Der Nachweis von Insulin-Antikörpern: Analyse von Zellkulturüberständen ; Methodenvergleich RIA/ELISA ; Verbesserung der radioimmunologischen Messmethode
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1995
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INHALT
1.
EINLEITUNG
.
1
1.1.
AETIOLOGIE
DER
INSULIN-ANTIKOERPER
UND
-AUTOANTIKOERPER
.
1
1.2.
KLINISCHE
BEDEUTUNG
DER
INSULIN-ANTIKOERPER
UND
-AUTOANTIKOERPER
.
3
1.3.
KONTROVERSEN
UEBER
DIE
NACHWEISMETHODEN
VON
INSULIN-ANTIKOERPERN
UND
FRAGESTELLUNG
.
4
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
7
2.1.
GERAETE
.
7
2.1.1.
GAMMA
COUNTER
.
7
2.2.2.
ZENTRIFUGEN
.
7
2.1.3.
ABSAUGVORRICHTUNG
.
7
2.1.4.
MISCHER
.
8
2.1.5.
PH-EINSTELLUNGEN
.
8
2.1.6.
PRAEZISIONSWAAGE
.
8
2.1.7.
GERAETEAUSSTATTUNG
DER
AFFMITAETSCHROMATOGRAPHIE
.
8
2.1.8.
PHOTOMETER
.
8
2.1.9.
REAGENZIEN
UND
DOSIERHILFEN
.
9
2.1.9.1.
SPEZIELLE
REAGENZGEFAESSE
.
9
2.1.9.2.
DOSIERHILFEN
.
9
2.2.
CHEMIKALIEN
.
9
2.2.1.
LOESUNGEN
.
10
2.2.1.1.
FUER
DEN
RADIOIMMUNOASSAY
.
10
2.2.1.2.
FUER
DAS
ENZYMIMMUNOLOGISCHE
BESTIMMUNGSVEFAHREN
NACH
DER
ELIS
A-TECHNIK
.
11
2.2.1.3.
FUER
DIE
AFFMITAETSCHROMATOGRAPHIE
.
11
2.3.
INSULINE
.
12
2.3.1.
125
J-INSULIN
.
12
2.3.2.
BERECHNUNG
DER
TRACERKONZENTRATION
.
12
2.3.3.
NATIVE
INSULINE
.
13
2.4.
PROTEIN
A
SEPHAROSE
C1-4B
.
14
2.5.
UNTERSUCHUNGSMATERIAL
.
15
2.5.1.
INSULIN-ANTIKOERPER
.
15
2.5.1.1.
ZELLKULTURUEBERSTAENDE
DER
MAUS
.
15
2.5.1.2.
PATIENTENSEREN
.
16
2.6.
TESTSYSTEME
.
16
2.6.1.
RADIOUENMUNOASSAY
.
16
2.6.1.1.
ERSTELLUNG
VON
INSULINBINDUNGSKURVEN
.
17
2.6.2.
ELISA
.
19
2.6.3.
VERWENDUNG
DER
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
ZUR
INSULIN-ANTIKOERPERAUFTRENNUNG
.
20
2.7.
MATHEMATISCHE
AUSWERTUNG
.
21
2.8.
DIE
THEORIE
DER
ANTIGEN-ANTIKOERPERBINDUNG
.
22
2.8.1.
KOMPETITIVE
INSULINBINDUNG
.
22
2.8.2.
AUSWERTUNG
DER
ANTIKOERPERVERDUENNUNGSREIHEN
.
27
2.8.3.
DER
EINFLUSS
DES
MESSPROZESSES
AUF
DIE
ERGEBNISSE
.
31
2.8.4.
NUMERISCHE
AUSWERTUNG
.
35
3.
ERGEBNISSE
.
36
3.1.
VERDUENNUNGSREIHEN
.
36
3.2.
KOMPETITIVE
BINDUNGSKURVEN
MIT
HUMANINSULIN
.
41
3.3.
KOMPETITIVE
BINDUNGSKURVEN
MIT
SCHWEINE
UND
RATTENINSULIN
.
44
3.4.
BESTIMMUNG
VON
INSULIN-ANTIKOERPERN
IN
PATIENTENSEREN
.
46
4.
DISKUSSION
.
54
4.1.
PROBLEMSTELLUNG
UND
UNTERSUCHUNGSMATERIAL
.
54
4.1.1.
AUFBEREITUNG
DES
ZELLKULTURUEBERSTANDES
.
54
4.2.
TESTSYSTEME
.
55
4.2.1.
RADIOIMMUNOASSAY
.
55
4.2.1.1.
WAHL
DER
INSULINE
.
55
4.2.1.2.
WAHL
DER
TRENNPHASE
.
56
4.2.1.3.
WAHL
DER
INKUBATIONSPARAMETER
.
57
4.2.1.4.
BEDEUTUNG
DER
PH-KONSTANZ
.
58
4.2.1.5.
BEDEUTUNG
SOGENANNTER
ANTIADSOR
BENTIEN
UND
VON
NATRIUMCITRAT
.
58
4.2.1.6.
DEFINITION
DER
UNSPEZIFISCHEN
BINDUNG
.
59
4.2.2.
ELISA
.
59
4.3.
BINDUNGSMODELL
.
60
4.4.
UNTERSUCHUNGEN
ZU
DEN
ANTIKOERPERBINDUNGSEIGENSCHAFTEN
UND
INTERPRETATION
DER
MESSERGEBNISSE
.
62
4.4.1.
MESSUNGEN
AN
DEM
ZELLKULTURUEBERSTAND
D
.
62
4.4.2.
MESSUNGEN
AN
PATIENTENSEREN
.
65
5.
ZUSAMMENFASSUNG
.
68
6.
LITERATUR
.
70 |
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