Nachweis von Deletionen der Tumor Suppressor Gene TP53 und RB1 bei chronischen B-Zell Leukämien mit Hilfe der Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierung, und Beurteilung der prognostischen Bedeutung dieser chromosomalen Aberrationen:
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1998
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INHALTSVERZEICHNIS
I
INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG . 1
1.1. DIE BEDEUTUNG CHROMOSOMALER VERAENDERUNGEN IN DER ONKOLOGISCHEN . 1
FORSCHUNG
1.1.1. DAS TUMOR SUPPRESSOR GEN
TP53
. 3
1.1.2. DAS TUMOR SUPPRESSOR GEN
RB1
. 7
1.2. CHRONISCHE B-ZELL LEUKAEMIEN .11
1.2.1. DIE CHRONISCH LYMPHATISCHE LEUKAEMIE VOM B-ZELL-TYP . 11
1.2.2.
DIE PROLYMPHOZYTEN LEUKAEMIE VOM B-ZELL-TYP (B-PLL)
. 12
1.2.3. DER MORBUS WALDENSTROEM .12
1.3. KLINISCHE PARAMETER - IHRE BEDEUTUNG FUER DIAGNOSE UND PROGNOSE . 13
1.4. ZYTOGENETISCHE ANALYSE VON CHRONISCHEN B-ZELL LEUKAEMIEN . 14
1.5. DIE FLUORESZENZ IN-SITU HYBRIDISIERUNG (FISH) - EINE NEUE METHODE
DER . 16
DIAGNOSTIK CHROMOSOMALER ABERRATIONEN
1.6. ZIELSETZUNG DER ARBEIT . 17
2. MATERIAL UND METHODEN .19
2.1. PATIENTEN . 19
2.2. PROBANDEN . 20
2.3. ZELLPRAEPARATION . 20
2.3.1.
ISOLIERUNG DER MONONUKLEAEREN ZELLFRAKTION AUS BLUT UND KNOCHENMARK
.20
2.3.2.
ISOLIERUNG DER MONONUKLEAEREN ZELLFRAKTION AUS LYMPHKNOTEN- UND
MILZGEWEBE
. 21
2.3.3. DIE YYDIREKTE" ERNTE .21
2.3.4.
HERSTELLUNG DER PRAEPARATE
. 21
2.3.5.
VORBEHANDLUNG DER PRAEPARATE FUER DIE FISH-EXPERIMENTE
.22
2.4. DNA-PROBEN FUER FISH-EXPERIMENTE .22
2.4.1. BIOTINYLIERUNG UND DIGOXIGENIERUNG VON DNA-PROBEN DURCH
NICK-TRANSLATION
. 23
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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INHALTSVERZEICHNIS
II
2.5. CHROMOSOMALE IN-SITU SUPPRESSIONS (CISS) HYBRIDISIERUNG . 24
2.5.1.
VORBEREITUNG DER PROBEN-DNA
.24
2.5.2. VORBEREITUNG DER PATIENTEN-DNA .
25
2.5.3. HYBRIDISIERUNG . 25
2.5.4. DETEKTION . 25
2.6. MIKROSKOPISCHE UND FOTOGRAFISCHE DOKUMENTATION . 26
2.7. STATISTISCHE AUSWERTUNG . 27
2.7.1. DIE MULTIVARIATE ANALYSE . 27
2.8. REAGENZIEN UND CHEMIKALIEN . 28
3. ERGEBNISSE . 30
3.1. ERGEBNISSE DER FLUORESZENZ IN-SITU HYBRIDISIERUNG (FISH) .30
3.1.1. ERGEBNISSE DER FLUORESZENZ ISH MIT EINER 7?B/-SPEZIFISCHEN
GENSONDE . 30
3.1.1.1. PROBANDEN . 30
3.1.1.2. PATIENTEN MIT B-CLL . 32
3.1.1.3.
PATIENTEN MIT B-PLL
.36
3.1.1.4.
PATIENTEN MIT MORBUS WALDENSTROEM
. 36
3.1.2. ERGEBNISSE DER FLUORESZENZ ISH MIT EINER 7753-SPEZIFISCHEN
GENSONDE . 38
3.1.2.1. PROBANDEN . 38
3.1.2.2. PATIENTEN MIT B-CLL . 40
3.1.2.3. PATIENTEN MIT B-PLL . 43
3.1.2.4.
PATIENTEN MIT MORBUS WALDENSTROEM
. 44
3.2. KORRELATION MIT KLINISCHEN PARAMETERN . 49
3.2.1. VERGLEICH KLINISCHER PARAMETER VON 197 B-CLL-PATIENTEN .
49
MIT UND OHNE 7?7? 7-DELETION
3.2.2.
VERGLEICH KLINISCHER PARAMETER VON 197 B-CLL-PATIENTEN
.51
MIT UND OHNE 77\53-DELETION
3.3. MULTIVARIATE ANALYSE . 53
4. DISKUSSION . 54
4.1. STAND DER FORSCHUNG .54
INHALTSVERZEICHNIS
III
4.2. VERGLEICH VERSCHIEDENER METHODEN ZUM NACHWEIS CHROMOSOMALER
ABERRATIONEN BEI DER CHRONISCH LYMPHATISCHEN B-ZEIL LEUKAEMIE .SS
4.2.1. CHROMOSOMALE BAENDERUNGSTECHNIKEN .55
4.2.2. DIE SOUTHERN BLOT-ANALYSE .56
4.2.3. DIE PCR-SSCP-ANALYSE .56
4.2.4. DIE FLUORESZENZ IN-SITU HYBRIDISIERUNG .56
4.3. DISKUSSION DER ERGEBNISSE .57
4.3.1. DAS AELW-TUMOR SUPPRESSOR GEN .57
4.3.1.1. NACHWEIS VON 7-DELETIONEN BEI CHRONISCHEN B-ZELL LEUKAEMIEN MIT
HILFE DER FLUORESZENZ IN-SITU HYBRIDISIERUNG .57
4.3.1.2. UNTERSCHIEDLICHE INZIDENZEN VON 7?5/-DELETIONEN BEI DER B-CLL:
VERGLEICH DER ERGEBNISSE VON UNTERSUCHUNGEN MIT FLUORESZENZ ISH,
BAENDERUNGSANALYSEN, SOUTHERN BLOT UND PCR-SSCP .57
4.3.1.3. DIE PATHOGENETISCHE BEDEUTUNG DES 7?I?7-TUMOR SUPPRESSOR GENS
FUER DIE
CHRONISCH LYMPHATISCHE LEUKAEMIE . 58
4.3.1.4. HINWEISE AUF DIE LOKALISATION UND DIE PATHOGENETISCHE BEDEUTUNG
EINES NEUEN
TUMOR SUPPRESSOR GENS AUF 13QL4 IM BEREICH DES MARKERS D13S25 . 59
4.3.2. DAS TPSI-TUMOR SUPPRESSOR GEN .60
4.3.2.1. NACHWEIS VON 77\55-DELETIONEN BEI CHRONISCHEN B-ZELL LEUKAEMIEN
MIT
HILFE DER FLUORESZENZ IN-SITU HYBRIDISIERUNG .60
4.3.2.2. UNTERSCHIEDLICHE INZIDENZEN VON 7P55-DELETIONEN BEI DER B-CLL:
VERGLEICH DER ERGEBNISSE VON UNTERSUCHUNGEN MIT FLUORESZENZ ISH,
BAENDERUNGSANALYSEN, SOUTHERN BLOT UND PCR-SSCP .60
4.3.2.3. DIE PATHOGENETISCHE BEDEUTUNG DES /?/-TUMOR SUPPRESSOR GENS
FUER DIE
CHRONISCH LYMPHATISCHE LEUKAEMIE . 60
4.4. KLINISCHE KORRELATION .61
4.4.1. UEBERBLICK UEBER DIE WICHTIGSTEN KLINISCHEN UND LABORCHEMISCHEN
PROGNOSEFAKTOREN FUER DIE CHRONISCH LYMPHATISCHE B-ZELL LEUKAEMIE .61
4.4.2. UEBERBLICK UEBER VERSCHIEDENE REKURRENTE CHROMOSOMALE ABERRATIONEN
BEI DER
B-CLL UND IHRE PROGNOSTISCHE AUSSAGEKRAFT .62
4.4.3. VERGLEICH DER PROGNOSTISCHEN AUSSAGEKRAFT KLINISCHER PARAMETER
MIT DER VON
AESS/-DELETIONEN BEI DER B-CLL .62
4.4.4. VERGLEICH DER PROGNOSTISCHEN AUSSAGEKRAFT KLINISCHER PARAMETER
MIT DER VON
7!P53-DELETIONEN BEI DER B-CLL .63
INHALTSVERZEICHNIS
IV
4.5. SCHLUSSFOLGERUNG .64
5. ZUSAMMENFASSUNG .65
6. ABKUERZUNGSVERZEICHNIS . 66
7. LITERATURVERZEICHNIS . 67
8. LEBENSLAUF . 87
9.
DANKSAGUNG
88 |
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