Experimentelles Modell zur Analyse von Signalwegen in ziliierten und nicht-ziliierten Zellen:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Köln
[2017]
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG........................................................................................................................................13
1.1 AUFBAU VON
ZILIEN............................................................................................................................13
1.2 FUNKTION VON
ZILIEN..........................................................................................................................16
1.2.1 DER HEDGEHOG-SIGNALWEG (HHJ
..........................................................................................
16
1.2.2 WINGLESS/INTL-SIGNALTRANSDUKTION
(WNT)..........................................................................
17
1.2.3 PDGF-SIGNALWEG UND
ZELLZYKLUS.........................................................................................
18
1.3 DIE ZILIAERE HYPOTHESE UND DIE AUTOSOMAL-DOMINANTE POLYZYSTISCHE
NIERENERKRANKUNG
.....
19
1.4 ZILIEN UND
TUMORGENESE................................................................................................................
20
1.5 ZIEL DER
ARBEIT.................................................................................................................................
22
2 MATERIAL UND
METHODEN..............................................................................................................23
2.1 M
ATERIAL............................................................................................................................................23
2.1.1
ZELLKULTUR.............................................................................................................................23
2.1.2
TRANSFEKTION........................................................................................................................23
2.1.3
IMMUNFLUORESZENZ..............................................................................................................24
2.1.4 RNA-INTERFERENZ (RNA SILENCING;
RNAI)..............................................................................
24
2.1.5 QUANTITATIVE POLYMERASEKETTENREAKTION
(QPCR)...............................................................24
2.1.6 EXPERIMENT ZUR
MAP-KINASE-AKTIVITAET...............................................................................
25
2.1.7 SDS-PAGE (SODIUMDODECYLSULFAT-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE) UND
IMMUNOBLOT
(WESTERNBLOT)..................................................................................................................................25
2.1.8 ANTIKOERPER FUER WESTERNBLOT UND
IMMUNFLUORESZENZ.........................................................26
2.2 M
ETHODEN........................................................................................................................................
26
2.2.1
ZELLKULTUR.............................................................................................................................26
2.2.2 TRANSIENTE TRANSFEKTION VON
ZELLEN...................................................................................
27
2.2.3 FAERBUNG FUER IMMUNFLUORESZENZANALYSE
(IMMUNOSTAINING)................................................30
2.2.4 RNA-INTERFERENZ
(RNAI).....................................................................................................
31
2.2.5 EXPERIMENT ZUR
MAP-KINASE-AKTIVITAET...............................................................................
34
2.2.6 SDS-PAGE (SODIUMDODECYLSULFAT-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE) UND
IMMUNOBLOT
(WESTERNBLOT)..................................................................................................................................35
3
ERGEBNISSE......................................................................................................................................
37
3.1 INDUKTION DER ZILIOGENESE DURCH SERUM-ENTZUG
...........................................................................
37
3.2 OPTIMIERUNG DER SIRNA-TRANSFEKTION IN HTERT-RPEL-ZELLEN
3.3 SIRNA-WIRKUNG AUF DIE ZILIOGENESE IN HTERT-RPEL-ZELLEN
......................................................
40
3.4 BESTAETIGUNG DER CEP164-SIRNA-EFFIZIENZ DURCH QPCR
..............................................................
46
3.5 ERHOEHTE BASALE P38-AKTIVITAET NACH ABLATION VON
ZILIEN............................................................49
3.6 ANGIOTENSIN INDUZIERTE PHOSPHORYLIERUNG VON P44/42 (ERK1/2) IN
ZILIIERTEN ZELLEN
REDUZIERT....................................................................................................................................................
50
3.7 PDGFBB-INDUZIERTE PHOSPHORYLIERUNG VON P44/42 (ERK1/2) IN ZILIIERTEN
ZELLEN VERSTAERKT.. 51
3.8 ZILIEN NEHMEN SCHEINBAR KEINEN EINFLUSS AUF DEN EGF-SIGNALWEG
..........................................
52
4
DISKUSSION......................................................................................................................................53
5
ZUSAMMENFASSUNG.......................................................................................................................57
6
LITERATURVERZEICHNIS.....................................................................................................................
58
7
LEBENSLAUF.....................................................................................................................................68
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