Experimentelle Untersuchung zur Rolle der angeborenen Immunantwort und der Wirtsspezifität von Salmonella enterica Serovaren:
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Sprache: | German |
Veröffentlicht: |
Berlin
Mensch und Buch Verl.
2011
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Beschreibung: | Nebentitel: The role of innate Immunity and host specificity in Salmonella infection in vitro |
Beschreibung: | LXIV, 154 S. Ill., graph. Darst. |
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I N H A L T S V E R Z E I C H N I S
I N H A L T S V E R Z E I C H N I S I
T A B E L L E N V E R Z E I C H N I S IV
A B B I L D U N G S V E R Z E I C H N I S V
A B K UE R Z U N G S V E R Z E I C H N I S VII
1. E I N L E I T U N G 1
2. T H E O R E T I S C H E G R U N D L A G E N 2
2.1 GRUNDLAGEN ZUR GATTUNG SALMONELLA 2
2.1.1 BEDEUTUNG DER GATTUNG SALMONELLA 2
2.1.2 TAXONOMIE 3
2.1.3 DIE WIRTSSPEZIFITAET DER SALMONELLEN 5
2.1.4 AETIOLOGIE UND KLINISCHE SYMPTOMATIK IN DEN WIRTEN: SCHWEIN, MAUS
UND MENSCH 7
2.1.5 SALMONELLENINFEKTION: PATHOGENESE UND VIRULENZMECHANISMEN 9
2.2 IMMUNOLOGISCHE GRUNDLAGEN 14
2.2.1 DAS IMMUNSYSTEM 14
2.2.2 DAS ANGEBORENE IMMUNSYSTEM 15
2.2.3 PATTERN RECOGNITION RECEPTORS - PRRS 19
2 . 2 . 4 DER TRANSKRIPTIONSFAKTOR N F - K B 29
2.3 SALMONELLA UND DIE IMMUNOLOGISCHE WIRTSANTWORT 31
2.4 ZIEL DER VORLIEGENDEN ARBEIT 34
3. M A T E R I A L U N D M E T H O D E N 36
3.1 VERWENDETE ZELLLINIEN 36
3.2 ZELLBIOLOGISCHE METHODEN 36
3.2.1 STANDARDZELLKULTUR 36
3.2.2 MEDIEN FUER DIE ZELLKULTUR UND ZELLKULTURMEDIUMZUSAETZE 36
3.2.3 MYKOPLASMENTEST 37
3.2.4 SUBKULTIVIERUNG VON ZELLEN 37
3.2.5 ZELLZAHLBESTIMMUNG UND VITALFAERBUNG 38
3.2.6 KRYOKONSERVIERUNG UND REKULTIVIERUNG VON ZELLEN 38
3.2.7 INFEKTIONSTEST ODER MODIFIZIERTER GENTAMICIN-PROTECTION ASSAY 39
3.2.8 TRANSIENTE TRANSFEKTION 40
3.2.9 CHEMOLUMINESZENZ UND MESSUNG DER NF-ICB-AKTIVIERUNG 43
3.3 BAKTERIENSTAEMME.. 44
3.4 MIKROBIOLOGISCHE METHODEN 45
3.4.1 NAEHRMEDIEN FUER DIE BAKTERIENKULTUR 45
3.4.2 BAKTERIENANZUCHT 45
3.4.3 BESTIMMUNG DER BAKTERIENZAHL 45
3.4.4 KRYOKONSERVIERUNG VON BAKTERIEN 46
3.4.5 ERSTELLUNG EINER WACHSTUMSKURVE 46
3-.4.6 TRANSFORMATION VON . CO//-BAKTERIEN 46
3.4.7 UV-LNAKTIVIERUNG VON S. TYPHIMURIUM DT104 46
3.5 MIKROSKOPISCHE METHODEN 47
3.5.1 FIXIERUNG VON ZELLEN 47
3.5.2 HISTOCHEMISCHE FAERBUNG UND EINDECKEN DER PRAEPARATE 47
3.5.3 FLUORESZENZMIKROSKOPIE 48
I
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IMAGE 2
3.5.4 QUANTITATIVE AUSWERTUNG DER TRANSFEKTIONSEFFIZIENZ UND
INVASIVITAETVON
DEN SALMONELLA- SEROVAREN 48
3.6 MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 49
3.6.1 ISOLIERUNG VON RNA 49
3.6.2 DNASE-BEHANDLUNG DER RNA-PROBEN 49
3.6.3 REINIGUNG DER NUKLEINSAEURE MITTELS PHENOL-CHLOROFORM-EXTRAKTION 49
3.6.4 ISOLIERUNG VON PLASMID-DNA 50
3.6.5 RESTRIKTIONSENDONUKLEASEVERDAU DER PLASMID-DNA 50
3.6.6 KONZENTRATIONSBESTIMMUNG VON NUKLEINSAEUREN 51
3.6.7 REVERSE TRANSKRIPTIONS-POLYMERASEKETTENREAKTION (RT-PCR) 51 3.6.8
POLYMERASEKETTENREAKTION 52
3.6.9 AGAROSEGELELEKTROPHORESE 53
3.6.10 KLONIERUNG DES PORCINEN NOD1 UND NOD2 UND SEQUENZIERUNG 53 3.6.11
UNTERSUCHUNG DER PORCINEN NOD1- UND NOD2-SEQUENZ 56
3.6.12 ERSTELLUNG DES PORCINEN NOD1 UND NOD2 PHYLOGENETISCHEN
BAUMES....57
3.7 MATERIALIEN 57
3.7.1 OLIGONUKLEOTIDE 57
3.7.2 PLASMIDE 59
3.7.3 CHEMIKALIEN, ENZYME UND FLUORESZENZFARBSTOFFE 59
3.7.4 KITS, LOESUNGEN UND MEDIEN 60
3.7.5 VERBRAUCHSMATERIAL 60
I 3.7.6 GERAETE 60
3.8 STATISTISCHE METHODEN 62
4. E R G E B N I S S E 63
4.1 ERMITTLUNG DER SALMONELLA- WACHSTUMSKURVEN 63
4.2 SA/MONE//A-LNFEKTIONSVERSUCH 64
4.2.1 KBE IN PORCINEN ZELLEN 64
4.2.2 KBE IN MURINEN ZELLEN 66
4.2.3 KBE IN HUMANEN ZELLEN 67
4.2.4 BERECHNUNG DER STEIGUNG M AUS DEN KBE-KURVEN 69
4.2.5 BERECHNUNG DER RELATIVEN ANZAHL INTRAZELLULAERER SALMONELLEN 2H P.
/ . 71 4.2.6 BERECHNUNG DER RELATIVEN ANZAHL INTRAZELLULAERER SALMONELLEN
4H P. /. UND 24H P. I. 73
4.2.7 VERGLEICH DER RELATIVEN ANZAHL INTRAZELLULAERER SALMONELLEN IN
EPITHELIALEN UND MAKROPHAGENAEHNLICHEN ZELLEN 76
4.3 MIKROSKOPISCHE AUSWERTUNG DER GFP-SALMONELLENINFEKTION 78
4.3.1 BERECHNUNG DER ANZAHL INTRAZELLULAERER GFP-SALMONELLEN PRO
EINZELZELLE .80 4.3.2 DARSTELLUNG DER RELATIVEN ANZAHL INTRAZELLULAERER
GFP-SALMONELLEN 81 4.3.3 DARSTELLUNG DER GESAMTZELLZAHL NACH
SALMONELLENINFEKTION 4H P. / . UND 24H P. /. 82
4.4 TRANSFEKTION DER ZELLLINIEN 83
4.5 CHEMOLUMINESZENZVERSUCH (NF-XB-AKTIVIERUNG) 84
4.5.1 RLU IN PORCINEN ZELLEN 85
4.5.2 RLU IN MURINEN ZELLEN 86
4.5.3 RLU IN HUMANEN ZELLEN 88
4.5.4 WEITERFUEHRENDE STATISTISCHE AUSWERTUNG ZUM CHEMOLUMINESZENZVERSUCH
89
4.6 KORRELATION ZWISCHEN DEN ERGEBNISSEN DER INFEKTIONS- UND
CHEMOLUMINESZENZVERSUCHE 92
4.7 NACHWEIS DER NOD-EXPRESSION 96
4.7.1 NOD-EXPRESSION IN PORCINEN ZELLLINIEN UND PORCINEM DARMGEWEBE 96
II
IMAGE 3
4.7.2 NOD-EXPRESSION IN MURINEN UND HUMANEN ZELLLINIEN 97
4.8 UNTERSUCHUNG DER PORCINEN NOD-SEQUENZ 98
4.8.1 DAS PORCINE NOD1 UND NOD2 SOWIE DIE SEQUENZVERGLEICHE 98 4.8.2
MOLEKULARE PHYLOGENIE VON PORCINEM NOD 98
4.8.3 UNTERSUCHUNG DER PORCINEN NOD1- UND NOD2-DOMAENENSTRUKTUR 105
5. D I S K U S S I O N 110
5.1 DIE ROLLE DER SA/MONE//A-WACHSTUMSKURVEN 110
5.2 DIE SEROVARE-BEDEUTUNG UND DIE ERGEBNISSE DER SALMONELLA
INFEKTIONSVERSUCHE 111
5.3 DIE INTRAZELLULAEREN GFP-SALMONELLEN UND SIFS 120
5.4 WELCHE ROLLE SPIELEN DIE GFP-MARKIERTEN SALMONELLEN? 122
5.5 DIE BEDEUTUNG DER SA/MONE//A-WIRTSSPEZIFITAET 130
5.6 DIE NF-KB-AKTIVIERUNG DURCH EINE SALMONELLA- INFEKTION 133
5.7 DIE UNTERDRUECKUNG DER ZELLULAEREN NF-KB-AKTIVIERUNG DURCH DIE
SA/MONE//A-LNFEKTION 135
5.8 DIE GERINGE NF-KB-AKTIVIERUNG DURCH BAKTERIELLES LPS 136
5.9 DIE MODIFIZIERUNG VON MAMPS UM DIE NF-KB-AKTIVIERUNG ZU UMGEHEN 138
5.10 DIE KORRELATION DER DATEN AUS DEN INFEKTIONSVERSUCHEN MIT DEN N F -
K B AKTIVIERUNGSVERSUCHEN UND DIE ROLLE DES FAKTORS ZEIT 140
5.11 DIE NOD-EXPRESSION 142
5.12 DIE BEDEUTUNG DES SEQUENZVERGLEICHES UND ROLLE DES PORCINEN NOD 143
5.13 SALMONELLENINFEKTION UND CATERPILLER - EIN WISSENSCHAFTLICHER
AUSBLICK .145
6. Z U S A M M E N F A S S U N G 151
7. S U M M A R Y 153
A N H A N G XII
BERECHNETE STEIGUNG M ANHAND DER INTRAZELLULAEREN SALMONELLENVERMEHRUNG
ZWISCHEN DEN ZEITPUNKTEN 2H P. /. UND 24H P. /. (THP-1S, SUSPENSION) XII
BERECHNETE STEIGUNG M ANHAND DER INTRAZELLULAEREN SALMONELLENVERMEHRUNG
ZWISCHEN DEN ZEITPUNKTEN 4H P. /. UND 24H P. (THP-1A UND THP-1S) XIII
DARSTELLUNG DER INITIALEN INVASIONSRATEN 2H P. / . (THP-1S, SUSPENSION)
XIV DARSTELLUNG DER RELATIVEN ANZAHL INTRAZELLULAERER SALMONELLEN 4H P.
/. UND 24H P. / . (THP-1S, SUSPENSION) XV
DARSTELLUNG DES NUKLEOTIDSEQUENZVERGLEICHES ZWISCHEN PNOD1 (DIESE
ARBEIT, (1)) UND PORCINEM NOD1 (AB187219.1, (2)) XVII
DARSTELLUNG DES NUKLEOTIDSEQUENZVERGLEICHES ZWISCHEN PNOD2 (DIESE
ARBEIT, (1)) UND PNOD2 (AB195466.1 (2)) XIX
DARSTELLUNG DER SEKUNDAERSTRUKTUR DES PORCINEN NOD1 XXI
DARSTELLUNG DER SEKUNDAERSTRUKTUR DES PORCINEN NOD2 XXIII
L I T E R A T U R XXV
V E R Z E I C H N I S E I G E N E R P U B L I K A T I O N E N LXII
D A N K S A G U N G LXIII
E I D E S S T A T T L I C H E E R K L AE R U N G LXIV
III
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