CXCR4 als therapeutisches Target zur Beeinflussung der Monozytenfunktionen im Schlaganfall:
Gespeichert in:
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|---|---|
| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Jena
[2019?]
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ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.................................................................................................................
IV
1
ZUSAMMENFASSUNG
..................................................................................................................
1
2
EINLEITUNG
..................................................................................................................................
4
2.1
DER
ISCHAEMISCHE
SCHLAGANFALL
......................................................................................
4
2.1.1
EPIDEMIOLOGIE
................................................................................................................................
4
2.1.2
RISIKOFAKTOREN
UND
PATHOPHYSIOLOGIE
DES
SCHLAGANFALLS
.................................................................
4
2.1.3
THERAPIE
DES
SCHLAGANFALLS
.............................................................................................................
5
2.1.4
BEDEUTUNG
DER
IMMUNANTWORT
NACH
EINEM
SCHLAGANFALL
...............................................................
6
2.2
MIKROGLIAZELLEN
UND
MONOZYTEN
...................................................................................
6
2.2.1
EINTEILUNG
VON
MIKROGLIAZELLEN
UND
MONOZYTEN
UND
DEREN
PHYSIOLOGISCHE
FUNKTIONEN
.................
7
2.2.1.1
MIKROGLIAZELLEN
......................................................................................................................
7
2.2.1.2
MONOZYTEN
............................................................................................................................
8
2.2.2
ONTOGENESE
VON
MIKROGLIAZELLEN
UND
MONOZYTEN
..........................................................................
8
2.2.3
MIKROGLIA
UND
MONOZYTEN
BEI
HIRNERKRANKUNGEN
..........................................................................
9
2.2.4
PROBLEMATIK
DER
UNTERSCHEIDUNG
VON
MONOZYTEN
UND
MIKROGLIAZELLEN
BEI
HIRNERKRANKUNGEN....
11
2.2.4.1
MORPHOLOGIE
.......................................................................................................................
11
2.2.4.2
OBERFLAECHENMARKER
FUER
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
UND
IMMUNHISTOCHEMIE
...............................
11
2.2.4.3
REPORTER
..............................................................................................................................
12
2.2.4.4
INVASIVE
VERFAHREN
..............................................................................................................
13
2.3
CXCR4
UND
SEIN
LIGAND
CXCL12
(SDF-1)
................................................................
14
2.3.1
CHEMOKINE...................................................................................................................................
14
2.3.2
EXPRESSION
VON
CXCR4
UND
CXCL12
..............................................................................................
15
2.3.3
FUNKTION
VON
CXCR4
IN
DER
HAEMATOPOESE
UND
DER
KLINISCHE
EINSATZ
DES
CXCR4-ANTAGONISTEN
AMD3100
...................................................................................................................................................
16
2.3.4
CXCR4
ALS
THERAPEUTISCHES
TARGET
................................................................................................
16
2.3.4.1
BEDEUTUNG
VON
CXCR4
IN
DER
BEHANDLUNG
MALIGNER
ERKRANKUNG.........................................
17
2.3.4.2
BEDEUTUNG
VON
CXCR4
IN
DER
BEHANDLUNG
DES
SCHLAGANFALLS
...........................................
17
3
ZIELSETZUNG
DER
ARBEIT
..........................................................................................................
20
4
MATERIAL
UND
METHODIK
.........................................................................................................
22
4.1
MATERIAL
.................................................................................................................................22
4.1.1
GERAETE
UND
VERBRAUCHSMATERIALIEN
..............................................................................................
22
4.1.2
ANTIKOERPER
....................................................................................................................................
24
4.1.3
CHEMIKALIEN
..................................................................................................................................
27
4.1.4
PUFFER
UND
LOESUNGEN
.....................................................................................................................
30
4.1.5
TIERARZNEIMITTEL
............................................................................................................................
33
4.1.6
SOFTWARE
.......................................................................................................................................
33
4.2
METHODIK
.........................................................................................................................
34
4.2.1
MAEUSE
........................................................................................................................................
34
4.2.1.1
TIERVERSUCHSGENEHMIGUNG
...................................................................................................
34
4.2.1.2
MAUSMODELLE
.......................................................................................................................
34
4.2.1.3
HALTUNG
.................................................................................................................................
37
4.2.1.4 TAMOXIFEN
(TAM)
BEHANDLUNG
.............................................................................................
37
4.2.1.5
ANALGESIE/NARKOSE
...............................................................................................................
38
4.2.2
EXPERIMENTELLE
SCHLAGANFALLMODELLE
UND
NACHSORGE
...................................................................
38
4.2.2.1
PHOTOTHROMBOSE
(PT)
...........................................................................................................
38
4.2.2.2
TRANSIENTE
OKKLUSION
DER
MITTLEREN
CEREBRALARTERIE
(TMCAO)
.............................................
39
4.2.2.3
NACHSORGE
DER
TIERE
.............................................................................................................
39
4.2.3
IMMUNHISTOCHEMIE
(INC)
..............................................................................................................
41
4.2.3.1
TRANSKARDIALE
PERFUSION
UND
GEWEBE-LAGERUNG.................................................................
41
4.2.3.2
FREE-FLOATING
METHODE
.......................................................................................................
41
4.2.4
IN-SITU-H
YBRIDISIERUNG
(ISH)
..........................................................................................................
42
4.2.4.1
HERSTELLUNG
DER
35
S-RIBOSONDEN
..........................................................................................
42
4.2.4.2
PRAEHYBRIDISIERUNG/
HYBRIDISIERUNG/
DETEKTION
....................................................................
43
4.2.5
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
...................................................................................................................
44
4.2.6
TRANSWELL-MIGRATION-ASSAY
............................................................................................................
46
4.2.7
QUANTITATIVE-
PCR
(QPCR)
..............................................................................................................
47
4.2.8
AUSWERTUNG
..................................................................................................................................
47
4.2.8.1
IMMUNHISTOCHEMIE
.............................................................................................................
47
4.2.5.2
/N-S/TU-H
YBRIDISIERUNG
..........................................................................................................
53
4.2.5.3
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
..........................................................................................................
54
4.2.B.4
RNA-SEQUENZIERUNG/
AUSWERTUNG
DURCH
DIE
AG
VON
PROF.
DR.
SCHULTZE
................................
54
4.2.8.5
BLUTZELLZAEHLUNG
.....................................................................................................................
56
4.2.8.6
PRAESENTATION
DER
DATEN
UND
STATISTIKEN
...............................................................................
57
5
ERGEBNISSE
..............................................................................................................................58
5.1
PRAENATALE
MIKROGLIAZELLEN
SIND
CXCR4-NEGATIV
UND
BESIEDELN
DAS
EMBRYONALE
GEHIRN
UNABHAENGIG
VON
CXCL12
.................................................................... 58
5.2
CXCR4-EXPRESSION
UNTERSCHEIDET
MONOZYTEN
VON
MIKROGLIAZELLEN
...................
60
5.3
CXCR4-GFP
IDENTIFIZIERT
EINGEWANDERTE
MONOZYTEN
NACH
EXPERIMENTELLEM
SCHLAGANFALL
...............................................................................................
62
5.4
DAS
CXCR4-CREER-MAUSMODELL
ERMOEGLICHT
EINE
EFFIZIENTE
UND
LANGFRISTIGE
MARKIERUNG
MYELOIDER
ZELLEN
.................................................................................................
66
5.4.1
FATE-MAPPING
ALS
NEUE
STRATEGIE
ZUR
DARSTELLUNG
VON
MONOZYTEN
IM
GEHIRN
.............................
66
5.4.2
CHARAKTERISIERUNG
DES
CXCR4
CREER(T2HRES
EGFP
-KNOC/C/N-ALLELS
............................................................
68
5.5
VERFOLGUNG
VON
MONOZYTEN
IM
EXPERIMENTELLEN
SCHLAGANFALL
MIT
HILFE
DES
CXCR4
CREER(T2,
,RES
*EGFP
-MAUSMODELLS
........................................................................................
71
5.5.1
CHARAKTERISIERUNG
DES
MAUSMODELLS
IM
SCHLAGANFALL
...................................................................
71
5.5.2
MONOZYTEN
SIND
IM
SCHLAGANFALL
FUENFFACH
WENIGER
TEILUNGSAKTIV
ALS
MIKROGLIAZELLEN
..................
72
5.5.3
MONOZYTEN
INTEGRIEREN
SICH
NICHT
LANGFRISTIG
IM
INTAKTEN
HIRNGEWEBE
.......................................
74
5.6
MIKROGLIAZELLEN
UND
EINGEWANDERTE
MONOZYTEN
HABEN
UNTERSCHIEDLICHE
TRANSKRIPTIONSPROFILE
NACH
EINEM
EXPERIMENTELLEN
SCHLAGANFALL
...................................
77
5.7
CXCR4-KNOCKOUT
GEHT
MIT
REDUZIERTER
MONOZYTENINFILTRATION
EINHER
................
82
5.7.1
INDUZIERBARE
KONDITIONALE
DELETION
VON
CXCR4
UND
NACHVERFOLGUNG
CXCR4-
DEFIZIENTER
MONOZYTEN
IM
CXCR4
CREER/LOXP
;
/?26
CAGLSLTDT
-MODELL
........................................................................................................
82
5.7.2
CHARAKTERISIERUNG
DES
CXCR4
CREER/LOXP
;
R26
CAG
LSL
TDT
-KNOCKOUT-MODELLS
.........................................
84
5.7.3
UNTERSUCHUNG
DES
KONDITIONALEN
CXCR4-KNOCKOUTS
IM
PERMANENTEN
SCHLAGANFALLMODELL
(PHOTOTHROMBOSE)
.....................................................................................................................................
86
5.7.3.1
REDUZIERTE
MONOZYTENINFILTRATION
......................................................................................
86
5.73.2
REDUZIERTE
TEILUNGSAKTIVITAET
VON
MIKROGLIAZELLEN
...............................................................
87
6
DISKUSSION
..............................................................................................................................
91
6.1
CXCR4-GFP
UNTERSCHEIDET
EINDEUTIG
MONOZYTEN
VON
MIKROGLIAZELLEN
.............
91
6.1.1
UNTERSCHIEDLICHE
FUNKTIONEN
VON
MONOZYTEN
UND
MIKROGLIA
IM
SCHLAGANFALL
..............................
92
6.2
DAS
CXCR4
CREER
;/?26
CAG
LSL
TDT
-MODELL
BIETET
EINE
NEUE
UNIVERSELLE
STRATEGIE
ZUR
DAUERHAFTEN
MARKIERUNG
UND
VERFOLGUNG
VON
MONOZYTEN
........................................ 93
6.2.1
ERSTMALIGE
CHARAKTERISIERUNG
DER
MONOZYTENINFILTRATION
IM
SCHLAGANFALL
MIT
HILFE
EINES
MONOZYTEN-SPEZIFISCHEN
REPORTERS
UND
MITTELS
FATE-MAPPING
.................................................................
95
6.3
DER
SYSTEMISCHE
CXCR4-KNOCKOUT
MIT
EINEM
GENETISCHEN
MAUSMODELL:
IST
CXCR4
EIN
GEEIGNETES
THERAPEUTISCHES
TARGET
IM
SCHLAGANFALL?
..................................
96
6.3.1
ETABLIERUNG
EINES
KONDITIONALEN
CXCR4-KNOCKOUTS
MIT
NACHVERFOLGBAREN
MONOZYTEN
.................
96
6.3.2
DIE
AUSWIRKUNGEN
DES
CXCR4-KNOCKOUTS
IM
PERMANENTEN
SCHLAGANFALL.......................................
97
6.3.3
DIE
AUSWIRKUNGEN
DES
CXCR4-KNOCKOUTS
IM
REPERFUNDIERTEN
SCHLAGANFALL...................................
98
6.3.4
CXCR4/
CXCL12
HAT
KEINE
FUNKTION
BEI
EMBRYONALEN
MIKROGLIA-ENTWICKLUNG
...........................
100
7
SCHLUSSFOLGERUNGEN
............................................................................................................102
O
0
O
O
O
IN
K
A
IQ
8
LITERATUR-
UND
QUELLENVERZEICHNIS
...................................................................................
104
9
ANHANG
......................................................................................................................................
VI
STATISTIKEN
.......................................................................................................................
VI
FREMDDATEN
UND
METHODISCHE
UNTERSTUETZUNG
........................................................
XII
ROHDATEN
DER
RNA-SEQUENZIERUNG
...........................................................................XII
LEBENSLAUF
.....................................................................................................................
XIII
EHRENWOERTLICHE
ERKLAERUNG
.........................................................................................
XIV
DANKSAGUNG
...................................................................................................................
XV
WISSENSCHAFTLICHE
BEITRAEGE
......................................................................................
XVI
|
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