
5.3
PERSPEKTIVEN
FUER
DIE
ONKOLOGIE.
_
_
_
.
_
.
108
6
ZUSAMMENFASSUNG
.
110
7
ANHANG
.
113
7.1
LITERATURVERZEICHNIS
.
.
113
7.2
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.123
7.3
DANKSAGUNG.
_
.
_
.
_
7.4
LEBENSLAUF.
.
_.
126
7.5
BIBLIOGRAPHIE
.
127
7.5.1
ORIGINALARBEITEN
.
127
7.5.2
KURZBEITRAEGE
.
127
7.5.3
VORTRAEGE
.
127
3 |
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