Untersuchungen zur Funktion von Toll-like Rezeptoren bei der Infektion von oralen Epithelzellen mit Candida albicans:
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| 1. Verfasser: | |
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Herzogenrath
Shaker
2007
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| Ausgabe: | 1. Aufl. |
| Schriftenreihe: | Berichte aus der Medizin
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| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | Zugl.: München, Univ., Diss., 2007 |
| Beschreibung: | III, 139 S. Ill., graph. Darst. 210 mm x 148 mm, 221 gr. |
| ISBN: | 9783832268558 3832268553 |
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis I
INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG 1
1.1 Candida albicans 1
1.1.1 Morphogenese 2
1.1.2 Pathogenität und Virulenzfaktoren 3
1.1.3 Aufbau der Zellwand 6
1.1.4 Pharmakotherapie und antimykotische Forschung 8
1.2 Das menschliche Immunsystem 10
1.2.1 Das erworbene (adaptive) Immunsystem 10
1.2.2 Das angeborene Immunsystem 11
1.2.3 Toll-like Rezeptoren 12
1.2.4 Interaktionen von TLRs und C. albicans 16
1.3 Die orale humane Mukosa 18
1.3.1 Ultrastruktur und Funktion 18
1.3.2 Infektionen durch C. albicans 20
1.3.3 Immunabwehr bei oralen Kandidosen 21
1.3.4 Experimentelle Modelle der oralen Kandidose 23
1.4 Zielsetzung der Arbeit 24
2. MATERIAL UND METHODEN 27
2.1 Mikrobiologische Methoden 27
2.1.1 Verwendete Cand/da-Stämme und Synchronisation 27
2.1.2 Verwendete Cand/da-Präparationen 28
2.2 Zellbiologische Methoden 29
2.2.1 Verwendete Zellen 29
2.2.1.1 Orale Schleimhautzellinie 29
2.2.1.2 Humane Leukozyten 30
2.2.1.3 Ex-v/Vo-Schleimhautmodell 31
2.2.2 Stimulation mit den Cand/da-Stämmen und -Präparationen 31
2.2.2.1 Orale Schleimhautzellinie 32
2.2.2.2 Humane Leukozyten 33
II Inhaltsverzeichnis
2.2.2.3 Ex-Wvo-Schleimhautmodell 33
2.3 Biochemische Methoden 37
2.3.1 Limulus Amoebozyten Lysat (LAL)-Test 37
2.3.2 Laktatdehydrogenase (LDH)-Test 38
2.4 Immunologische Methoden 38
2.4.1 Cytometric Bead Array (CBA) 38
2.4.2 Enzyme-Iinked immunosorbent assay (ELISA) 39
2.4.3 Luminex-System 39
2.5 Mikroskopische Methoden 40
2.5.1 Lichtmikroskopie 40
2.5.2 Konfokale Fluoreszenzmikroskopie 41
2.5.3 Immunelektronenmikroskopie 42
2.6 Molekularbiologische Methoden 43
2.6.1 RNA-Isolierung 43
2.6.2 Reverse Transkription 45
2.6.3 Quantitative Real-time RT-PCR 45
2.7 Statistische Auswertungen 51
3. ERGEBNISSE 53
3.1 Charakterisierung des TLR-Genexpressionsmusters in oralen
Epithelzellen und Leukozyten 53
3.2 Untersuchung der TLR-Expression nach Stimulation mit C. albicans 55
3.2.1 Keine Modulation in Epithelzellen und Leukozyten 55
3.2.2 Induktion der epithelialen TLR4-Expression nach Integration
von Leukozyten in das Schleimhautmodell 63
3.3 Orale Epithelzellen ermöglichen direkte antifungale Abwehr durch
TLfW-vermittelten Signalweg 70
3.4 TLR-Genexpression nach Stimulation des Schleimhautepithels mit
CanoVda-Spezies und -Varietäten 79
3.4.1 Kein Einfluss der Virulenzfaktoren von C. albicans auf TLR4-
Induktion 79
Inhaltsverzeichnis III
3.4.2 R/74-Hochregulation ist abhängig von Cand/da-Spezies 80
3.5 Untersuchung der Zytokinexpression im Schleimhautmodell 81
3.5.1 Untergeordnete Rolle von IL-8 und GM-CSF im TLR4-Signalweg ....81
3.5.2 TLR4-Induktion ist unabhängig von freigesetzten Zytokinen
nach Integration von PMN 83
4. DISKUSSION 87
4.1 Transkriptionelle Regulation von TLRs durch C. alblcans 88
4.2 Die Bedeutung von TLR2 und TLR4 in der Erkennung von
C. albicans 90
4.3 Funktion von TLRs in der Erkennung von C. alblcans als
kommensalem Mikroorganismus 93
4.4 Immunologischer „Cross-talk zwischen Epithel und PMN 95
4.5 Ausblick 97
5. ZUSAMMENFASSUNG 101
6. LITERATURVERZEICHNIS 103
7. VERZEICHNIS EINGESETZTER MATERIALIEN 125
8. ABKÜRZUNGEN UND SYMBOLE 129
9. DANKSAGUNG 133
10. LEBENSLAUF 135
|
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Inhaltsverzeichnis I
INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG 1
1.1 Candida albicans 1
1.1.1 Morphogenese 2
1.1.2 Pathogenität und Virulenzfaktoren 3
1.1.3 Aufbau der Zellwand 6
1.1.4 Pharmakotherapie und antimykotische Forschung 8
1.2 Das menschliche Immunsystem 10
1.2.1 Das erworbene (adaptive) Immunsystem 10
1.2.2 Das angeborene Immunsystem 11
1.2.3 Toll-like Rezeptoren 12
1.2.4 Interaktionen von TLRs und C. albicans 16
1.3 Die orale humane Mukosa 18
1.3.1 Ultrastruktur und Funktion 18
1.3.2 Infektionen durch C. albicans 20
1.3.3 Immunabwehr bei oralen Kandidosen 21
1.3.4 Experimentelle Modelle der oralen Kandidose 23
1.4 Zielsetzung der Arbeit 24
2. MATERIAL UND METHODEN 27
2.1 Mikrobiologische Methoden 27
2.1.1 Verwendete Cand/da-Stämme und Synchronisation 27
2.1.2 Verwendete Cand/da-Präparationen 28
2.2 Zellbiologische Methoden 29
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2.2.1.1 Orale Schleimhautzellinie 29
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2.2.2 Stimulation mit den Cand/da-Stämmen und -Präparationen 31
2.2.2.1 Orale Schleimhautzellinie 32
2.2.2.2 Humane Leukozyten 33
II Inhaltsverzeichnis
2.2.2.3 Ex-Wvo-Schleimhautmodell 33
2.3 Biochemische Methoden 37
2.3.1 Limulus Amoebozyten Lysat (LAL)-Test 37
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2.4 Immunologische Methoden 38
2.4.1 Cytometric Bead Array (CBA) 38
2.4.2 Enzyme-Iinked immunosorbent assay (ELISA) 39
2.4.3 Luminex-System 39
2.5 Mikroskopische Methoden 40
2.5.1 Lichtmikroskopie 40
2.5.2 Konfokale Fluoreszenzmikroskopie 41
2.5.3 Immunelektronenmikroskopie 42
2.6 Molekularbiologische Methoden 43
2.6.1 RNA-Isolierung 43
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2.6.3 Quantitative Real-time RT-PCR 45
2.7 Statistische Auswertungen 51
3. ERGEBNISSE 53
3.1 Charakterisierung des TLR-Genexpressionsmusters in oralen
Epithelzellen und Leukozyten 53
3.2 Untersuchung der TLR-Expression nach Stimulation mit C. albicans 55
3.2.1 Keine Modulation in Epithelzellen und Leukozyten 55
3.2.2 Induktion der epithelialen TLR4-Expression nach Integration
von Leukozyten in das Schleimhautmodell 63
3.3 Orale Epithelzellen ermöglichen direkte antifungale Abwehr durch
TLfW-vermittelten Signalweg 70
3.4 TLR-Genexpression nach Stimulation des Schleimhautepithels mit
CanoVda-Spezies und -Varietäten 79
3.4.1 Kein Einfluss der Virulenzfaktoren von C. albicans auf TLR4-
Induktion 79
Inhaltsverzeichnis III
3.4.2 R/74-Hochregulation ist abhängig von Cand/da-Spezies 80
3.5 Untersuchung der Zytokinexpression im Schleimhautmodell 81
3.5.1 Untergeordnete Rolle von IL-8 und GM-CSF im TLR4-Signalweg .81
3.5.2 TLR4-Induktion ist unabhängig von freigesetzten Zytokinen
nach Integration von PMN 83
4. DISKUSSION 87
4.1 Transkriptionelle Regulation von TLRs durch C. alblcans 88
4.2 Die Bedeutung von TLR2 und TLR4 in der Erkennung von
C. albicans 90
4.3 Funktion von TLRs in der Erkennung von C. alblcans als
kommensalem Mikroorganismus 93
4.4 Immunologischer „Cross-talk" zwischen Epithel und PMN 95
4.5 Ausblick 97
5. ZUSAMMENFASSUNG 101
6. LITERATURVERZEICHNIS 103
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