Neue Verfahren zur Produktion von Plasmid-DNA als Biopharmazeutikum:
Gespeichert in:
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2001
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1
EINLEITUNG
1.1
Z
ELE
DER
A
RBEIT
.
2
2
THEORETISCHER
HINTERGRUND
_
4
2.1
P
LASMIDE
.
4
2.1.1
REPLIKATION
UND
KOPIENZAHL
.
4
2.1.2
STABILITAET
VON
PLASMIDEN
.5
2.1.3
ISOFORMEN
VON
PLASMIDEN
.6
2.1.4
SUPERSPIRALISIERUNG
VON
DNA
.
8
2.1.5
PLASMIDFORMENANALYSE
.
9
2.2
S
OMATISCHE
G
ENTHERAPE
UND
GENETISCHE
I
MPFUNG
.
10
2.2.1
EINSATZMOEGLICHKEITEN
.
11
2.2.2
VEKTOREN
FUER
DIE
SOMATISCHE
GENTHERAPIE.12
2.2.3
GENETISCHE
IMPFUNG
.
.16
2.2.4
PRODUKTION
UND
QUALITAETSKONTROLLE
VON
PLASMID-DNA
ALS
BIOPHARMAZEUTIKUM
.
19
2.3
K
ULTIVIERUNG
VON
E
SCHERICHIA
COU
.
21
2.3.1
NAEHRMEDIEN
.
22
2.3.2
STOSSWECHSEL
VON
ESCHERICHIA
COLI
.
22
2.3.3
SAUERSTOFFVERSORGUNG
.
28
2.3.4
WACHSTUMSKINETIK
.29
2.3.5
ZULAUFKULTIVIERUNGEN
.
33
2.4
PROZESSTECHNISCHE
VERFAHREN
ZUR
HOCHZELLDICHTEKULTIVIERUNGEN
VON
ESCHERICHIA
COU
.
34
2.5
DNA-A
NALYSE
MITTELS
K
APILLARGELELEKTROPHORESE
.37
2.5.1
THEORIE
DER
KAPILLARELEKTROPHORESE
(
CE)
.
37
2.5.2
ELEKTROPHORETISCHE
BEWEGLICHKEIT
.
39
2.5.3
TRENNLEISTUNG
UND
AUFLOESUNG
.
40
2.5.4
KAPILLARGELELEKTROPHORESE
.
42
2.5.5
ANALYSE
VON
PLASMID-DNA
.
43
3
MATERIAL
UND
METHODEN
_
.
_
.
_
.
_
_
44
3.1
G
ERATE
UND
C
HEMIKALIEN
.
44
3.2
B
AKTERIENSTAMME
UND
P
LASMIDE
.
44
3.3
K
ULTIVIERUNG
VON
B
AKTERIEN
.
45
3.3.1
MEDIEN
.45
3.3.2
STAMMHALTUNG.
.48
3.3.3
HERSTELLUNG
KOMPETENTER
ZELLEN
UND
TRANSFORMATION
VON
PLASMID-DNA
.
48
3.3.4
KULTIVIERUNG
IM
SCHUETTELKOLBEN
.49
3.3.5
KULTIVIERUNG
IM
BIOREAKTOR
.49
3.4
A
NALYTIK
.
55
3.4.1
OPTISCHE
DICHTE
.55
3.4.2
BIOTROCKENMASSE
.
55
3.4.3
SEGREGATIVE
PLASMIDSTABILITAET
.
55
3.4.4
ORTHO-PHOSPHAT
.56
3.4.5
AMMONIAK
.
56
3.4.6
ACETAT
.56
3.4.7
GLYCERIN
.
56
3.4.8
GLUTAMAT
.
56
3.4.9
ISOLIERUNG
VON
PLASMID-DNA
.
57
3.4.10
KAPILLARGELELEKTROPHORESE
.
58
3.4.11
AGAROSE-FLACHGELELEKTROPHORESE
.
60
3.5
E
RZEUGUNG
VON
OC
-P
LASMID
-DNA-F
ORMEN
.
60
3.6
E
RZEUGUNG
VON
(
PARTIELL
-)
LINEARISIERTER
P
LASMID
-DNA
.
60
3.7
E
RZEUGUNG
VON
P
LASMID
-DNA
M
ULTIMEREN
.61
3.8
E
XTRAKTION
VON
P
LASMID
-DNA
AUS
A
GAROSEGELEN
.61
4
ERGEBNISSE
UND
DISKUSSION
_
62
4.1
P
RODUKTION
VON
P
LASMIDMULTIMEREN
.
62
4.1.1
HERSTELLUNG
MULTIMERPRODUZIERENDER
E.
COLI-KLONE.
62
4.1.2
ANALYTIK
DER
PUT649-MULTIMERE
MIT
AGAROSE
UND
KAPILLARGELELEKTROPHORESE
.
65
4.1.3
STRUKTURELLE
STABILITAET
DER
MULTIMERE
BEI
LANGZEITKULTIVIERUNGEN
.
75
4.1.4
PRODUKTION
DER
PUT649-MULTIMERE
IM
7
L-BIOREAKTOR
.
77
4.2
S
TEIGERUNG
DES
P
LASMIDMASSENANTEILS
BEI
DER
K
ULTIVIERUNG
VON
P
LASMIDEN
MIT
NIEDRIGER
K
OPIENZAHL
.
85
4.3
P
RODUKTION
VON
P
LASMID
-DNA
DURCH
H
OCHZELLDICHTEKULTIVIERUNGEN
IM
S
ATZBETRIEB
.
90
4.3.1
KULTIVIERUNGEN
IM
HALBSYNTHETISCHEN
PMH/2(+)-MEDIUM
.
92
4.3.2
SATZKULTIVIERUNGEN
IN
SYNTHETISCHEN
MEDIEN
IM
7
L-BIOREAKTOR
.
106
4.3.2.1
M9-MIMMALMEDIUM
.
107
4.3.2.2
SYNTHETISCHES
GLYCERINMEDIUM
OHNE
AMMONIUMCHLORID
.
111
4.3.2.3
SYNTHETISCHES
GLYCERINMEDIUM
MIT
HARNSTOFF
.
115
4.3.2.4
SYNTHETISCHES
GLYCERINMEDIUM
MIT
HEXAMETAPHOSPHAT
.
119
4.3.2.5
SYNTHETISCHES
GLYCERINMEDIUM
MIT
1
G
L'
1
AMMONIUMCHLORID
.
125
4.3.2
6
SYNTHETISCHES
GLYCERINMEDIUM
MIT
2
G
L
'
1
AMMONIUMCHLORID
.
128
4.3.2.7
SYNTHETISCHES
GLYCERINMEDIUM
MIT
3
G
L
'
1
AMMONIUMCHLORID
.
137
4.3.2.8
SYNTHETISCHES
GLYCERINMEDIUM
MIT
4
G
L
'
'
AMMONIUMCHLORID
.
139
4.3.3
VERGLEICH
DER
KULTIVIERUNGEN
IM
7
L-BIOREAKIOR
.
143
4.3.4
PRODUKTION
VON
PLASMID-DNA
IM
GRAMM-MASSSTAB
.
147
5
ZUSAMMENFASSUNG
150
6
LITERATURVERZEICHNIS
_
154
7.1
S
YMBOLE
UND
A
BKUERZUNGEN
.
170
7.1.1
FORMELZEICHEN
.170
7.1.2
GRIECHISCHE
FORMELZEICHEN
.
171
7.1.3
ABKUERZUNGEN
.
172
7.2
C
HEMIKALIEN
.
173
7.3
G
ERATE
.
174
8
CURRICULUM
VITAE
_
176
9
SCHRIFTENVERZEICHNIS
_
177 |
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