Untersuchungen zur Eignung des Limulus-Amöbozyten-Lysat-Tests (LAL) und eines zellkulturbasierten Zytokin-Immunassays zur Messung luftgetragener Endotoxine:
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2001
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Autor: Stark, Marcus
Jahr: 2001
Inhaltsverzeichnis
Abküizungsverzeichnis
1 EINLEITUNG
2 LITERATUR
2.1 endotoxine 6
2.1.1 Definitionen 6
2.1.2 Entdeckung 6
2.1.3 Aufbau und Struktur 7
2.1.4 Herstellung von Endotoxinen im Labor 9
2 3. Wirkung von Endotoxinen 10
23 verfahren zur diagnostik und quantifizierung von endotoxinen bzw.
pyrogenen 20
2.3.1 Der Limulus Amöbozyten Lysat-Test 20
2.3.2 Kaninchen-Test 29
2.3.3 Modelle mit humanem Vollblut 30
2.3.4 Modelle mit humaner Zellkultur 32
2.3.5 Andere Verfahren 35
2.4 Verfahren zum Nachweis luftgetragener Endotoxine 37
2.4.1 Sammlung von Endotoxinen 37
2.4.2 Extraktion von Endotoxinen 39
2.4.3 deutsche und europäische methodenempfehlungen zum nachweis
luftgetragener Endotoxine 41
2.5 Vorkommen luftgetragener Endotoxine 42
2.5.1 Gram-negative Bakterien 42
2.5.2 Endotoxine 47
3 MATERIAL UND METHODEN_____________________________________________50
3.1 Standortuntersuchungen 50
3.1.1 Beschreibung der MEasTANDORTE 50
3.12 Vorbereitung der Probennahme 54
3.1.3 Durchführung der Messungen 56
31-4 Probenaufarbeitung und-Auswertung 58
3 -5 Zellkultur m
3-2 Laborversuche **
3 -2- ¦ Herstellung von Endotoxinlösungen aus 12 definierten Bakterienstämmen 68
3-2.2 Ermittlung des Gehalts an Hydroxymyristinsäure in den 12 Endotoxinlösungen
mittels High Pressure Liquid Chromatography (HPLC) 71
3-2-3 Laborversuche mit dem kinetisch-chromogenen LAL-Test 75
3-2.4 Laborversuche mit dem Zytokinassay 77
3J Statistische Methoden 78
1_ERGEBNISSE_____________________________________________________________ 80
41 Ergebnisse der Standort-Untersuchungen 80
41 I Ergebnisse der Messungen im Broilermaststall 80
4- -2 Ergebnisse der Messungen im Textil werk **
*- -3 Ergebnisse der Messungen im Legehennenstall 88
4- -4 Ergebnisse der Messungen im Abferkelstall 92
41-5 Ergebnisse der Messungen im Ferkelaufzuchtstall 97
4-l-6 Ergebnisse der Messungen im MOllbunker einer Müllverbrennungsanlage 101
4-l-7 Ergebnisse der Messungen in der Anlieferungshalle Kompostwerk 105
42 Ergebnisse der Laborversuche 109
4-2l Ergebnisse der Herstellung von 12 Endotoxinlösungen aus definierten
Bakterienstämmen 109
4-2.2 Ergebnisse der Endotoxinmessungen mittels HPLC 1H
4-2-3 Ergebnisse der Laborversuche mit dem kinetisch-chromogenen LAL-Test 116
4-2-4 Zytokinassay 128
LJHSKUSSION ___________________________________________________________J33
511 mlthodendiskussion 133
51 ¦ auswahl der mebstandorte 133
51-2 probennahme 134
51-3 llmulusamöbozytenlysat-test 135
5-!-4 Zytokinassay 136
sl-5 Herstellung der Endotoxinlösungen 137
sl-6 high pressure uquff) chromatography (hplc) 138
5-2 Ergebnisdiskussion 139
5.2.1 Ergebnisse der Standortmessungen 139
5.2.2 Ergebnisse der Laborversuche 143
5_5 Schlussfolgerungen: 146
6 ZUSAMMENFASSUNG 147
7 SUMMARV 149
8 LITERATURVERZEICHNIS__________________________ 151
9 AISHANG 167
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