Untersuchung der Mitochondrienfunktion im Skelettmuskel von Patienten mit amyotropher Lateralsklerose:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
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1998
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| Beschreibung: | Magddeburg, Univ., Diss., 1998 |
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INHALTSVERZEICHNIS
SEILE
1. EINFUEHRUNG
1.1. DIE MITOCHONDRIALE OXIDATIVE PHOSPHORYLIERUNG UND
DAMIT ASSOZIIERTE ERKRANKUNGEN 1
1.2. BIOCHEMISCHE GRUNDLAGEN
1.2.1. MORPHOLOGIE DER MITOCHONDRIEN 4
1.2.2. DAS MITOCHONDRIALE GENOM 5
1.2.3. DAS PRINZIP DER OXIDATIVEN ENERGIEBEREITSTELLUNG 7
1.2.4. STRUKTUR UND FUNKTION DER NADH: COENZYM Q-OXIDOREDUKTASE 9
1.2.5. STRUKTUR UND FUNKTION DER CYTOCHROM C-OXIDASE 11
1.2.6. AKTIVITAETEN MITOCHONDRIALER ENZYME UND MENGENVERHAELTNISSE DER
ENZYMKOMPLEXE ZUEINANDER 12
1.3. HINWEISE FUER EINE MOEGLICHE MITOCHONDRIALE DYSFUNKTION BEI
AMYOTROPHER LATERALSKLEROSE (ALS) 15
1.4. ZIELSTELLUNG 18
2. MATERIALIEN UND METHODEN
2.1. MUSKELGEWEBSPROBEN
2.1.1. BESCHREIBUNG DER PATIENTENGRUPPEN UND DER KONTROLLGRUPPE 20
2.1.2. MAEUSE 21
2.2. MATERIALIEN
2.2.1. REAGENZIEN UND MATERIALIEN 21
2.2.2. PRAEPARATION VON SKELETTMUSKELHOMOGENAT 21
2.2.3. PRAEPARATION VON SKELETTMUSKELMITOCHONDRIEN 22
2.2.4. PRAEPARATION VON SAPONIN-PERMEABILISIERTEN SKELETTMUSKELFASERN 23
2.2.5. PRAEPARATION VON REDUZIERTEM CYTOCHROM
C
23
2.3. VERFAHREN ZUR BESTIMMUNG DER ENZYMAKTIVITAET
2.3.1. SPEKTROPHOTOMETRISCHE BESTIMMUNG DER AKTIVITAET MITOCHONDRIAL'
MATRIXENZYME: CITRATSYNTHASE (CS) UND ASPARTAT-AMINOTRANSFERASE 24
2.3.2. SPEKTROPHOTOMETRISCHE BESTIMMUNG DER ENZYMAKTIVITAET DER
NADH: UBICHINON- REDUKTASE (KOMPLEX I) 24
2.3.3. SPEKTROPHOTOMETRISCHE BESTIMMUNG DER ENZYMAKTIVITAET
DER NADH: CYTOCHROM
C
REDUKTASE (KOMPLEX I+III) 25
2.3.4. SPEKTROPHOTOMETRISCHE BESTIMMUNG DER ENZYMAKTIVITAET DER
SUCCINAT: CYTOCHROM C- REDUKTASE (KOMPLEX
N+M) 26
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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2.3.5. BESTIMMUNG DER ENZYMAKTIVITAET DER CYTOCHROM C-OXIDASE
(KOMPLEX IV)
2.3.5.1 ANWENDUNG DES KLASSISCHEN SPEKTROPHOTOMETRISCHEN VERFAHRENS 26
2.3.5.2. BESTIMMUNG DER ENZYMAKTIVITAET DER CYTOCHROM C-OXIDASE UNTER
ANWENDUNG VON DOPPELWELLENLAENGEN-ABSORPTIONSSPEKTROPHOTOMERTIE 26
2.3.5.3. BESTIMMUNG DER COX-AKTIVITAET MITTELS
HOCHAUFLOESUNGSRESPIROMETRIE 26
2.4. BESTIMMUNG DES CYTOCHROM AA
3- GEHALTES 28
2.5. BESTIMMUNG DER FLUSSKONTROLLKOEFFIZIENTEN DER KOMPLEXE I UND IV UND
DER MAXIMALEN ATMUNG ISOLIERTER MITOCHONDRIEN UND PERMEABILISIERTER
SKELETTMUSKELFASEM
2.5.1. ANWENDUNG DER METABOLISCHEN KONTROLLANALYSE 28
2.5.2. BESTIMMUNG DER MAXIMALEN ATMUNG VON SAPONIN-PERMEABILISIERTEN
SKELETTMUSKELFASEM 30
2.5.3. BESTIMMUNG DER MAXIMALEN ATMUNG VON ISOLIERTEN MITOCHONDRIEN 30
2.6. BESTIMMUNG DER PROTEINKONZENTRATION DER MITOCHONDRIENPRAEPARATIONEN
30
2.7. BESTIMMUNG DES EXTINKTIONSKOEFFIZIENTEN FUER CYTOCHROM C MITTELS
DWS BEI EINEM WELLENLAENGENPAAR VON 510-535 NM 30
2.8. STATISTIK 31
3. ERGEBNISSE
3.1. VERFAHREN ZUR AKTIVITAETSBESTIMMUNG VON ATMUNGSKETTENENZYMEN
3.1.1. AKTIVITAETEN MITOCHONDRIALER ENZYME BEI ANWENDUNG
KLASSISCHER SPEKTROPHOTOMETRISCHER VERFAHREN 32
3.1.2. AUFBAU EINER METHODE ZUR BESTIMMUNG DER COX-AKTIVITAET
MITTELS DWS 33
3.1.3. AKTIVITAET DER HUMANEN COX IM SKELETTMUSKEL 35
3.1.4. VERFAHREN ZUR AKTIVITAETSBESTIMMUNG DES KOMPLEX I DER
ATMUNGSKETTE IM HUMANEN SKELETTMUSKEL 42
3.1.5. PROPORTIONALITAET DER AKTIVITAETEN MITOCHONDRIALER ENZYME
IN ISOLIERTEN HUMANEN MITOCHONDRIEN UND IM
HUMANEN SKELETTMUSKELHOMOGENAT 45
3.2. UNTERSUCHUNG DER FUNKTION DER ATMUNGSKETTE IM SKELETTMUSKEL
VON PATIENTEN MIT ALS
3.2.1. AKTIVITAETEN MITOCHONDRIALER ENZYME IM SKELETTMUSKELHOMOGENAT 46
3.2.2. UNTERSUCHUNG DES MITOCHONDRIALEN FUNKTIONSDEFEKTES DURCH
HOCHAUFLOESUNGSRESPIROMETRIE UND ANWENDUNG DER
METHODE DER METABOLISCHEN KONTROLLANALYSE 47
3.3. UNTERSUCHUNG DER SAUERSTOFFABHAENGIGKEIT DES FLUSSKONTROLL-
KOEFFIZIENTEN DER COX SO
4. DISKUSSION
4.1. PROBLEME BEI DER AKTIVITAETSBESTIMMUNG MITOCHONDRIALER ENZYME
IM HUMANEN SKELETTMUSKEL 56
4.2. UNTERSUCHUNGSERGEBNISSE AM SKELETTMUSKEL VON PATIENTEN MIT ALS:
BEDEUTUNG FUER DIE KLINISCHE PRAXIS UND FUER DIE FORSCHUNG NACH
AETHIOLOGIE UND PATHOGENESE 62
5. ZUSAMMENFASSUNG 66
6. LITERATURVERZEICHNIS 68 |
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