Inhibitoren der "Acute Phase Response" aus Pilzen:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2000
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
1
1.1
DIE
BEDEUTUNG
DER
'
ACUTE
PHASE
RESPONSE
'
1
1.2
BETEILIGTE
SIGNALTRANSDUKTIONSWEGE
4
13
REGULATION
DER
'
ACUTE
PHASE
RESPONSE
'
6
2
ZIELE
DER
ARBEIT
8
3
MATERIAL
UND
METHODEN
9
3.1
CHEMIKALIEN
9
3.2
REINST-GASE
FUER
DIE
GASCHROMATOGRAPHIE
12
33
MEDIEN,
PUFFER
UND
LOESUNGEN
13
33.1
NAEHRMEDIEN
FUER
PILZE
UND
BAKTERIEN
13
3.3.2
MEDIEN
FUER
ZELLKULTUREN
15
3.3.3
PUFFER-UND
SALZLOESUNGEN
16
3.3.4
ENZYME
20
3.4
OLIGONUDEOTIDE
21
3.5
PLASMIDVEKTOREN
23
3.6
ORGANISMEN
26
3.6.1
BEARBEITETE
PILZSTAEMME
26
3.7
TESTORGANISMEN
FUER
DIE
BIOLOGISCHE
CHARAKTERISIERUNG
_
26
3.7.1
PILZE
UND
BAKTERIEN
26
3.7.2
ZELLINIEN
27
3.8
VERMEHRUNG
UND
LAGERUNG
VON
ZELLINIEN
UND
BAKTERIENKULTUREN
28
3.8.1
KULTIVIERUNG
EUKARYONTISCHER
ZELLKULTUREN
28
3.8.2
AUFBEWAHRUNG
DER
BAKTERIENKULTUREN
29
INHALTSVERZEICHNIS
3.9
BIOLOGISCHE
METHODEN
29
3.9.1
HERSTELLUNG
KOMPETENTER
E.
COLI-ZELLEN
(TOP
10F
'
)
29
3.9.2
TRANSFORMATION
VON
BAKTERIEN
30
3.9.3
ISOLIERUNG
UND
REINIGUNG
DER
NUKLEINSAEUREN
30
3.9.4
ENZYMREAKTIONEN
MIT
DNA
33
3.9.5
PHENOLEXTRAKTION
34
3.9.6
DNA-PRAEZIPITATION
35
3.9.7
KULTIVIERUNG
DER
PILZE
IN
SUBMERSKULTUR
35
3.9.8
FERMENTATIONSANALYSEN
37
3.10
CHROMATOGRAPHISCHE
TECHNIKEN
ZUR
REINIGUNG
UND
ANALYSE
DER
WIRKSTOFFE
38
3.10.1
SAEULENCHROMATOGRAPHIE
38
3.10.2
HPLC-ANALYSE
38
3.10.3
GASCHROMATOGRAPHISCHE
ANALYSE
39
3.11
STRUKTURAUFKLAERUNG
40
3.11.1
UV/VIS-UND
IR-SPEKTROSKOPIE
40
3.11.2
MASSENSPEKTROMETRIE
40
3.11.3
NMR-SPEKTROSKOPIE
40
3.12
METHODEN
ZUR
BIOLOGISCHEN
CHARAKTERISIERUNG
41
3.12.1
TRANSFEKTIONSMETHODEN
41
3.12.2
REPORTERGEN-ASSAYS
42
3.12.3
CYTOTOXIZITAETSTEST
43
3.12.4
REAKTION
MIT
L-CYSTEIN
44
3.12.5
EINBAU
RADIOAKTIV
MARKIERTER
VORSTUFEN
IN
SAEUREFAELLBARES
MATERIAL
IN
VIVO
_
44
3.12.6
WESTERN
IMMUNOBLOTTING
45
3.12.7
UNTERSUCHUNGEN
ZUM
EINFLUSS
DER
ISOLIERTEN
VERBINDUNGEN
AUF
DIE
DNA
BINDUNG
DER
AKTIVIERTEN
STAT3-DIMERE
MIT
HILFE
DES
GELSHIFT-ASSAYS
_
48
3.12.8
WEITERE
BIOLOGISCHE
TESTMETHODEN
_
49
VI
INHALTSVERZEICHNIS
4
ERGEBNISSE
51
4.1
ETABLIERUNG
EINES
ASSAYSYSTEMS
ZUR
SUCHE
NACH
INHIBITOREN
DER
'
ACUTE
PHASE
RESPONSE
'
51
4.1.1
ENTWICKLUNG
DER
REPORTERGENVEKTOREN
51
4.1.2
ENTWICKLUNG
DER
REPORTERGENVEKTOREN
MIT
VOLLSTAENDIGEN
PROMOTOREN
VON
'
ACUTE
PHASE
GENEN
'
54
4.1.3
OPTIMIERUNG
DER
TRANSFEKTIONSMETHODE
58
4.1.4
OPTIMIERUNG
DER
INDUKTIONSBEDINGUNGEN
58
4.2
SCREENING
NACH
INHIBITOREN
DER
'
ACUTE
PHASE
RESPONSE
'
60
43
ISOLIERUNG
VON
INHIBITOREN
DER
'
ACUTE
PHASE
RESPONSE*
61
4.3.1
GALIELLA-LACTON
AUS
DEM
ASCOMYCETEN
AL
1
1-95
61
4.3.2
CYLCOPENTENON-DERIVATE
AUS
DEM
ASCOMYCETEN
A23-98
66
4.3.3
5Z-FUSARIN
C
AUS
DEM
DEUTEROMYCETEN
75-97
78
4.4
BIOLOGISCHE
CHARAKTERISIERUNG
_
79
4.4.1
REPORTERGENASSAYS
ZUR
ANALYSE
DES
EINFLUSSES
DER
ISOLIERTEN VERBINDUNGEN
AUF
VERSCHIEDENE
SIGNALKASKADEN
79
4.4.2
CYTOTOXIZITAETSTEST
86
4.4.3
REAKTION
MIT
L-CYSTEIN
87
4.4.4
EINBAU
RADIOAKTIV
MARKIERTER
VORSTUFEN
IN
SAEUREFAELLBARES
MATERIAL
IN
VIVO
_
87
4.4.5
WESTERN
IMMUNOBLOTTING
_
89
4.4.6
EINFLUSS
VON
GALIELLA-LACTON
AUF
DIE
BINDUNG
VON
AKTIVIERTEN
STAT3-DIMEREN
AN
IHRE
BINDUNGSSTELLEN
AUF
DER
DNA
97
4.4.7
WEITERE
BIOLOGISCHE
CHARAKTERISIERUNG
98
5
DISKUSSION
99
5.1
ENTWICKLUNG
UND
ETABLIERUNG
EINES
TESTSYSTEMS
ZUR
SUCHE
NACH
INHIBITOREN
DER
'
ACUTE
PHASE
RESPONSE
'
99
5.1.1
WAHL
DES
REPORTERGENS
99
5.2
KLONIERUNG
DER
REPORTERGEN-VEKTOREN
100
53
ETABLIERUNG
EINER
TRANSFEKTIONSMETHODE
FUER
HEPG2-ZELLEN
UND
OPTIMIERUNG
DER
INDUKTIONSBEDINGUNGEN
101
5.4
SCREENING
NACH
INHIBITOREN
DER
'
ACUTE
PHASE
RESPONSE
'
102
VII
INHALTSVERZEICHNIS
5.5
INHIBITOREN
DER
'
ACUTE
PHASE
RESPONSE
'
103
5.5.1
GALIELLA-LACTON
AUS
DEM
ASCOMYCETEN
AL
11-95
103
5.5.2
CYCLOPENTENON-DERVIATE
AUS
DEM
ASCOMYCETEN
A23-98
105
5.6
AUFKLAERUNG
DER
WIRKUNGSWEISE
DER
ISOLIERTEN
INHIBITOREN
DER
'
ACUTE
PHASE
RESPONSE
'
107
5.6.1
EINFLUSS
DER
ISOLIERTEN
SUBSTANZEN
AUF
DIE
VERSCHIEDENEN
REPORTERGENASSAYS
107
5.6.2
EINFLUSS
DER
ISOLIERTEN
SUBSTANZEN
AUF
DIE
AKTIVITAET
DER
JANUS-KINASEN
UND
DER
MAP-KINASE
KINASEN
(MKK3/6)
116
5.6.3
EINFLUSS
VON
GALIELLA-LACTON
AUF
DIE DNA-BINDUNG
AKTIVIERTER
STAT3-DIMERE
117
5.7
ZUSAMMENFASSUNG
DER
WIRKUNGEN
VON
GALIELLA-LACTON
UND
CPDHC
IN
DEN
VERSCHIEDENEN
TEST-SYSTEMEN
121
6
ZUSAMMENFASSUNG
124
7
LITERATURVERZEICHNIS
125
8
ANHANG
142
VIII |
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