Mutationen im FGFR3-Onkogen sind ein unabhängiger molekularer Marker für längeres tumorspezifisches Überleben in Patienten mit Urothelkarzinomen des oberen Harntrakts:
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS:
1 einleitung 3
1.1 Anatomie der oberen Harnwege 3
1.2 Epidemiologie 4
1.3 ätiologie 4
1.4 Histopathologie des Urothelkarzinoms des oberen Harntrakts 9
1.4.1 Lokalisation und Verteilung 9
1.4.2 Morphologie und Histologie. 10
1.4.3 TNM-Klassifikation und Grading von Karzinomen des Nierenbeckens und des
Harnleiters 15
1.5 Molekulargenetik des Urothelkarzinoms 17
1.5.1 Deletion des Chromosoms 9 17
1.5.2 Mutation des Tumor-Suppressor-Gens p53 18
1.5.3 Defekte der Mismatch-Repair-Proteine und Mikrosateüiteninstabilität 18
1.5.4 Methylierung von Promotorregionen 20
1.5.5 Mutationen der Rezeptortyrosinkinasen 21
1.5.6 Zusammenfassung von Studien am oberen Harntrakt 22
1.6 Fragestellung 25
2 material 26
2.1 msi- und loh-analyse 26
2.1.1 Daten des Patientenkollektivs. 26
2.1.2 Laborgeräte 27
2.1.3 Chemikalien und Enzyme 28
2.1.4 Puffer und Lösungen 29
2.1.5 Verwendete Primer. 34
2.2 SNaPSHOT-SEQUENZIERUNG DES FGFR3-GENS 35
2.2.1 Daten des Patientenkollektivs. 35
2.2.2 Laborgeräte, Chemikalien und Lösungen 35
3 METHODEN 36
3.1 Gewinnung von DNA aus Paraffinmaterial 36
3.1.1 Herstellung von Paraffinschnitten 36
3.1.2 Entparafßnieren der Gewebeschnitte 37
3.1.3 HE-Färbung der Schnitte 37
3.1.4 Mikrodissektion der Tumorareale 38
3.1.5 Proteinase-K-Verdau und DNA-Isolierung 38
3.2 Techniken für die MSI-und LOH-Analyse 40
3.2.1 Ampliflkation von DNA mittels PCR-Technik. 40
3.2.2 Anwendung der PCR für die MSI und LOH-Analyse 41
3.2.3 Polyacrylamid-Gel-Elektrophorese(PAGE) 44
3.2.4 Silberfärbung von PAA-Gelen 45
3.2.5 Interpretation des Bandenmusters von PAA-Gelen 46
3.3 Techniken für die SNaPshot-Sequenzbruno 50
3.3.1 Methode der SNaPshot-Sequenzierung 50
3.3.2 Auswertung der Daten 53
3.3.3 Statistische Auswertung 54
4 ERGEBNISSE SS
4.1 Ergebnisse der Untersuchuno auf MiKROSATELUTENiNSTABiLrrÄT 55
4.1.1 MikrosateUiteninstabilität im ersten Patientenkollebiv 55
4.1.2 MikrosateUiteninstabilität im zweiten Patientenkollekth 56
4.2 Ergebnisse der LOH-Analyse im ersten Patientenkollektiv 58
4.3 Ergebnisse der FGFR3- SNaPshot-Sequenzieruno des zweiten Patientenkollektivs 60
4.3.1 Analysen beschreibender und univarianter Daten 61
4.3.2 Analyse mehrdimensionaler Daten 64
5 DISKUSSION - 68
5.1 Bedeutung von MSI in Karzinomen des oberen Harntrakts 68
5.1.1 Geringe MSI-Rate im ersten Parientenkollektiv 71
5.1.2 Durchschnittliche MSI-Rate im zweiten Patientenkollektiv 73
5.2 Bedeutung von LOH 75
5.3 bedeutung von fofr3-mutationen in verschiedenen tumorentrräten 75
5.4 Bedeutung von FGFR3-Mutationen in Karzinomen des oberen Harntrakts 78
5.5 Zusammenfassung und Ausbuck 80
6 literaturverzeichnis 82
7 ANHANG-—_. 91
7.1 Abkürzungsverzeichnis 91
7.2 Danksagung 93
7.3 Lebenslauf 94
|
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INHALTSVERZEICHNIS:
1 einleitung 3
1.1 Anatomie der oberen Harnwege 3
1.2 Epidemiologie 4
1.3 ätiologie 4
1.4 Histopathologie des Urothelkarzinoms des oberen Harntrakts 9
1.4.1 Lokalisation und Verteilung 9
1.4.2 Morphologie und Histologie. 10
1.4.3 TNM-Klassifikation und Grading von Karzinomen des Nierenbeckens und des
Harnleiters 15
1.5 Molekulargenetik des Urothelkarzinoms 17
1.5.1 Deletion des Chromosoms 9 17
1.5.2 Mutation des Tumor-Suppressor-Gens p53 18
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1.5.6 Zusammenfassung von Studien am oberen Harntrakt 22
1.6 Fragestellung 25
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2.1.2 Laborgeräte 27
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2.2 SNaPSHOT-SEQUENZIERUNG DES FGFR3-GENS 35
2.2.1 Daten des Patientenkollektivs. 35
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3.1 Gewinnung von DNA aus Paraffinmaterial 36
3.1.1 Herstellung von Paraffinschnitten 36
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3.1.4 Mikrodissektion der Tumorareale 38
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3.3.1 Methode der SNaPshot-Sequenzierung 50
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4 ERGEBNISSE SS
4.1 Ergebnisse der Untersuchuno auf MiKROSATELUTENiNSTABiLrrÄT 55
4.1.1 MikrosateUiteninstabilität im ersten Patientenkollebiv 55
4.1.2 MikrosateUiteninstabilität im zweiten Patientenkollekth 56
4.2 Ergebnisse der LOH-Analyse im ersten Patientenkollektiv 58
4.3 Ergebnisse der FGFR3- SNaPshot-Sequenzieruno des zweiten Patientenkollektivs 60
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5.1 Bedeutung von MSI in Karzinomen des oberen Harntrakts 68
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5.5 Zusammenfassung und Ausbuck 80
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