Grundlagen des T-Zellgedächtnisses für Interleukin-4:
Gespeichert in:
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| Format: | Mikrofilm Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2003
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| Ausgabe: | [Mikrofiche-Ausg.] |
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| Beschreibung: | Berlin, Humboldt-Univ., Diss., 2003 |
| Beschreibung: | 82 Bl. Ill., graph. Darst. |
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INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG 6
1.1. STIMULATION VON TH-ZELLEN 7
1.2. TH1/TH2-DIFFERENZIERUNG 7
1.3. DAS ZYTOKINGEDAECHTNIS DER TH-ZELLE 9
1.4. FUNKTION VON TRANSKRIPTIONSFAKTOREN FUER DAS ZYTOKINGEDAECHTNIS 10
1.5. FUNKTION VON EPIGENETISCHEN MODIFIKATIONEN FUER DAS
ZYTOKINGEDAECHTNIS 13
1.6. ZIELE DIESER ARBEIT 15
2. MATERIAL & METHODEN 16
2.1. MAEUSE 16
2.2. ZELLKULTUR 16
2.2.1. TH1/TH2-DIFFERENZIERUNG 16
2.3. MAGNETISCHE ZELLSORTIERUNG 17
2.3.1. SORTIERUNG NAIVER TH ZELLEN 17
2.3.2. SORTIERUNG T-ZELL-DEPLETIERTER APC 17
2.3.3. ZELLULAERE AFFINITAETSMATRIX ZUR ISOLIERUNG LEBENDER IFNY ,
IL-4 UND IL-10 PRODUZENTEN 18
2.4. IMMUNFLUORESZENZFAERBUNGEN 18
2.4.1. ANTIKOERPER 18
2.4.2. FAERBUNG VON ZELLOBERFLAECHENMOLEKUELEN 19
2.4.3. INTRAZELLULAERE FAERBUNG VON ZYTOKINEN 19
2.4.4. INTRAZELLULAERE FAERBUNG DES TRANSKRIPTIONSFAKTORS GATA-3 20
2.4.4. MARKIERUNG MIT 5-(UND 6-) CARBOXYFLUORESZEIN-DIACETAT-
SUCCINIMIDYLESTER (CFDA-SE) 20
2.5. DURCHFLUSSZYTOMETRIE 21
2.6. METHYLIERUNGSANALYSE DURCH DIE BISULPHITMETHODE 21
2.7. AFFYMETRIX-GENCHIPANALYSE 22
2.8. GATA-3-WESTERN BLOT 23
3
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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2.9. TRANSFEKTION VON PHOENIXZELLEN 23
3. ERGEBNISSE 24
3.1.
_MODULATION DER TH-ZELLDIFFERENZIERUNQ_24
3.1.1. DIE ZELLULAERE AFFINITAETSMATRIX 24
3.1.1.1. ETABLIERUNG DER ZELLULAEREN AFFINITAETSMATRIX FUER IFNY 25
3.1.1.2. EXPRESSIONSKINETIK VON IFNY WAEHREND DER RESTIMULATION 26
3.1.1.3. KINETIK DER SEKRETIONSZEIT FUER IFNY 27
3.1.1.4. KORRELATION DER FAERBUNG VON SEZERNIERTEN UND VON
INTRAZELLULAEREN ZYTOKINEN 29
3.1.2. STABILITAET DER DIFFERENZIERUNG VON TH2- ZELLPOPULATIONEN 30
3.1.3. NACH KURZZEITIGER POLARISIERUNG IST DIE DIFFERENZIERUNG VON TH1-
ZELLPOPULATIONEN KONVERTIERBAR 33
3.2.
_ANALYSE VON DIFFERENTIELL EXPRIMIERTEN GENEN IN TH1- UND TH2-
POLARISIERTEN LANAZEITKULTUREN
_M
3.2.1. ZYTOKINPROFIL DER TH1- UND TH2-DIFFERENZIERTEN LANGZEITKULTUREN
35
3.2.2. DIFFERENTIELL EXPRIMIERTE GENE IN DEN TH1- UND
TH2-DIFFERENZIERTEN
LANGZEITKULTUREN 37
3.3.
_EXPRESSIONSANALVSEN DES TRANSKRIPTIONSFAKTORS GATA-3_39
3.3.1. DIE VERSTAERKTE EXPRESSION VON GATA-3 KORRELIERT NICHT DIREKT MIT
DER
IL-4 PRODUKTION IN TH2-ZELLEN
P40
3.3.2. ANALYSE DER GATA-3 EXPRESSION AUF EINZELZELLEBENE
DURCH INTRAZELLULAERE FAERBUNG 41
3.3.2.1. ETABLIERUNG DER INTRAZELLULAEREN FAERBUNG FUER GATA-3 AUF
TRANSFIZIERTEN PHOENIXZELLEN ' 41
3.3.2.2. NACHWEIS DER GATA-3 EXPRESSION DURCH INTRAZELLULAERE
FAERBUNG IN TH-ZELLEN 43
3.4.
_ANALYSE DER PROLIFERATION UND DER EXPRESSIONSSTABILITAET VON
IL-4- UND IL-10- PRODUZENTEN
EX VIVO_ 45
3.4.1. DIE EXPRESSION VON IL-4 UND IL-10 BEEINFLUSST DIE PROLIFERATION
VON TH-ZELLEN NICHT 49
4
3.4.2. DIE EXPRESSION VON IL-4 IST IN DIFFERENZIERTEN TH-ZELLEN
WEITGEHEND IL-4 UNABHAENGIG 49
3.4.3. DIE EXPRESSION VON IL-10 IST IN DIFFERENZIERTEN TH-ZELLEN
WEITGEHEND IL-4 ABHAENGIG 51
3.5.
_PRAEGUNG DES ZVTOKINQEDAECHTNISSES_52
3.5.1. DER EINTRITT IN DIE S-PHASE DES ERSTEN ZELLZYKLUS IST
NOTWENDIG FUER DIE EXPRESSION VON IL-4 UND IL-10 53
3.5.2. ANALYSE DES EINFLUSSES VON INHIBITOREN AUF DIE ZYTOKINEXPRESSION
IN AKTIVIERTEN TH-ZELLEN 55
3.6.
EPIOENETISCHE MODIFIKATIONEN IN ZVTOKINQENEN_57
3.6.1. EINE REGION I AM 3'ENDE DES IL-4 GENES IST VOLLSTAENDIG METHYLIERT
57
3.6.2. DER PROMOTOR VON IL-4 (REGION II) IST IN NAIVEN UND TH2
POLARISIERTEN ZELLEN DEMETHYLIERT 58
3.6.3. DIE REGION III IM ERSTEN INTRON DES IL-4 GENES IST NUR IN
TH2-ZELLEN DEMETHYLIERT 59
3.6.4. DIE DEMETHYLIERUNG DER CIS- REGION KORRELIERT MIT DER
EXPRESSION VON IL-4 59
3.6.5. DIE CIS-REGION IST HOCHKONSERVIERT INNERHALB VERSCHIEDENER
SPEZIES UND BESITZT ZWEI GATA-3-BINDUNGSSTELLEN 60
4. DISKUSSION 62
4.1. STABILITAET DER ZYTOKINEXPRESSION 62
4.2. DAS ZYTOKINGEDAECHTNIS: ETABLIERUNG DURCH TRANSKRIPTIONSFAKTOREN 65
4.3. DAS ZYTOKINGEDAECHTNIS: ETABLIERUNG DURCH EPIGENETISCHE
MODIFIKATION 70
4.4. MODELL DER ETABLIERUNG DES IL-4 ZYTOKINGEDAECHTNISSES 74
5. ZUSAMMENFASSUNG 77
6. LITERATURVERZEICHNIS 78
5 |
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